研究目的:利用體外細(xì)胞培養(yǎng)的研究方法,從細(xì)胞水平觀察貝牡莪消中藥復(fù)方對體外細(xì)胞培養(yǎng)的FRTL-5細(xì)胞增殖和凋亡的影響,探討以"活血行氣,化痰散結(jié)"為原則創(chuàng)制的貝牡莪消中藥復(fù)方對甲狀腺腫大的作用機(jī)制。研究方法:1、細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)對照組為正常L-15完全培養(yǎng)基;實(shí)驗(yàn)組分別為濃度為1.Omg/ml、2.Omg/ml、5.0mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml 的貝牡莪消培養(yǎng)液。取對數(shù)生長期的FRTL-5細(xì)胞,接種在96孔板中,加入不同含藥濃度的培養(yǎng)基,于24h、48h觀察細(xì)胞增殖狀態(tài),采用CCK-8檢測法在酶標(biāo)儀450nm波長下測定吸光度值(OD值).計(jì)算貝牡莪消中藥復(fù)方對FRTL-5細(xì)胞生長抑制率。2、Bax,Bcl-2的mRNA水平檢測收集各組細(xì)胞,提取RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測Bax,Bcl-2的mRNA表達(dá)。采用SPSS 20.0軟件分析不同濃度貝牡莪消中藥復(fù)方在不同時(shí)間對FRTL-5細(xì)胞增殖抑制情況及各組細(xì)胞Bax,Bc l-2 mRNA的表達(dá)數(shù)據(jù)。結(jié)果:1、采用CCK-8檢測法測得不同濃度貝牡莪消培養(yǎng)液對FRTL-5細(xì)胞增殖具有抑制作用。2、貝牡莪消中藥復(fù)方能使FRTL-5細(xì)胞促凋亡基因Bax的mRNA表達(dá)水平明顯升高,尤其以濃度為15mg/ml和20mg/ml的貝牡莪消培養(yǎng)液效果明顯,以20mg/ml差異最為顯著(p0.05),貝牡莪消中藥復(fù)方能使甲狀腺細(xì)胞抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表達(dá)水平下降,以濃度為15mg/ml的貝牡莪消培養(yǎng)液效果最為明顯。結(jié)論:貝牡莪消中藥復(fù)方有抑制FRTL-5細(xì)胞增殖及促進(jìn)FRTL-5細(xì)胞凋亡的作用,可能是通過上調(diào)促凋亡基因及下調(diào)抗凋亡基因以達(dá)到促進(jìn)甲狀腺細(xì)胞凋亡的目的,提示貝牡莪消中藥復(fù)方治療甲狀腺腫大的機(jī)制可能是通過抑制甲狀腺細(xì)胞增殖及促進(jìn)甲狀腺細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)。
【學(xué)位單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    1、甲狀腺腫大的中醫(yī)藥研究進(jìn)展
        1.1 病名源流
        1.2 病因病機(jī)
        1.3 治療研究
    2、甲狀腺腫大的西醫(yī)研究概況
        2.1 病因與發(fā)病機(jī)制
        2.2 診斷
    3、中藥調(diào)節(jié)甲狀腺細(xì)胞增殖與調(diào)亡的作用機(jī)制研究進(jìn)展
        3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)類
        3.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)類
材料與方法
    1、實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑
        1.5 主要耗材
        1.6 主要試劑的配制
    2、實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 貝牡莪消培養(yǎng)液的配制
        2.2 FRTL-5細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3 CCK-8檢測細(xì)胞增殖
        2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測Bcl-2、Bax的mRNA的表達(dá)
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
    1、不同濃度貝牡莪消培養(yǎng)液對FRTL-5細(xì)胞增殖OD值比較((?)+s,n=6)
    2、RNA的質(zhì)控
    3、貝牡莪消中藥復(fù)方對FRTL-5細(xì)胞Bax基因mRNA表達(dá)的影響
    4、貝牡莪消中藥復(fù)方對FRTL-5細(xì)胞Bcl-2基因mRNA表法的影響
討論
    1、貝牡莪消中藥復(fù)方治療甲狀腺腫的立方依據(jù)
    2、貝牡莪消中藥復(fù)方方藥分析
    3、貝牡莪消中藥復(fù)方現(xiàn)代藥理分析
    4、細(xì)胞增殖與甲狀腺腫
    5、貝牡莪消中藥復(fù)方甲狀腺細(xì)胞增殖抑制作用
    6、細(xì)胞凋亡與甲狀腺腫
    7、貝牡莪消中藥復(fù)方誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制
    8、問題與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
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本文編號：2845735