目的建立小鼠負(fù)重游泳模型,比較幾種物質(zhì)的抗疲勞效果,并從能量代謝、抗氧化功能及相關(guān)蛋白表達(dá)方面分析山葵樹葉提取物抗疲勞效果的作用機(jī)制,為今后抗疲勞制劑的研發(fā)開辟新途。方法1.幾種物質(zhì)抗疲勞效果的比較:選擇麥芽糊精、人參葉提取物、山葵樹葉對小鼠進(jìn)行14d灌胃,小鼠尾部負(fù)重,負(fù)重重量為小鼠體重的2%,記錄小鼠自下水至死亡的時間,作為抗疲勞效果的評價指標(biāo),維持游泳時間最長的實驗組所干預(yù)的物質(zhì)作為抗疲勞效果最佳的物質(zhì)。分別灌胃山葵樹葉水懸液(500 mg/kg·bw、1000 mg/kg·bw及2000 mg/kg·bw)后進(jìn)行負(fù)重游泳實驗,由此通過優(yōu)化得出最佳灌胃劑量,為后續(xù)山葵樹葉醇提取及相關(guān)生化指標(biāo)測定做準(zhǔn)備。2.山葵樹葉提取物的提取及有效成分的初步分析:將新鮮山葵樹葉洗凈烘干、打碎過篩,以溶劑提取,過濾、真空濃縮、冷凍干燥得棕褐色粉末。以小鼠自下水至死亡的時間作為提取效果的“金標(biāo)準(zhǔn)”。采用FRAP法、福林酚法、鋁離子顯色法及苯酚-硫酸法測定山葵樹葉提取物的總抗氧化力、總酚、植物類黃酮及多糖的含量;通過國際法急性毒性試驗檢測山葵樹葉提取物的毒性。3.山葵樹葉提取物抗疲勞機(jī)制初步探討:設(shè)置正常對照、游泳對照及提取物組(320 mg/kg)對小鼠灌胃14d,游泳對照組及提取物組無負(fù)重游泳90 min,取血及剪下小鼠肝、腓腸肌組織,用生理鹽水沖洗、冰上均勻分裝至凍存管內(nèi),液氮速凍后-40℃儲存。分別對血漿中葡萄糖(Glu)含量、血漿中乳酸(Lac)含量、血漿中尿素氮(BUN)含量、血漿中還原型谷胱甘肽(GSH)含量、血漿中游離脂肪酸(NEFA)含量;組織內(nèi)的糖原、ATP酶活性、游離脂肪酸(NEFA)含量;血漿和組織中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性測定、丙二醛(MDA)含量測定、乳酸脫氫酶(LDH)活性測定、總抗氧化力(T-SOD)測定及過氧化氫酶(CAT)活性測定等能量代謝和抗氧化功能相關(guān)指標(biāo)。以及采用酶聯(lián)免疫(ELISA)法定量檢測相關(guān)抗疲勞蛋白ORM1及轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)CCR5的蛋白表達(dá)量。結(jié)果1.通過記錄小鼠下水至死亡時間,以空白組游泳時間為對照,得出山葵樹葉組能夠顯著延長負(fù)重運動時間(P0.05),且游泳時間長于人參葉提取物組及西洋參提取物組;在山葵樹葉濃度梯度懸液對小鼠灌胃后抗運動疲勞實驗中,得出中劑量組(1000 mg/kg)能夠較好的改善小鼠運動力竭現(xiàn)象。2.山葵樹葉提取物通過混合溶劑提取,產(chǎn)率為(32.37±1.71)%,且山葵樹葉提取物較山葵原料相比,小鼠游泳時間顯著增加19.27%(p0.05),而山葵樹葉提取殘渣對小鼠在水中持續(xù)游泳不能發(fā)揮出增加耐力的作用;通過分析山葵樹葉提取物與殘渣中的相關(guān)有效成分,顯示殘渣中有效成分含量極低,總抗氧化力測定結(jié)果顯示山葵樹葉提取物中的比殘渣中的高出137倍,山葵樹葉提取物中黃酮含量高出1211倍,而總多酚含量是殘渣中的129倍。急性毒性試驗顯示山葵樹葉提取物實際無毒效應(yīng)。3.山葵樹葉提取物在能量調(diào)節(jié)及抗氧化系統(tǒng)中均產(chǎn)生顯著影響。山葵樹葉提取物對小鼠器官重量沒有明顯影響,血漿指標(biāo)中,山葵樹葉提取物組中測定的Glu、BUN、Lac、GSH及NEFA含量與游泳對照組相比都存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),其中提取物組中測定的BUN含量顯著降低,而NEFA含量顯著升高(P0.01)。小鼠體內(nèi)貯存的肌、肝糖原在運動過程中均被大量消耗,補充提取物后,糖原水平有所升高(P0.05),但未能達(dá)到運動前的水平。Na~+K~+-ATP酶在小鼠肝臟中活性高,補充后,酶活性較游泳對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而肌組織中ATPase活性變化不顯著。補充山葵樹葉提取物后,血漿及組織中測定的SOD、CAT、GSH-Px活性呈現(xiàn)升高趨勢,其中肝組織中GSH-Px測定活性出現(xiàn)極顯著性升高(P0.01);而LDH具有分布特異性,血漿含有大量LDH,提取物組中LDH含量較游泳空白組相比明顯減少(P0.05);提取物組的MDA含量在血漿及肝組織中的均明顯低于游泳對照組的。隨著運動的發(fā)生,肝組織中ORM1基因表達(dá)及蛋白含量顯著增加,且轉(zhuǎn)導(dǎo)受體CCR5的表達(dá)也具有同樣的升高趨勢。原因可能是運動促使脂肪分解,提取物參與了脂肪代謝,同樣對糖代謝有調(diào)節(jié)作用,增加糖原合成、能量供應(yīng),對氧化應(yīng)激損傷具有一定保護(hù)作用。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)山葵樹葉具有良好的抗疲勞效果,其粗提物中富含相關(guān)抗氧化成分,其抗疲勞作用機(jī)制與能量代謝調(diào)節(jié)及抗氧化功能改善有關(guān),本研究結(jié)果為抗疲勞功能性食品的開發(fā)提供新的思路與途徑。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
個人簡歷
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 幾種物質(zhì)抗疲勞效果的比較
    1.材料與方法
    2.結(jié)果
    3.討論
第二部分 山葵樹葉提取物的提取及其有效成分的初步分析
    1.材料與方法
    2.結(jié)果
    3.討論
第三部分 山葵樹葉提取物抗疲勞機(jī)制初步探討
    1.材料與方法
    2.結(jié)果
    3.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2852939