目的:探討補肝健腰方對于大鼠腰椎間盤退變組織MMP-3、TIMP-1的影響。方法:將75只SD大鼠隨機抽取60只作為造模組,余下15只為假手術(shù)組。造模組給予大鼠腰椎間盤(L4/5)退變造模處理,造模成功后隨機分為:模型組、中藥組、強力霉素組、腰痹通組,每組15只,分別給予生理鹽水、補肝健腰方、強力霉素,腰痹通喂養(yǎng),假手術(shù)組只暴露椎間盤,不作退變處理,給予生理鹽水喂養(yǎng)。分別于術(shù)后藥物干預(yù)前、20天、40天分別收集大鼠腰椎間盤退變節(jié)段(L4/5)組織,標本采用HE染色后用200倍光學(xué)顯微鏡下對椎間盤組織進形組織形態(tài)學(xué)觀察,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測椎間盤組織中的MMP-3m RNA、TIMP-1m RNA的含量,免疫組織化學(xué)(IHC)法檢測椎間盤組織中的MMP-3、TIMP-1的含量。結(jié)果:1.造模后的大鼠腰椎間盤組織鏡下觀察在藥物干預(yù)前呈現(xiàn)退變改變,藥物干預(yù)后大鼠腰椎間盤組織得到修復(fù)改善;2.造模后大鼠腰椎間盤組織中的MMP-3、TIMP-1的含量表達增多,藥物干預(yù)后MMP-3、TIMP-1的含量表達顯著下降,MMP-3/TIMP-1的比值也下降,中藥組和強力霉素組效果相當,且優(yōu)于腰痹通組。結(jié)論:1.運用針刺大鼠腰椎間盤可成功制作成腰椎間退變模型,且模型的病理改變狀態(tài)與人類相似,該動物模型中MMP-3與TIMP-1的表達明顯上升。2.補肝健腰方與強力霉素能降低大鼠腰椎間盤退變模型的MMP-3與TIMP-1的表達,對于腰椎退變具有治療作用,補肝健腰方治療腰椎間盤作用與強力霉素作用相當,補肝健腰方能夠降低MMP-3/TIMP-1的比值,說明腰椎間盤退行性病變與MMP-3/TIMP-1的比值也有明顯關(guān)系,MMP-3/TIMP-1的比值越高說明腰椎退變越嚴重,比值越低,或越接近正常值說明腰椎間盤退變不嚴重或恢復(fù)良好。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

加 入 等 體 積 的 異 丙 醇 ， -20℃靜 置 20min， 再 經(jīng) 過 12000rpm， 15mi低 溫離 心，去上清，沉淀中加入 1ml75%乙醇（無菌 DEPC 處理水配制），儀器震蕩。又 12000rpm，5min 低溫離心，去上清，空氣干燥 5~10min。加入 50μl 無菌無酶水溶解沉淀。 紫外分光光度計測定濃度，吸取 2ul RNA 溶液于石英比色杯中，用無酶水定容至 100ul，在 260nm 與 280nm 處測其吸光度值，并計算其濃度跟純度。RNA 濃度（ng/ul）=A260*稀釋倍數(shù)*40，濃度在 500ng/ul-1000ng/ul，RNA 純度=OD260/OD280，比值在 1.8-2.0 之間均可3． RNA 的瓊 脂糖 凝膠 電泳電 泳 槽 用 3%的 雙 蒸 水 處理 0.5h； 配 制 １ %變 性 瓊 脂 糖凝 膠， 0.2g 瓊脂 糖 ，20ml 無 菌 DEPC 處 理 水 ，加 熱 至 瓊 脂 糖溶 解 ，冷至 60℃,加 入 0.5μlE（10mg/ml），混 勻 后 倒 膠 ；取 2μl 提 取 的 RNA，按 1:5 的 比 例與 loadinbuffer premix 混 勻 ， 170V 恒 壓 電 泳 ， 溴 酚 藍 前 沿 遷 移 至 凝 膠 總 長 2/3 處停止 電 泳 ；凝 膠成 像系 統(tǒng)下 觀察 。詳 見 圖 1

二、結(jié)果與分析結(jié)果造模后椎間盤組織形態(tài)學(xué)觀察 模 后飼 養(yǎng) 2 周 ， 取 標本 采用 HE 染色 后 200 倍光 學(xué)鏡 下預(yù) 前鏡 下觀 察術(shù) 組椎 間盤 髓 核 結(jié) 構(gòu) 完 整， 纖維 板和 軟 骨 細胞 分 層排 列中 藥組 、腰 痹通 組及 強力 霉素 組 可 見 纖維 板斷 裂髓 核 部 骨細 胞反 應(yīng)性 增生 。詳 見圖 2

鼠 第 20 天 驗 證 時 腰 椎 間 盤 組 織 形 態(tài) 學(xué) 觀 察 圖 （ A， 假 手藥 組 D， 腰 痹 通 組 E， 強 力 霉 素 組 ）天 鏡 下觀 察 組 纖 維 板 變 薄 ， 軟 骨 細 胞 有 規(guī) 則 地 增 生 ， 髓 核 處 髓 核 結(jié) 構(gòu) 仍 然 可 以 辨 認 。 模 型 組 纖 維 板 基 本 已 經(jīng) 亂 ， 還 可 形 成 骨 小 梁 。 髓 核 結(jié) 構(gòu) 消 失 。 中 藥 組 、 仍可 看 到 一 些 殘 留的 纖維 板 ，纖 維 板 局 部 有雜 亂的糊 可見 。詳 見圖 4
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本文編號：2851901