【目的】炎癥是機(jī)體對(duì)內(nèi)外界有害刺激做出的防御性反應(yīng),有助于機(jī)體清除病原體和修復(fù)組織損傷。但是,過度的炎癥反應(yīng)反而會(huì)使組織損傷加重,導(dǎo)致炎癥長期存在不能痊愈,從而引起慢性炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展,如動(dòng)脈粥樣硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。這些炎癥相關(guān)疾病具有患病率高、病程長、患病人數(shù)多的特點(diǎn),造成了較大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)損失。目前研究表明,抗炎治療在炎癥相關(guān)疾病的預(yù)防和治療中起到了良好的作用,以炎癥為靶向的抗炎治療成為了炎癥相關(guān)疾病預(yù)防及治療的新策略。因此,本論文選取中藥丹參的活性提取物丹參酮Ⅰ,利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(coro1a:eGFP)研究其抗炎作用及其相關(guān)機(jī)制,并用斑馬魚評(píng)價(jià)丹參酮Ⅰ的安全性,為丹參酮Ⅰ將來應(yīng)用于臨床抗炎治療提供實(shí)驗(yàn)參考,期望能夠輔助預(yù)防和治療炎癥相關(guān)疾病。【方法】(1)選取受精后0-2 h(hpf)的斑馬魚胚胎進(jìn)行丹參酮Ⅰ的急性毒性和發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn),連續(xù)觀察4天,統(tǒng)計(jì)斑馬魚胚胎死亡率、孵化率、畸形率。(2)選取3 dpf轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(coro1a:eGFP)切斷尾鰭構(gòu)建炎癥模型,評(píng)價(jià)丹參酮Ⅰ對(duì)斑馬魚切尾6小時(shí)和切尾12小時(shí)尾部中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的抑制作用。(3)選取7-9 hpf的斑馬魚胚胎,加入LPS誘導(dǎo)斑馬魚產(chǎn)生炎癥,評(píng)價(jià)丹參酮Ⅰ對(duì)斑馬魚體內(nèi)氧化應(yīng)激和一氧化氮(NO)的抑制作用�！窘Y(jié)果】(1)安全性評(píng)價(jià)結(jié)果表明,在24 hpf、48 hpf、72 hpf、96 hpf時(shí),丹參酮Ⅰ對(duì)斑馬魚胚胎的半數(shù)致死濃度(LC_(50))均大于50μM,且實(shí)驗(yàn)濃度下(≤50μM)的丹參酮Ⅰ對(duì)各個(gè)時(shí)間段的斑馬魚胚胎致死率均小于5%。在96 hpf時(shí),與對(duì)照組相比,各個(gè)濃度的丹參酮Ⅰ不影響斑馬魚胚胎的孵化率(P0.05),表明丹參酮Ⅰ對(duì)斑馬魚孵化酶的活性和運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)功能無影響。與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的阿司匹林對(duì)斑馬魚胚胎的半數(shù)致死濃度(11.1μM)相比,丹參酮Ⅰ的急性毒性相對(duì)較小。但是發(fā)育毒性結(jié)果顯示,高濃度丹參酮Ⅰ(50μM)對(duì)48 hpf、72 hpf、96 hpf的斑馬魚胚胎均有致畸作用,畸形主要有心包水腫和脊柱彎曲。(2)抗炎活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,丹參酮Ⅰ既可以抑制切尾6小時(shí)斑馬魚中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞向尾部傷口處聚集,又可以促進(jìn)切尾12小時(shí)斑馬魚尾部中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的吸收,說明丹參酮Ⅰ在炎癥早期和中后期均能發(fā)揮抗炎作用。(3)抗炎分子機(jī)制研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),丹參酮Ⅰ能夠有效抑制斑馬魚體內(nèi)活性氧(ROS)和NO的產(chǎn)生,表明丹參酮Ⅰ可以通過抑制ROS和NO的含量減輕炎癥反應(yīng)�！窘Y(jié)論】綜上所述,丹參酮Ⅰ既可以通過減少炎癥部位中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量來抑制炎癥反應(yīng),也可以通過抑制ROS和NO的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用。同時(shí),丹參酮Ⅰ的急性毒性相對(duì)較小,具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

例失衡在 IBD 發(fā)病起到重要作用[94, 95]。在固有免 病情發(fā)展的重要細(xì)胞，通過釋放多種促炎因子致 IBD 加重[96]。 I 的藥理作用傳統(tǒng)中藥，具有多種藥理作用，如抗炎、抗腫瘤、護(hù)、免疫調(diào)節(jié)等，臨床上主要用來治療心血管從丹參中提取出來的活性成分，屬于二萜醌類提物有丹參酮IIA、隱丹參酮等。丹參酮I的分子量為脂溶性好，微溶于水。目前多數(shù)研究以丹參酮 I酮 IIA 磺酸鈉已經(jīng)應(yīng)用于臨床治療冠心病、心絞 的臨床應(yīng)用導(dǎo)致丹參酮 I 和隱丹參酮等其他丹參 I 也有較好的藥理作用，其主要藥理作用如下。

16圖 2-1 （a）各濃度丹參酮 I 對(duì)斑馬魚胚胎死亡率的曲線圖；（b）各濃度丹參酮 I 對(duì)斑馬魚胚胎孵化率的曲線圖。Figure 2-1 (a) Effects of tanshinone I on mortality of zebrafish embryos; (b) Effects oftanshinone I on hatchability of zebrafish embryos.2.4.2 丹參酮 I 對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育的影響斑馬魚胚胎從受精到器官完全形成僅需 3～4 天，并且身體透明在顯微鏡下可以清晰觀察到各個(gè)器官的形態(tài)，是評(píng)價(jià)藥物致畸性的良好動(dòng)物模型。各濃度丹

-2 （a）各濃度丹參酮 I 暴露下斑馬魚的發(fā)育形態(tài)（放大倍數(shù) 5 倍）；（b）各濃酮 I 對(duì)斑馬魚畸形率的曲線圖。*：表示與 DMSO 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.0gure 2-2 (a) Morphology of zebrafish embryos exposed to tanshinone I (image of 5×)ects of tanshinone I on aberration rates of zebrafish embryos. *: P<0.01, compared to D 本章小結(jié)丹參酮 I 作為丹參的活性提取物之一，其安全性評(píng)價(jià)未見報(bào)導(dǎo)。本研究魚胚胎評(píng)價(jià)丹參酮 I 的急性毒性和發(fā)育毒性，可為丹參酮 I 的臨床應(yīng)用，也可以為下章的抗炎實(shí)驗(yàn)提供濃度參考范圍。本章的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1）丹參酮 I 在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)（≤50 μM）對(duì) 24 hpf、48 hpf、72 hp的斑馬魚胚胎的致死效應(yīng)較小，斑馬魚胚胎死亡率均小于 5%。（2）在 24 hpf、48 hpf、72 hpf、96 hpf，丹參酮 I 對(duì)的斑馬魚胚胎的于 50 μM。
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