目的建立潰瘍性結腸炎相關結腸癌(UCRCC)與NF-κB信號通路的網絡模型,預測UCRCC的關鍵炎性靶標,明確葛根芩連湯及其指標成分組合物對這些靶標的影響。方法采用HPLC法,流動相為乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脫,測定10種指標成分;檢索Pubmed、ScienceDirect等數據庫,分別查閱UCRCC疾病、NF-κB通路的上下游蛋白,采用Cytoscape軟件,預測UCRCC的關鍵炎性靶標;在AOM/DSS誘導的UCRCC小鼠模型中,通過免疫組化、ELISA方法明確葛根芩連湯及其指標成分組合物對關鍵炎性靶標的影響。結果葛根芩連湯中葛根素、大豆苷、甘草苷、藥根堿、黃芩苷、巴馬汀、小檗堿、黃芩素、甘草酸、漢黃芩素的含量分別為1.677、0.154、0.159、0.045、0.448、0.035、0.095、0.013、0.111、0.006μg/g。交互網絡中綜合排名較高的前8位炎癥因子分別是NF-κBp65、i NOS、COX-2、Bcl-2、TNF-α、IL-1β、ICAM-1和VCAM-1。與模型組比較,葛根芩連湯低、中、高劑量組及其指標成分組合物組、美沙拉秦腸溶片(5-ASA)組均顯著下調UCRCC模型小鼠結腸組織中NF-κBp65、i NOS、Bcl-2、COX-2蛋白表達(P0.01),并顯著降低血清中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1水平(P0.05、0.01)。結論葛根芩連湯及其指標成分組合物能夠改善UCRCC小鼠結腸組織病理情況,并下調炎性因子的表達,對UCRCC具有一定的干預作用,為確定葛根芩連湯質量標志物(Q-marker)奠定了基礎。
【部分圖文】：

(2）精密度試驗：精密量取混合對照品溶液，連續(xù)進樣5次測定，記錄色譜圖。結果表明，葛根素、大豆苷、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、小檗堿、藥根堿、巴馬汀、甘草苷、甘草酸峰面積的RSD值分別為0.75%、0.62%、1.10%、1.03%、1.05%、0.98%、0.67%、0.92%、1.08%、1.25%。(3）穩(wěn)定性試驗：精密量取混合對照品溶液，分別于0、2、4、8、12 h進樣，記錄色譜圖。結果表明，葛根素、大豆苷、黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、小檗堿、藥根堿、巴馬汀、甘草苷、甘草酸峰面積的RSD值分別為0.78%、0.98%、1.36%、1.08%、0.96%、0.88%、1.02%、1.13%、0.10%、0.85%。

通過Pubmed、Science Direct、Web of Science、CNKI等關鍵數據庫，分別查閱UCRCC疾病、NF-κB通路的上下游蛋白，采用Cytoscape軟件分別將NF-κB與UCRCC的上下游蛋白作為起點和終點，所建立NF-κB通路與UCRCC的交互作用網絡如圖2所示，依據Betweenness和Degree兩項指標，推測NF-κB與UCRCC交互作用的關鍵蛋白，其中綜合排名較高的前8位炎癥因子分別是核因子-p65(NF-κBp65）、誘導型一氧化氮合酶（i NOS）、環(huán)氧化酶-2(COX-2）、B淋巴細胞瘤-2(Bcl-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、細胞間黏附分子-1(ICAM-1）和血管內皮細胞黏附分子1(VCAM-1）。以此為依據，后續(xù)實驗將對以上8項指標進行測定。2.3 葛根芩連湯對關鍵炎癥因子的影響

將小鼠結腸組織置于4%多聚甲醛中固定，后續(xù)脫水、包埋和切片，加兔抗抗體（按1∶100稀釋），4℃恒溫過夜后，37℃下滴加二抗孵育30 min。PBS沖洗3次，每次3 min，用濾紙去除多余水分，配制新鮮AEC顯色，于光學顯微鏡下觀察。結果如圖4和表3所示，與對照組比較，模型組小鼠結腸組織中NF-κBp65、i NOS、Bcl-2、COX-2蛋白表達水平均顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，葛根芩連湯低、中、高劑量組、指標成分組合物組以及5-ASA組NF-κBp65、i NOS、Bcl-2、COX-2蛋白表達水平均顯著降低（P<0.01）。3 討論
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鐘國躍,于超,趙志禮;中藥質量評價方法新探——“有限成分組合質量標準”論[J];中國中藥雜志;2002年09期

2 孫蘭;周軍;宗紹波;丁崗;王振中;蕭偉;寇俊萍;;桂枝茯苓膠囊及其成分組合物抗子宮收縮作用及其機制[J];世界科學技術-中醫(yī)藥現代化;2016年02期

3 ;重慶中藥研究院提出中藥質量評價新設想——有限成分組合質量標準[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2003年02期

4 鐘國躍;黃小平;陳仕江;李隆云;馬開森;;黃連(味連)“有限成分組合質量標準”的研究[J];重慶中草藥研究;2006年01期

5 李振坤;陳建新;楊洪軍;劉玫琦;黃璐琦;易建強;;基于LARS算法的川芎成分組合與血管活性關系分析[J];中國實驗方劑學雜志;2009年03期

6 吳宏偉;陳建新;楊洪軍;李德鳳;唐仕歡;;丹參成分組合與抗氧化活性相關性分析[J];中國實驗方劑學雜志;2009年08期

7 李鷹飛,佟麗,梁乾德,王升啟;四物湯化學成分組合對人骨髓基質細胞系HFCL細胞增殖及造血相關基因表達的影響[J];中草藥;2005年03期

8 錢國強;尹曉峰;高宇勤;蔡川;郭軍;彭霞;趙國平;;當歸四逆湯成分組合預處理對心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌微血管內皮細胞凋亡的影響[J];中國老年學雜志;2013年14期

9 錢國強;彭霞;高宇勤;蔡川;梁雪冰;郭軍;潘勝軍;趙國平;;當歸四逆湯成分組合預處理對MIRI大鼠心律失常的影響[J];中國老年學雜志;2014年05期

10 巫龍;卞筱泓;聶煜;許激揚;劉蓉;;降壓中藥有效成分組合對大鼠胸主動脈的舒張作用[J];西北藥學雜志;2011年02期

相關博士學位論文 前1條

1 徐志立;興奮與抑制成分組合應用對平滑肌功能的雙向調節(jié)研究[D];大連醫(yī)科大學;2008年

相關碩士學位論文 前1條

1 董玉瓊;川續(xù)斷種質資源評價與質量標準研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2007年

本文編號：2845450