棗是我國的主要果樹之一,為促使地方的棗果資源及棗樹種質(zhì)資源的利用。本實驗以湖南省衡陽地區(qū)多個棗品種果實為研究原料,以棗原花青素含量為主要指標(biāo)對不同棗品種原花青素含量測定,對棗原花青素進行提取純化與活性測定研究,其主要研究結(jié)果如下:(1)以湖南省衡陽地區(qū)14個棗品種為原材料,通過鐵鹽催化比色法對不同品種棗果實原花青素含量測定。結(jié)果表明,不同品種棗果實原花青素的含量有較大差異,棗果中原花青素含量最高的品種是最低的3.61倍,含量較高的品種有祁東雞蛋棗、衡南子彈頭、衡南龍須棗、祁東算盤棗等,其中祁東雞蛋棗鮮果中原花青素含量高達6.86mg/g。(2)以單因素為基礎(chǔ),采用Box-Behnken實驗設(shè)計和響應(yīng)面法優(yōu)化棗原花青素超聲波提取工藝,得到了最佳參數(shù):超聲時間16 min、超聲功率為618 W、超聲溫度為65℃、料液比為1:21,棗原花青素提取得率可以達到1.82%。(3)通過比較六種樹脂的物理構(gòu)造、吸附和解析等要素,以AB-8樹脂為對象進行純化工藝摸索。通過靜態(tài)和動態(tài)試驗,獲得純化的最佳參數(shù)為:上樣液pH值5.0、上樣量1.5 BV、2.5 BV 60%的乙醇洗脫劑,得棗原花青素純化物干粉含量達73.07%。通過測定還原力、DPPH及羥基自由基清除能力等三種抗氧化指標(biāo),結(jié)果表明,棗原花青素純化物還原力、DPPH及羥基自由基清除能力都要高于Vc,且其對DPPH清除能力強于對羥基自由基(4)利用乙酸乙酯和聚酰胺對棗原花青素純化物進行分級分離,并比較了各丙酮洗脫產(chǎn)物的抗氧化能力,結(jié)果表明,乙酸乙酯和聚酰胺可實現(xiàn)對棗原花青素純化物分級分離的目,獲得30%、50%、70%丙酮洗脫產(chǎn)物,經(jīng)測定其平均聚合度分別為:2.07、3.26、3.47,聚合度隨洗脫劑丙酮的濃度而不斷增大;不同聚合度原花青素的抗氧化能力有較大的區(qū)別,二聚體(D1)抗氧化能力要好于單體(兒茶素);隨著聚合度不斷增大,抗氧化能力逐步減弱;同聚合度的抗氧化能力呈濃度劑量依賴。(5)利用棗原花青素純化物保護人類永生化角質(zhì)HaCaT細胞,加以過氧化氫(H_2O_2)作用于HaCaT細胞誘導(dǎo)其氧化損傷,通過測定細胞凋亡、ROS水平、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性等指標(biāo),探討棗原花青素純化物對氧化損傷的HaCaT細胞的保護作用。結(jié)果表明,H_2O_2作用于HaCaT細胞會使其氧化損傷和細胞凋亡,而棗原花青素純化物可以通過提高細胞內(nèi)GSH-Px、SOD活性,減少HaCaT細胞中ROS含量和降低細胞凋亡率,保護細胞免受氧化應(yīng)激的損傷。
【學(xué)位單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284.2;R285
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1 棗的相關(guān)概況
        1.1 棗的概述
        1.2 棗的主要功能成分
            1.2.1 糖類化合物
            1.2.2 酚類化合物
            1.2.3 三萜類化合物
            1.2.4 環(huán)核苷酸
        1.3 棗的開發(fā)與利用
    2 原花青素的研究進展
        2.1 原花青素的概述
            2.1.1 原花青素的來源
            2.1.2 原花青素的結(jié)構(gòu)
        2.2 原花青素素測定
            2.2.1 鐵鹽催化比色法
            2.2.2 香草醛法
            2.2.3 紫外分光光度法
            2.2.4 鉬酸銨分光光度法
        2.3 原花青素提取
            2.3.1 溶劑提取法
2 萃取法'>            2.3.2 超臨界CO₂ 萃取法
            2.3.4 超聲波輔助提取法
            2.3.5 微波輔助提取法
        2.4 原花青素的分離純化
            2.4.1 柱層析法
            2.4.2 有機溶劑萃取法
            2.4.3 薄層層析法
            2.4.4 膜分離法
        2.5 原花青素的生物活性
            2.5.1 清除自由基、抗氧化
            2.5.2 預(yù)防高血壓、保護心血管
            2.5.3 抗衰老作用
            2.5.4 抗腫瘤作用
            2.5.5 皮膚保健、美容作用
    3 研究的目的和主要內(nèi)容
        3.1 研究的目的及意義
        3.2 研究的主要內(nèi)容
            3.2.1 不同品種棗果原花青素含量分析及檢測方法的優(yōu)化
            3.2.2 棗原花青素提取工藝研究及優(yōu)化
            3.2.3 棗原花青素的純化及抗氧化活性的研究
            3.2.4 棗原花青素的聚合度與抗氧化活性關(guān)系的研究
            3.2.5 棗原花青素對Hacat細胞的抗氧化作用研究
第二章 不同品種棗中原花青素含量測定分析
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 儀器與設(shè)備
        1.3 實驗方法
            1.3.1 原花青素供試品溶液的制備
            1.3.2 鐵鹽催化比色法測定原花青素含量方法優(yōu)化
            1.3.3 原花青素含量的計算
            1.3.4 不同品種棗原花青素含量的差異比較
    2 結(jié)果與分析
        2.1 原花青素含量測定方法的確定
            2.1.1 線性關(guān)系考察結(jié)果
            2.1.2 精密度試驗結(jié)果
            2.1.3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果與分析
            2.1.4 加標(biāo)回收率試驗結(jié)果與分析
        2.2 不同品種棗原花青素含量的差異分析
    3 小結(jié)與討論
