目的探討中藥復(fù)方養(yǎng)正散結(jié)湯(Yangzheng Sanjie decoction,YZSJD)對(duì)胃癌干細(xì)胞(Gastric cancer stem cells,GCSCs)自我更新與分化的調(diào)控作用及其作用機(jī)制。方法通過無血清懸浮培養(yǎng)法分離GCSCs,采用Western Blot法檢測(cè)"干性"標(biāo)志CD44、Oct-4、Nanog、Sox-2及相關(guān)靶基因c-Myc、Ras的蛋白表達(dá);以細(xì)胞球連續(xù)傳代實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GCSCs自我更新能力;采用免疫熒光法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GCSCs分化情況;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)let-7a表達(dá)。結(jié)果分離出的球囊細(xì)胞能在無血清培養(yǎng)基中連續(xù)傳代,與親本細(xì)胞比較,球囊細(xì)胞"干性"標(biāo)志CD44、Oct-4、Nanog和Sox-2的表達(dá)均明顯升高(P0.01);與GCSCs比較,GCSCs貼壁分化24、48、72 h后其分化標(biāo)志CK18表達(dá)逐漸升高(P0.01)。與空白對(duì)照組比較,養(yǎng)正散結(jié)湯組中CD44、Oct-4、Nanog、Sox-2及c-Myc、Ras蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01),CK18、let-7a表達(dá)均顯著升高(P0.01)。空白對(duì)照組細(xì)胞球形成率為(16.46±0.32)%,養(yǎng)正散結(jié)湯1.0、2.0 mg·mL~(-1)濃度組細(xì)胞球形成率分別為(2.83±0.85)%、(0.17±0.15)%,與空白對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論養(yǎng)正散結(jié)湯能上調(diào)let-7a抑制其靶基因c-Myc、Ras表達(dá),抑制GCSCs自我更新、促進(jìn)其分化,這可能是養(yǎng)正散結(jié)湯發(fā)揮抗癌作用的機(jī)制之一。
【部分圖文】：

結(jié)果見圖1。人胃癌SGC-7901細(xì)胞株在無血清培養(yǎng)基中形成懸浮細(xì)胞球，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞球的細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，細(xì)胞球體積逐漸增大。2.2 GCSCs鑒定

結(jié)果見圖6。空白對(duì)照組細(xì)胞球形成率為（16.46±0.32)%,1.0、2.0 mg·mL-1養(yǎng)正散結(jié)湯組細(xì)胞球形成率分別為（2.83±0.85）%、（0.17±0.15）%，與空白對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果表明，養(yǎng)正散結(jié)湯能抑制GCSCs自我更新。圖3 GCSCs體外連續(xù)傳代（×400)

GCSCs體外連續(xù)傳代（×400)
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