紫花苜蓿(Medicago sativa L.),屬于苜蓿屬,豆科植物,又名―牧草之王‖,是一種多年生牧草作物,廣泛栽培于世界各地的溫帶地區(qū)。紫花苜蓿多糖(alfalfa polysaccharide)是從紫花苜蓿植株中提取出來的植物多糖。目前國內(nèi)外對紫花苜蓿多糖的研究主要集中在其莖葉部分,而對其地下部分的根部研究較少,為了全面地利用和開發(fā)苜蓿這一天然植物資源,本論文對紫花苜蓿根部的多糖進行純化,結(jié)構(gòu)修飾,并對其體外活性進行了研究。在本論文研究中,使用熱水提取法對紫花苜蓿根部的粗多糖進行提取,通過對sevage法和酶+sevage法去蛋白的比較,發(fā)現(xiàn)使用酶+sevage法1次即可將多糖中蛋白質(zhì)去除干凈,接著通過DEAE-52色譜柱和Sephadex G-200色譜柱分離純化得到兩個多糖組分DAPS-1和DAPS-2,兩者皆為棕黃色粉末。然后采用Na_2SeO_3/NHO_3的條件對DAPS-2進行硒化結(jié)構(gòu)修飾,得到Se-DAPS-2,硒含量為320μg/g。DAPS-1,DAPS-2和Se-DAPS-2(DAPSs)的化學結(jié)構(gòu)采用高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)、紫外光譜(UV)、傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)和核磁共振光譜(~1H NMR和~(13)CNMR)進行鑒定;首次采用高效液相色譜(HPLC),示差檢測器(IR)和氨基柱(NH_2)對苜蓿多糖的單糖組成進行分析。結(jié)果表明,DAPS-1分子量為10.0 KDa,由鼠李糖,木糖,阿拉伯糖,葡萄糖醛酸和葡萄糖組成,摩爾比為:1.00:3.19:2.67:5.44:5.10。DAPS-2分子量為15.8KDa,由鼠李糖,木糖,葡萄糖醛酸,甘露糖,葡萄糖和半乳糖組成,摩爾比為:1.21:1.49:3.49:3.11:2.73:1.00。而Se-DAPS-2相比于DAPS-2的分子量明顯降低,由15.8KDa降低到11.0 KDa。Se-DAPS-2的FT-IR光譜和~(13)C NMR光譜表明主要在Se-DAPS-2的C-6處發(fā)生了硒化反應。另外,采用掃描電鏡(SEM)和熱重分析(TGA)對DAPSs的表面形態(tài)和熱穩(wěn)定性進行研究。在苜蓿多糖的體外抗氧化活性試驗中,與DAPS-1和DAPS-2相比,Se-DAPS-2具有更好的對DPPH、ABTS自由基的清除作用,并且具有劑量依賴性。細胞毒活性的實驗表明,DAPS-1和Se-DAPS-2有一定的抗HepG-2腫瘤活性,并呈濃度依賴性,Se-DAPS-2的抗HepG-2腫瘤活性高于DAPS-1和DAPS-2。
【學位單位】：沈陽化工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

硒標準曲線

沈陽化工大學碩士學位論文 第四章 紫花苜蓿多糖的化學結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)Se-DAPS-2 主要官能團峰位， Se-DAPS-2 中，在 925cm-1和 840cm-1處出現(xiàn)了兩個新的吸收峰，分別歸屬為 C-O-Se 伸縮振動和 Se=O 不對稱振動。這些吸收峰表明，Se-DAPS-2中確實發(fā)生了硒化修飾反應[53]。4.8.4 DAPS-1、DAPS-2 和 Se-DAPS-2 的核磁光譜分析DAPS-1、DAPS-2 和 Se-DAPS-2 的結(jié)構(gòu)進一步使用核磁光譜進行鑒定。DAPS-1 的1H 和13C 譜圖如圖所示：

圖 4-7 DAPS-1 的13C NMR 譜圖Fig. 4-713C NMR spectrum of DAPS-1在碳譜中,異頭碳原子的共振出現(xiàn)在 90-110 ppm，相反，非異頭碳原子的共振出現(xiàn)在 60-85 ppm。高場區(qū)的 15-20 ppm 共振信號歸屬于鼠李糖的甲基。含有糖醛酸的多糖其羧基信號出現(xiàn)在低場區(qū)的 170-180 ppm 信號處[122]。由圖 4-7 可知, 16.5 代表了鼠李糖甲基的信號。 60.7-75.8 ppm 的信號范圍代表了DAPS-1 中的非異頭碳原子,信號范圍在 96.0-107.1 ppm 處是由于糖殘基中 C-2 到 C-6的共振引起的。 170.6-174.1 處的信號說明 DAPS-1 中存在糖醛酸。
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本文編號：2850716