目的探討中藥復(fù)方血管軟化丸通過miRNA-467b靶向脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)調(diào)控巨噬細(xì)胞,減少白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-6,IL-1β、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)等炎癥因子分泌和巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積,從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用與初步機(jī)制。方法將RAW264.7巨噬細(xì)胞隨機(jī)分為5組,即對(duì)照組、模型組、miR-467bmimic組、中藥高劑量含藥血清組、中藥低劑量含藥血清組;經(jīng)干預(yù)后,采用RT-PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞中pri-miR-467b和LPL mRNA表達(dá);采用高效液相色譜法檢測(cè)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平。連續(xù)4周高脂飼料(含脂肪21%、膽固醇0.15%)飼養(yǎng)ApoE-/-小鼠復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化模型,模型復(fù)制成功后,中藥高、低劑量組每日分別灌胃血管軟化丸86.4、21.6g/kg,連續(xù)給藥12周;對(duì)照組、模型組每日灌胃0.9%生理鹽水86.4g/kg。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)主動(dòng)脈LPL蛋白表達(dá)水平,RT-PCR檢測(cè)主動(dòng)脈pri-miR-467b和LPL mRNA表達(dá)水平;采用ELISA法檢測(cè)血清IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1水平。結(jié)果與對(duì)照組比較,模型組巨噬細(xì)胞pri-miR-467bmRNA表達(dá)水平和巨噬細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇(free cholesterol,FC)水平均明顯降低(P0.05),巨噬細(xì)胞內(nèi)LPL mRNA及其蛋白表達(dá)水平以及總膽固醇(total cholesterol,TC)、膽固醇酯(cholesterol ester,CE)水平均明顯升高(P0.05)。血管軟化丸能夠無劑量依賴性地升高巨噬細(xì)胞pri-miR-467bmRNA表達(dá)水平和巨噬細(xì)胞內(nèi)FC水平(P0.05),降低巨噬細(xì)胞中LPL mRNA及其蛋白表達(dá)水平以及TC、CE水平(P0.05)。血管軟化丸能夠升高主動(dòng)脈primiR-467bmRNA表達(dá)水平(P0.05),降低主動(dòng)脈中LPL mRNA及其蛋白表達(dá)水平以及血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1水平(P0.05)。結(jié)論血管軟化丸抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的作用機(jī)制可能與調(diào)控miRNA-467b靶向LPL調(diào)控巨噬細(xì)胞,減少IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1等炎癥因子分泌和巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積相關(guān)。
【部分圖文】：

LPL蛋白表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色或棕褐色，以模型組斑塊形成處最為明顯。對(duì)照組主動(dòng)脈厚薄均勻，內(nèi)膜光滑平整，各層結(jié)構(gòu)正常；模型組小鼠主動(dòng)脈管徑厚薄不均勻，內(nèi)膜不光滑，有明顯的AS斑塊形成，可見大量棕黃色顆粒，呈陽(yáng)性表達(dá)；miR-467b mimic組AS斑塊不明顯，棕黃色顆粒較少；中藥高劑量組和低劑量組小鼠主動(dòng)脈各層結(jié)構(gòu)清晰，血管細(xì)胞排列較整齊，AS病變程度明顯輕于模型組，棕黃色顆粒較少。與對(duì)照組比較，模型組小鼠主動(dòng)脈pri-miR-467bmRNA表達(dá)水平明顯降低（P<0.05),LPL mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）；與模型組相比，miR-467bmimic組、高劑量組和低劑量組小鼠主動(dòng)脈pri-miR-467b mRNA表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）、LPL mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。見圖1、表4。3.5 5組小鼠血清炎癥因子水平比較
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