目的:本研究擬于在慢性心衰大鼠模型上應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法、免疫組化、熒光定量PCR、蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)等方法,研究強(qiáng)心活力方是否通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路減輕心肌重構(gòu)機(jī)制,以論證強(qiáng)心活力方可以抑制心肌細(xì)胞凋亡和心肌纖維化,探索強(qiáng)心活力方治療慢性心力衰竭的機(jī)制。本課題的研究結(jié)果將為開發(fā)國家中藥新藥尋找新的作用靶點、奠定理論基礎(chǔ),進(jìn)而對慢性心力衰竭的防治做出更多貢獻(xiàn)。方法:(1)冠狀動脈左前降支結(jié)扎法制備大鼠慢性心力衰竭模型,按體重隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、參附對照組及強(qiáng)心活力方高、中、低劑量組。(2)右側(cè)頸動脈插管檢測血流動力學(xué)變化,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測實驗大鼠血清腦鈉肽含量。(3)通過慢性心衰大鼠心肌組織病理切片蘇木素-伊紅染色、透射電鏡及馬松(Masson染色)觀察病變大鼠心肌組織和心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及心肌纖維化程度。(4)蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測心肌組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1、活化蛋白激酶1、磷酸化的p38的蛋白表達(dá),熒光定量PCR檢測大鼠心肌組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1、活化蛋白激酶1、p38蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)對血流動力學(xué)的影響:與模型組相比,各治療組血流動力學(xué)指標(biāo)均有不同程度的改善,其中高劑量組改善最為明顯,有顯著性差異(P0.01)。(2)對血清腦納肽的影響:與模型組比較,各治療組血清BNP含量顯著降低,高劑量組降低最為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)顯微鏡下觀察蘇木素-伊紅染色和馬松Masson染色病理切片顯示模型組較正常組、假手術(shù)組差異明顯,強(qiáng)心活力方高劑量組改善心肌結(jié)構(gòu),細(xì)胞形態(tài),抑制心肌纖維化方面效果突出。(4)對Bax、caspase-3及Bc1-2表達(dá)的影響:與模型對照組比較,各治療組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少,Bax、Caspase3蛋白表達(dá)明顯下降,Bc1-2明顯升高。(5)轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGFβ 1)、活化蛋白激酶1(TAK1)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38)表達(dá)的影響:本實驗研究顯示與正常組、假手術(shù)組比較,心衰模型組大鼠心肌組織中的轉(zhuǎn)化生長因子-β1、活化蛋白激酶1、p38絲裂原活化蛋白激酶均出現(xiàn)異常的高表達(dá)狀態(tài),都有顯著性差異。與模型組比較,強(qiáng)心活力方高、中、低劑量組及參附對照組轉(zhuǎn)化生長因子-β 1、活化蛋白激酶1、p38絲裂原活化蛋白激酶表達(dá)有顯著性差異,均有抑制作用,尤其高劑量組對轉(zhuǎn)化生長因子-β1、p38絲裂原活化蛋白激酶表達(dá)抑制更為明顯,治療后也可接近正常表達(dá)水平。但對活化蛋白激酶1表達(dá)影響不明顯,原因有待進(jìn)一步研究。結(jié)論:強(qiáng)心活力方標(biāo)本兼顧,溫陽益氣、活血利水,組方精良,可明顯改善慢性心力衰竭大鼠的心功能指標(biāo)和心肌組織形態(tài);強(qiáng)心活力方能有效抑制促細(xì)胞凋亡蛋白Bax及caspase-3表達(dá),增加抗凋亡蛋白Bc1-2表達(dá),從而減輕心肌細(xì)胞凋亡;強(qiáng)心活力方抑制心肌重構(gòu)的作用機(jī)制可能與下調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子-β 1的表達(dá),進(jìn)而抑制p38MAPK信號通路有關(guān);實驗結(jié)果支持TGFβ 1/p38MAPK通路,但沒有支持TGFβ 1-TAK1-p38MAPK通路,可能是由于P38除了受活化蛋白激酶1激活也受其他MAPKKK激活,在TGFβ1、p38之間通過什么激活需要進(jìn)一步實驗論證。總之,強(qiáng)心活力方改善心肌重構(gòu),有效治療慢性心力衰竭,對此病的防治意義重大,建議臨床選用此方。
【學(xué)位單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2845284