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青胡桃質(zhì)量標準及生物活性研究

發(fā)布時間:2020-10-19 19:48
   青胡桃為胡桃科植物胡桃(Juglans regia L.)的新鮮或干燥幼果,具有清熱解毒、消腫止痛、烏發(fā)等功效,在民間主要用于治療牙痛,痛經(jīng),肝胃氣痛,癌癥痛,胃神經(jīng)痛,急、慢性胃痛,腹痛,須發(fā)早白等。青胡桃藥材收錄于2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》,但青胡桃藥材的含量測定項還尚未完善,青胡桃藥材的深度開發(fā)利用受到限制。為了改變現(xiàn)狀,本課題以青胡桃藥材為研究對象,以《中國藥典》2015版第四部中藥材質(zhì)量控制通則為指導,對青胡桃藥材的質(zhì)量標準進行研究實驗,實驗內(nèi)容及結(jié)果如下:1.青胡桃藥材中總黃酮含量測定及抗氧化活性研究總黃酮類化合物為青胡桃的主要化學成分之一,此章節(jié)對青胡桃總黃酮提取方法進行優(yōu)化。首先對顯色條件進行優(yōu)化,再進行單因素實驗考察,最后進行3因素3水平正交實驗。結(jié)果表明,青胡桃總黃酮的最佳提取方法為:提取時間90min,溶劑濃度55%,料液比(g·m L~(-1))為1:30。應(yīng)用此方法測得貴州省10批不同產(chǎn)地青胡桃總黃酮含量在9.36~9.61%之間。以ABTS自由基清除能力和DPPH自由基清除能力做為指標,對青胡桃總黃酮抗氧化活性進行評價。得出在一定濃度范圍內(nèi),青胡桃總黃酮含量與ABTS自由基和DPPH自由基的清除能力呈正相關(guān)。不同產(chǎn)地青胡桃對ABTS自由基和DPPH自由基清除能力的影響不顯著。2.青胡桃藥材的指紋圖譜研究此部分采用高效液相色譜法建立了貴州省青胡桃指紋圖譜的測定方法。應(yīng)用本方法對貴州省12批不同產(chǎn)地青胡桃藥材進行測定,其中10批青胡桃藥材的相似度在0.9以上,只有兩批藥材出現(xiàn)稍微差異。得出貴州省青胡桃藥材具有較好的穩(wěn)定性,為貴州省青胡桃藥材的質(zhì)量控制、研究與開發(fā)提供科學依據(jù)。3.青胡桃質(zhì)量標準研究根據(jù)《中國藥典》2015版中相關(guān)規(guī)定,全面的對青胡桃藥材水分、灰分、浸出物及重金屬含量進行測定;采用放大鏡對青胡桃性狀進行研究;采用顯微鏡對其進行顯微鑒別;采用紫外分光光度對其總黃酮含量進行測定。參考相關(guān)資料及相應(yīng)醫(yī)藥書籍,對青胡桃藥材的中藥屬性、主要功效和儲存方法進行總結(jié)。綜合以上中藥材質(zhì)量標準研究結(jié)果,參照《中國藥典》2015年版相關(guān)通則,撰寫貴州省青胡桃藥材的質(zhì)量標準草案,為大力開發(fā)貴州省青胡桃藥材提供科學依據(jù)。4.青胡桃提取物的體外活性研究此部分采用響應(yīng)面法對青胡桃總黃酮含量與得膏率的平均權(quán)重進行優(yōu)化,得最佳前處理條件為:提取時間75.27 min,溶劑濃度50.63%,料液比(g·m L-1)為1:32.07,總黃酮含量為9.84%,得膏率為28.07%,平均權(quán)重為18.95%。對乙醇,石油醚,乙酸乙酯和水制備的青胡桃萃取液進行體外抗腫瘤活性、抗氧化活性研究。結(jié)果表明,在體外抗氧化研究中,青胡桃萃取液的抗氧化能力存在明顯差異。青胡桃萃取液清除DPPH、ABTS自由基能力大小順序為:乙醇提取物水萃取部分乙酸乙酯萃取部分石油醚萃取部分。青胡桃提取物對人宮頸癌Hela細胞的生長抑制能力的排序為乙酸乙酯萃取部分石油醚萃取部分乙醇提取物水萃取部分;青胡桃提取物對人胃癌MKN45細胞的生長抑制能力的排序為石油醚萃取部分乙酸乙酯萃取部分乙醇提取物水萃取部分。青胡桃提取物對Hela細胞和MKN45細胞的生長抑制效果與給藥濃度均具有量效關(guān)系,呈現(xiàn)正相關(guān)。青胡桃提取物體外活性的初步篩選,為貴州青胡桃的進一步開發(fā)利用與深入研究提供參考依據(jù)。
【學位單位】:貴州師范大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2019
【中圖分類】:R284;O657.72
【部分圖文】:

影響因素,胡桃,乙醇溶液,最佳提取方法


每個因素對總黃酮提取的影響順序為提取時間(A)>溶劑濃度(B)>料液比(C)。三因素三水平優(yōu)化水平組合為 A3B2C2,本實驗青胡桃總黃酮最佳提取方法為精密稱取青胡桃藥材(100 目)2 g,以液料比 30:1 加入 55%乙醇溶液,超聲功率300 W,超聲時間 90 min,提取 2 次,室溫放冷后以 55%乙醇溶液補重,離心后過濾,合并上層濾液。表 2-5 正交實驗結(jié)果分析Table 2-5 Analysis of orthogonal experimental results源 III 型平方和 df 均方 F Sig. 顯著性校正模型 13.429a6 2.238 121.125 0.008 **截距 426.147 1 426.147 23062.687 0.000 **A 7.843 2 3.921 212.227 0.005 **B 4.173 2 2.086 112.915 0.009 **C 1.413 2 0.706 38.234 0.025 *誤差 0.037 2 0.018總計 439.613 9校正的總計 13.466 8注:**表示極顯著水平(p<0.01);*表示顯著水平(p<0.05)

色譜圖,色譜圖,波長,流動相


圖 3-1 250、260、270、280 nm 波長色譜圖Fig. 3-1 Chromatograms of 250、260、270、280 nm在選定 250、260、270、280 nm 四個波長及全波長條件下進行全波長掃描,掃描結(jié)果如圖 3-1 所示,在 250 nm 下,色譜峰較多且響應(yīng)值高。故選擇 250 nm作為青胡桃指紋圖譜測定的檢測波長。3.3.2 流動相的選擇為了最大程度的分離青胡桃藥材譜圖中各色譜峰,以甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水作為流動相考察,結(jié)果如圖 3-2 所示,發(fā)現(xiàn)甲醇-0.1%甲酸水作為流動相色譜峰分離度更好,故選擇甲醇-0.1%甲酸水作為流動相。

色譜圖,流動相,色譜圖,甲酸


圖 3-1 250、260、270、280 nm 波長色譜圖Fig. 3-1 Chromatograms of 250、260、270、280 nm在選定 250、260、270、280 nm 四個波長及全波長條件下進行全波長掃描,掃描結(jié)果如圖 3-1 所示,在 250 nm 下,色譜峰較多且響應(yīng)值高。故選擇 250 nm作為青胡桃指紋圖譜測定的檢測波長。3.3.2 流動相的選擇為了最大程度的分離青胡桃藥材譜圖中各色譜峰,以甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水作為流動相考察,結(jié)果如圖 3-2 所示,發(fā)現(xiàn)甲醇-0.1%甲酸水作為流動相色譜峰分離度更好,故選擇甲醇-0.1%甲酸水作為流動相。
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