第三章 響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波提取棗原花青素工藝的研究
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 儀器與設(shè)備
        1.3 實驗方法
            1.3.1 供試樣的制備
            1.3.2 棗原花青素的超聲提取單因素實驗設(shè)計
            1.3.3 響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取工藝
            1.3.4 原花青素的測定
        1.4 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 單因素實驗結(jié)果與分析
            2.1.1 超聲時間對棗原花青素得率的影響
            2.1.2 超聲功率對棗原花青素得率的影響
            2.1.3 提取溫度對棗原花青素得率的影響
            2.1.4 料液比對棗原花青素得率的影響
            2.1.5 乙醇濃度對棗原花青素得率的影響
            2.1.6 提取次數(shù)對棗原花青素得率的影響
        2.2 響應(yīng)面分析實驗設(shè)計及結(jié)果
            2.2.1 回歸模型的建立
            2.2.2 回歸方程及方差分析
            2.2.3 響應(yīng)面交互作用分析
            2.2.4 驗證實驗
    3 小結(jié)與結(jié)論
第四章 大孔吸附樹脂純化棗原花青素及抗氧化性研究
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 儀器與設(shè)備
        1.3 試驗方法
            1.3.1 大孔吸附樹脂的預(yù)處理
            1.3.2 供試溶液的制備
            1.3.3 樹脂的篩選
            1.3.4 AB-8 樹脂的靜態(tài)吸附與解析實驗
            1.3.5 動態(tài)吸附和解析實驗
            1.3.6 棗原花青素含量的測定
            1.3.7 棗原花青素純化物的抗氧化能力研究
    2 結(jié)果與分析
        2.1 靜態(tài)吸附實驗
            2.1.1 樹脂篩選
            2.1.2 靜態(tài)吸附動力學(xué)曲線
            2.1.3 pH對吸附效果的影響
            2.1.4 不同濃度洗脫液解析效果的測定
        2.2 動態(tài)吸附實驗
            2.2.1 上樣量對樹脂吸附效果的影響
            2.2.2 洗脫劑用量對樹脂解析率的影響
            2.2.3 洗脫液pH的確定
        2.3 棗原花青素粗提物的純化
        2.4 棗原花青素體外抗氧化活性研究
            2.4.1 棗原花青素純化物對DPPH自由基清除能力的影響
            2.4.2 棗原花青素純化物對羥基自由基清除能力的影響
            2.4.3 棗原花青素純化物還原力的結(jié)果分析
    3 小結(jié)與討論
第五章 棗原花青素聚合度與抗氧化活性關(guān)系的研究
    1 材料與方法
        1.1 材料和試劑
        1.2 儀器與設(shè)備
        1.3 實驗方法
            1.3.1 原花青素平均聚合度的測定
            1.3.2 棗原花青素純化物的萃取分級
            1.3.3 聚酰胺分離純化乙酸乙酯相的低聚體原花青素
            1.3.3 不同聚合度棗原花青素抗氧化活性測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 原花青素平均聚合度測定的方法
            2.1.1 原花青素質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.1.2 原花青素物質(zhì)的量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.2 棗原花青素分級分離的平均聚合度分析
            2.2.1 乙酸乙酯萃取分離的平均聚合度分析
            2.2.2 聚酰胺分級分離的平均聚合度分析
        2.3 不同聚合度棗原花青素的抗氧化能力分析
            2.3.1 DPPH自由基清除能力的結(jié)果分析
            2.3.2 還原力的結(jié)果分析
    3 小結(jié)與討論
第六章 棗原花青素對HaCaT細胞氧化損傷的保護作用研究
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 儀器與設(shè)備
        1.3 實驗方法
            1.3.1 細胞培養(yǎng)與分組處理
            1.3.2 MTT檢測細胞活性
            1.3.3 ROS的含量測定
            1.3.4 細胞凋亡檢測
            1.3.5 SOD、GSH-Px酶活性測定
            1.3.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 棗原花青素純化物對HaCaT細胞存活率的影響
2O₂損傷的HaCaT細胞活性的影響'>        2.2 棗原花青素純化物對H₂O₂損傷的HaCaT細胞活性的影響
2O₂損傷的HaCaT細胞內(nèi)ROS水平的影響'>        2.3 棗原花青素純化物對H₂O₂損傷的HaCaT細胞內(nèi)ROS水平的影響
2O₂誘導(dǎo)HaCaT細胞凋亡的影響'>        2.4 棗原花青素純化物對H₂O₂誘導(dǎo)HaCaT細胞凋亡的影響
        2.5 SOD及 GSH-PX活性測定結(jié)果
    3 小結(jié)與討論
全文結(jié)論與展望
    1 結(jié)論
    2 主要創(chuàng)新點
    3 展望
參考文獻
符號說明
致謝
作者簡介

【參考文獻】

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本文編號：2846353