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姜黃素對(duì)大鼠脊髓損傷后免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)作用研究

發(fā)布時(shí)間:2020-10-24 13:47
   目的:通過對(duì)脊髓損傷(Spinal cord injury,SCI)大鼠模型進(jìn)行姜黃素(Curcumin,Cur)干預(yù),觀察姜黃素對(duì)SCI后大鼠模型的運(yùn)動(dòng)功能、痛覺功能的變化,以及脊髓組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響,并對(duì)脾臟中T細(xì)胞、NK細(xì)胞、外周血中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),初步明確姜黃素對(duì)SCI后大鼠免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。方法:應(yīng)用Allen’s法制備大鼠SCI模型。本研究將45只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)、姜黃素組(Cur),每組各15只。Cur組術(shù)后3天內(nèi)腹腔注射姜黃素溶液,給藥濃度為100 mg/kg,Sham組和Model組分別注射生理鹽水。7d、14d及21d后分別進(jìn)行BBB評(píng)分(運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià))、熱痛覺分析、機(jī)械痛覺分析和脊髓組織形態(tài)學(xué)觀察。并同步于7d、14d和21d在三組大鼠中各取3只大鼠行脊髓和脾臟取材。流式細(xì)胞術(shù)分別觀察7d、14d及21d大鼠脾臟組織中輔助T淋巴細(xì)胞、殺傷T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的數(shù)量變化,外周血中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量變化。免疫熒光染色分別觀察7d、14d及21d大鼠脊髓組織中巨噬細(xì)胞M1型和M2型表達(dá)量變化,從而探討姜黃素對(duì)SCI后大鼠的免疫細(xì)胞作用。結(jié)果:(1)SCI后大鼠后肢出現(xiàn)癱瘓現(xiàn)象,7d后BBB分值最低,14d后BBB評(píng)分逐漸上升,到21d Cur組BBB評(píng)分后肢功能有明顯恢復(fù),與Model組相比有顯著性差異(P0.05)。(2)SCI后7d,Cur組比Model組熱痛覺反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng),與Model組相比有顯著性差異(P0.05)。在術(shù)后14d及21d,Model組與Cur組比較,Model組大鼠對(duì)熱刺激的反應(yīng)時(shí)間明顯縮短,腹腔注射Cur后承受能力變強(qiáng),由此可知,Cur可提高大鼠SCI后造成的對(duì)熱刺激痛的承受能力。(3)大鼠SCI后7d,Cur組對(duì)機(jī)械刺痛的承受力度明顯增強(qiáng)。SCI第14d及21d,Cur組與Model組相比,承受機(jī)械痛能力顯著增強(qiáng),表明Cur可顯著改善SCI后機(jī)械刺激痛的承受能力。(4)在SCI后7d,Model組脊髓組織失去典型形態(tài),出現(xiàn)局灶性壞死空洞現(xiàn)象,各時(shí)間點(diǎn)Cur組和Model組相比,炎性浸潤(rùn)和空泡壞死情況都明顯減輕。(5)SCI后7d,Cur組外周血中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和脾臟中殺傷T淋巴細(xì)胞比例均顯著降低;在損傷后14d和21d,Cur組中性粒細(xì)胞較Model組均顯著降低。(6)免疫熒光結(jié)果顯示SCI損傷處7d、14d和21d Cur組比Mode組iNOS的表達(dá)量均顯著降低,CD206表達(dá)量均顯著升高。結(jié)論:(1)姜黃素能有效提高SCI后大鼠的BBB得分,提高痛覺閾值并促進(jìn)受損組織的修復(fù)。(2)姜黃素可能通過降低SCI后體內(nèi)免疫器官中中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和殺傷性T淋巴細(xì)胞的比例,在脊髓損傷部位減少M(fèi)1型巨噬細(xì)胞數(shù)量增加M2型巨噬細(xì)胞,從而降低SCI后的反應(yīng)性炎癥,進(jìn)而提高SCI后的疼痛耐受性。
【學(xué)位單位】:延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:R285.5
【文章目錄】:
中英文縮略詞對(duì)照表
摘要
Abstract
引言
第一章 大鼠SCI模型行為學(xué)分析和脊髓HE染色觀察
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 姜黃素配制
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        1.4 技術(shù)路線圖
        1.5 實(shí)驗(yàn)分組
        1.6 大鼠脊髓損傷模型建立
        1.7 大鼠BBB評(píng)分
        1.8 大鼠熱痛覺檢測(cè)
        1.9 大鼠機(jī)械痛覺測(cè)定
        1.10 脊髓組織切片HE染色
        1.11 數(shù)據(jù)處理
    第一章實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 大鼠脊髓損傷后行為學(xué)觀察
        2.2 大鼠行為學(xué)評(píng)價(jià)-BBB評(píng)分
        2.3 大鼠熱痛覺測(cè)試結(jié)果
        2.4 大鼠機(jī)械痛測(cè)試結(jié)果
        2.5 大鼠脊髓切片HE染色結(jié)果
第二章 姜黃素對(duì)大鼠脊髓損傷后免疫細(xì)胞的影響
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 手術(shù)器械
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        1.4 技術(shù)線路圖
        1.5 大鼠脊髓損傷模型建立
        1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)
        1.7 免疫熒光觀察
        1.8 數(shù)據(jù)處理
    第二章實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 五種免疫細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)
            2.1.1 五種免疫細(xì)胞在姜黃素處理 7d后的變化
            2.1.2 五種免疫細(xì)胞在姜黃素處理 14d后的變化
            2.1.3 五種免疫細(xì)胞在姜黃素處理 21d后的變化
        2.2 大鼠脊髓免疫熒光檢測(cè)
            2.2.1 姜黃素處理 7d后CD206和i NOS的變化
            2.2.2 姜黃素處理 14d后CD206和i NOS的變化
            2.2.3 姜黃素處理 21d后CD206和i NOS的變化
分析與討論
結(jié)論
展望
文章創(chuàng)新性
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間研究成果

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