選題依據(jù):中藥款冬花為菊科植物款冬(Tussilago farfara L.)的干燥花蕾,主要用來(lái)治療喘咳痰多、久咳不愈、急慢性氣管炎等癥�？疃ㄖ饕S酮、苯丙素、倍半萜、三萜以及生物堿等物質(zhì),具有抗炎,抗氧化,抗過(guò)敏等作用。本課題組研究發(fā)現(xiàn),款冬花水提物具有止咳化痰的功效,款冬花石油醚提取物具有干預(yù)過(guò)敏性哮喘的活性。已有研究表明,款冬花總倍半萜具有抗炎作用。本研究在前期研究基礎(chǔ)上將進(jìn)一步分析款冬花石油醚部位中特征性成分倍半萜對(duì)卵清蛋白(OVA)致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)作用;并采用代謝組學(xué)技術(shù)分析其干預(yù)機(jī)制。目的:分析款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)作用及其作用機(jī)制。方法:(1)款冬花總倍半萜的制備:利用中壓制備對(duì)款冬花石油醚部位中的總倍半萜類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行分離與富集,并考察不同型號(hào)FLASH柱對(duì)款冬花總倍半萜制備的影響;采用NMR技術(shù)對(duì)款冬花總倍半萜類(lèi)成分進(jìn)行定性分析;采用HPLC測(cè)定款冬花總倍半萜的含量。(2)款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)作用:本文以款冬花總倍半萜為實(shí)驗(yàn)材料,利用OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠模型,通過(guò)血清生化指標(biāo)、肺及支氣管病理切片、支氣管肺泡灌洗液(BALF)炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)來(lái)分析款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)作用。(3)款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)機(jī)制:采用液質(zhì)代謝組學(xué)技術(shù)找到相關(guān)代謝物及其代謝通路。采用Western blot技術(shù)對(duì)上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺組織p65 NF-kB蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析,尋找款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏哮喘大鼠的干預(yù)通路。結(jié)果:(1)款冬花總倍半萜的制備。選用Angle C 18 FLASH柱(20 g,20-35μm),以85%的甲醇為流動(dòng)相,中壓制備色譜在線洗脫,等度洗脫35 min。收集5-35 min的流分,減壓濃縮即得款冬花總倍半萜。利用NMR定性分析總倍半萜部位,脂肪酸雜質(zhì)較少,和石油醚部位相比經(jīng)過(guò)中壓制備后款冬花總倍半萜得到了富集。其中款冬酮純度較石油醚部位提高約10倍。(2)款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)作用。款冬花總倍半萜可以減輕肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),改善支氣管的增生與變形,有效地回調(diào)血清中s OVA-Ig E、IL-4、IL-13等炎癥因子的水平,緩解哮喘癥狀。(3)款冬花總倍半萜對(duì)OVA致敏的過(guò)敏性哮喘大鼠的干預(yù)機(jī)制�？疃ǹ偙栋胼瓶梢杂绊懢彼帷⒕�、苯丙氨酸、前列腺素E1、前列腺素E2、EPA等內(nèi)源性代謝物水平,干預(yù)精氨酸和脯氨酸代謝通路等5條顯著變化通路,對(duì)大鼠哮喘起到調(diào)節(jié)作用,同時(shí)也可以下調(diào)p65 NF-kB蛋白表達(dá)量,阻斷促炎因子向胞內(nèi)信號(hào)的傳導(dǎo),抑制炎癥因子釋放,減輕炎癥。結(jié)論:本文通過(guò)中壓制備建立了款冬花總倍半萜制備方法,但其制備工藝還需進(jìn)一步的摸索。通過(guò)OVA致敏的哮喘大鼠動(dòng)物模型驗(yàn)證了款冬花總倍半萜具有干預(yù)過(guò)敏性哮喘的作用。采用液質(zhì)代謝組學(xué)技術(shù)找到相關(guān)代謝物及其代謝通路,款冬花總倍半萜可以干預(yù)機(jī)體代謝平衡,同時(shí)抑制p65 NF-kB蛋白過(guò)度表達(dá),阻斷促炎因子向胞內(nèi)信號(hào)的傳導(dǎo),抑制炎癥因子釋放,減輕炎癥。
【學(xué)位單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2.1 中藥作用哮喘“通路-發(fā)病機(jī)制”網(wǎng)絡(luò)圖然而，中藥對(duì)哮喘的藥效作用機(jī)制研究方面還存在一些不足，體現(xiàn)在目前的究主要集中在中藥單體化合物或提取物上，對(duì)臨床應(yīng)用廣泛，療效確切的中成，如桂龍平喘顆粒、蘇黃止咳膠囊等，研究相對(duì)較少。同時(shí)，中藥對(duì)于 Notch路的研究還未見(jiàn)報(bào)道。此外，目前哮喘的臨床治療仍以西藥為主，而中藥應(yīng)用對(duì)較少。但西藥容易產(chǎn)生副作用、長(zhǎng)時(shí)間使用常引起耐藥性。中藥作用溫和，作用小，特別適用于需長(zhǎng)期治療的慢性疾病。因此，在后續(xù)研究中應(yīng)充分挖掘發(fā)揮中醫(yī)藥在哮喘防治上的優(yōu)勢(shì)，深入研究臨床上療效確切的中成藥和中藥經(jīng)名方對(duì)哮喘的干預(yù)機(jī)制，加快中藥治療哮喘的新藥研發(fā)。

分有明顯的交叉現(xiàn)象。換用 25-35 μm，20 g 的 C 18 FLASH 柱，以一個(gè)峰作為總倍半萜，分離效果不佳。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)得出款冬花總倍半萜制備方法為 25-35 μm，20 g 的 C 18 FLASH 柱，收取 5-35 min 流分�？疃獙�(duì)照品、油醚部位、款冬花總倍半萜 HPLC 液相色譜圖如圖 3.1-3.3 所示�？疃ǹ偙栋胼茖�(duì) OVA 致敏大鼠哮喘模型的干預(yù)作用及其機(jī)制研究

分有明顯的交叉現(xiàn)象。換用 25-35 μm，20 g 的 C 18 FLASH 柱，以一個(gè)峰作為總倍半萜，分離效果不佳。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)得出款冬花總倍半萜制備方法為 25-35 μm，20 g 的 C 18 FLASH 柱，收取 5-35 min 流分�？疃獙�(duì)照品、油醚部位、款冬花總倍半萜 HPLC 液相色譜圖如圖 3.1-3.3 所示。圖 3.1 款冬酮對(duì)照品 HPLC 圖款冬花總倍半萜對(duì) OVA 致敏大鼠哮喘模型的干預(yù)作用及其機(jī)制研究
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本文編號(hào)：2845766