目的:研究復(fù)方當(dāng)歸注射液對對叔丁基過氧化氫(t-BHP)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(EA.hy926)氧化損傷的保護(hù)作用。方法:首先測定DPPH自由基及羥基自由基清除率,初步研究復(fù)方當(dāng)歸注射液的體外抗氧化能力;然后體外培養(yǎng)EA.hy926細(xì)胞,分為正常組、模型組(t-BHP組)和復(fù)方當(dāng)歸注射液處理組(各濃度復(fù)方當(dāng)歸注射液+t-BHP組),采用MTT法檢測各組細(xì)胞活力,試劑盒比色法檢測各組乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、還原性谷胱甘肽(GSH-Px)含量。結(jié)果:復(fù)方當(dāng)歸注射液清除DPPH及羥基自由基有顯著的清除效果,EC_(50)值分別為20.88μL/mL,0.8211μL/mL。對比正常組,t-BHP(600μmol/L)可顯著致EA.hy926細(xì)胞氧化損傷,經(jīng)復(fù)方當(dāng)歸注射液預(yù)處理可顯著提高EA.hy926細(xì)胞的活性,降低LDH釋放量和MDA含量,提高SOD和GSH-Px活力,并呈明確的濃度依賴性。結(jié)論:復(fù)方當(dāng)歸注射液對t-BHP誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用。
【部分圖文】：

不同濃度的復(fù)方當(dāng)歸注射液羥基自由基清除活性如圖1B所示，結(jié)果表明復(fù)方當(dāng)歸注射液對羥基自由基的清除活性隨濃度升高而增大，呈現(xiàn)濃度依賴性。應(yīng)用GraphPad Prism 7.04軟件處理復(fù)方當(dāng)歸注射液的量-效關(guān)系數(shù)據(jù)并計算其清除羥基自由基的EC50值為0.8211 mL/mL。2.3 復(fù)方當(dāng)歸注射液對EA.hy926細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用

與正常細(xì)胞組相比，模型組（t-BHP損傷組）SOD、GSH-Px活力明顯下降（P<0.01),MDA、LDH含量明顯上升（P<0.01）；與模型組（t-BHP損傷組）相比，復(fù)方當(dāng)歸注射液組SOD、GSH-Px活力顯著升高（P<0.01),MDA、LDH含量顯著下降（P<0.05,P<0.01）。結(jié)果見圖3。3 討論

近年來大量研究表明生物體內(nèi)過量的氧自由基及氧化應(yīng)激是導(dǎo)致心血管系統(tǒng)心力衰竭、缺血再灌注損傷的重要原因之一[10]。復(fù)方當(dāng)歸注射液作為當(dāng)歸、川芎、紅花為組分制成的中藥復(fù)方注射液，臨床上常用于心腦血管缺血性疾病的防治[6]，為闡明臨床上復(fù)方當(dāng)歸注射液的作用機制，本研究以DPPH自由基及羥基自由基清除法并進(jìn)一步在細(xì)胞水平建立氧化應(yīng)激損傷模型來系統(tǒng)研究復(fù)方當(dāng)歸注射液的體外抗氧化性能。DPPH自由基是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其可以捕獲其他的自由基[11]，對DPPH自由基的清除效果可以反映物質(zhì)的抗氧化能力。OH自由基能與絕大部分生物大分子物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，其反應(yīng)可能導(dǎo)致嚴(yán)重的組織損傷或細(xì)胞死亡[12]。因此，及時清除多余的OH自由基對保護(hù)機體的正常生命活動和生理代謝反應(yīng)具有重要作用。本研究結(jié)果顯示，復(fù)方當(dāng)歸注射液能有效地清除DPPH自由基和羥基自由基，具有一定的體外抗氧化活性。
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