發(fā)布時間：2020-10-21 11:47

　　 目的研究益氣養(yǎng)血疏肝方(青盲一號方)抑制谷氨酸鈉誘導的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC-5)凋亡的作用及可能機制。方法星孢菌素(STSN)分化體外培養(yǎng)的RGC-5細胞后,L-谷氨酸鈉誘導RGC-5細胞損傷模型,分別用2.5%、5%、10%益氣養(yǎng)血疏肝方藥物血清干預24 h。采用CCK-8檢測各組細胞活性;流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡率;Western-blot檢測Bcl-2/Bax信號通路相關(guān)蛋白的表達水平;RT-PCR檢測Bcl-2、Bax基因表達。結(jié)果各藥物血清組的細胞存活率均高于模型組(P0.05),且5%益氣養(yǎng)血疏肝方藥物血清組的存活率高于其他藥物血清組(P0.05),同時凋亡率最低。與空白對照組比較,模型組Bcl-2蛋白表達下降(P0.05),Caspase-9、Caspase-3蛋白表達增加(P0.05)。與模型組比較,5%益氣養(yǎng)血疏肝方藥物血清組Bcl-2蛋白表達增加,Caspase-9、Caspase-3蛋白表達下降(P0.05),且5%藥物血清組Bcl-2/Bax高于2.5%、10%藥物血清組。結(jié)論 5%益氣養(yǎng)血疏肝方藥物血清能夠通過調(diào)控Bcl-2/Bax信號通路來抑制RGC-5細胞的凋亡。
【部分圖文】：

表2 各組RGC-5細胞凋亡信號通路Bcl-2、Bax 基因表達水平比較 ( x ˉ ±s ; n=3)Table 2 mRNA expression of Bcl-2 and Bax in RGC-5 cells of all groups ( x ˉ ±s ; n=3) 組別 Groups Bcl-2 mRNA Bax mRNA 模型組Model group 0.503±0.045 2.690±0.788 空白血清組Blank serum group 1.054±0.033* 0.810±0.404 2.5%益氣養(yǎng)血舒肝方藥物血清組2.5% QMYH group 0.627±0.058□# 2.194±0.535 5%益氣養(yǎng)血舒肝方藥物血清組5% QMYH group 1.107±0.323* 1.496±0.248 10%益氣養(yǎng)血舒肝方藥物血清組10% QMYH group 0.779±0.072□# 1.900±0.448 F 8.915 1.823 P <0.000 1 0.201 注:與模型組比較*P<0.05;與空白血清組比較□P<0.05;與5%益氣養(yǎng)血疏肝藥物血清組比較#P<0.05。Note: *P<0.05 compared with model group; □P<0.05 compared with blank serum group; #P<0.05 compared with 5% QMYH group.圖3 Bcl-2/Bax凋亡信號通路蛋白表達情況

RGC-5于6 h左右完全貼壁。倒置顯微鏡下觀察,可見RGC-5胞體呈不規(guī)則多邊形,有細長突觸向外延展,中央有卵圓形核,胞質(zhì)突起,生長時呈放射狀(圖1 A),經(jīng)0.125 μmol/L的STSN作用1 h即可出現(xiàn)形態(tài)改變(圖1 B)。3.2 各組細胞存活率比較

Bcl-2/Bax凋亡信號通路蛋白表達情況
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