苔蘚植物是陸地上出現(xiàn)最早的植物,在分類學(xué)上界于藻類和蕨類之間,包括苔綱、蘚綱和角苔綱三大類群。從苔類植物中分離得到的次級(jí)代謝產(chǎn)物在數(shù)量和結(jié)構(gòu)新穎程度上都遠(yuǎn)大于其他兩類苔蘚植物,這可能與苔類植物中特殊的細(xì)胞器油體有關(guān)。苔類植物中含有豐富的萜類和芳香類化合物,它們有著諸如細(xì)胞毒活性,抗真菌活性,化感作用,昆蟲拒食,抗氧化等重要的生物學(xué)活性。本文第二章介紹關(guān)于密葉三瓣苔的提取分離與抗真菌活性相關(guān)內(nèi)容。我們從采自吉林長白山的密葉三瓣苔中分離得到了 19個(gè)化合物,其中有5個(gè)是新化合物。我們通過Alamar blue染色實(shí)驗(yàn)篩選了化合物的抗真菌活性,其中有5個(gè)桉烷型倍半萜對(duì)外排泵缺失的DSY654菌株表現(xiàn)出活性,而對(duì)白色念珠菌野生型菌株SC5314無效。我們選用活性最好的8號(hào)化合物映-異土木香內(nèi)酯(以下稱ent-iLL)進(jìn)行進(jìn)一步的研究,發(fā)現(xiàn)它能夠抑制DSY654細(xì)胞酵母態(tài)向菌絲態(tài)的轉(zhuǎn)換。通過高效液相色譜法測(cè)定菌體內(nèi)藥物含量,發(fā)現(xiàn)當(dāng)外排泵缺失或被外排泵抑制劑riccardin D抑制時(shí),ent-iLL得以在白色念珠菌菌體內(nèi)累積。該實(shí)驗(yàn)表明ent-iLL的活性會(huì)被外排泵Cdrs抑制。此外,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和氣質(zhì)聯(lián)用實(shí)驗(yàn)表明,ent-iLL可能抑制DSY654的Erg11和Erg6基因位點(diǎn)的活性進(jìn)而導(dǎo)致甾醇組成的改變:麥角甾醇的含量降低,酵母甾醇和羊毛甾醇的含量增加。我們的實(shí)驗(yàn)表明,桉烷型倍半萜烯,作為Cdrs的一種底物,當(dāng)與Cdrs抑制劑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)能夠干擾白色念珠菌甾醇合成起到抗真菌的作用。本文第三章介紹關(guān)于指葉苔的提取分離與抗炎活性相關(guān)內(nèi)容。我們從指葉苔中分離得到了5個(gè)新化合物,包括2個(gè)多拉比烷型二萜,1個(gè)映貝殼杉烷型二萜以及2個(gè)倍半萜,同時(shí)得到了 15個(gè)已知化合物。我們通過質(zhì)譜、核磁共振數(shù)據(jù)分析、X射線單晶衍射以及電子圓二色譜來確定化合物的結(jié)構(gòu)。我們挑選部分化合物采用LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的模型進(jìn)行抗炎活性的篩選。并且進(jìn)一步探究了具有抗炎活性的多拉比烷型化合物的抗炎機(jī)制。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284.1
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第1章 苔類植物次級(jí)代謝產(chǎn)物的抗真菌活性(綜述)
    1.1 抗真菌機(jī)制
        1.1.1 對(duì)真菌細(xì)胞壁的損害作用
        1.1.2 對(duì)真菌細(xì)胞膜的損害作用
        1.1.3 影響真菌蛋白質(zhì)生物合成
        1.1.4 對(duì)真菌核酸合成和功能的影響
    1.2 苔類植物中具有抗真菌活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物
        1.2.1 倍半萜
        1.2.2 二萜
        1.2.3 聯(lián)芐
        1.2.4 其他類型
    1.3 結(jié)語
    參考文獻(xiàn)
第二章 密葉三瓣苔化學(xué)成分及抗真菌活性研究
    2.1 前言
    2.2 新化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
    2.3 已知化合物的結(jié)構(gòu)確定
    2.4 生物自顯影定位活性化合物
    2.5 藥敏試驗(yàn)
    2.6 ent-iLL抑制白色念珠菌酵母菌絲的形成
    2.7 當(dāng)外排泵被抑制時(shí)ent-iLL在細(xì)胞內(nèi)累積
    2.8 ent-iLL通過抑制Erg11和Erg6的活動(dòng)來改變膜甾醇的組成
    2.9 實(shí)驗(yàn)部分
        2.9.1 苔蘚的采集與鑒定
        2.9.2 測(cè)試儀器
        2.9.3 溶劑和試劑
        2.9.4 層析系統(tǒng)和顯色劑
        2.9.5 提取分離流程
        2.9.6 化合物7,8,11的X射線單晶衍射
        2.9.7 菌種及培養(yǎng)條件
        2.9.8 TLC-生物自顯影實(shí)驗(yàn)
        2.9.9 利用Alamar blue染色法測(cè)定最小抑菌濃度(MICs)
        2.9.10 化合物在抑制C.albicans菌絲形成中的作用
        2.9.11 HPLC測(cè)定化合物胞內(nèi)累積量
        2.9.12 GC-MS聯(lián)用測(cè)定甾醇類物質(zhì)的含量
        2.9.13 qPCR分析
        2.9.14 統(tǒng)計(jì)分析
    2.10 新化合物的理化性質(zhì)
    2.11 總結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 指葉苔化學(xué)成分及抗炎活性研究
    3.1 前言
    3.2 新化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
    3.3 已知化合物的結(jié)構(gòu)確定
    3.4 LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生NO測(cè)試化合物的抗炎作用
    3.5 化合物1和2抑制LPS誘導(dǎo)的IL-6,IL-β,IL-α和TNF-α的表達(dá)
    3.6 化合物1和2抑制LPS誘發(fā)的NF-κB和TFE3的激活
    3.7 實(shí)驗(yàn)部分
        3.7.1 苔蘚的采集與鑒定
        3.7.2 測(cè)試儀器
        3.7.3 溶劑和試劑
        3.7.4 層析系統(tǒng)和顯色劑
        3.7.5 提取分離流程
        3.7.6 化合物1,2的X射線單晶衍射
        3.7.7 細(xì)胞培養(yǎng)及處理
        3.7.8 NO 產(chǎn)量的測(cè)量
        3.7.9 細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)
        3.7.10 實(shí)時(shí)定量PCR
        3.7.11 免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        3.7.12 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        3.7.13 統(tǒng)計(jì)分析
    3.8 新化合物的理化性質(zhì)
    3.9 總結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表文章目錄
附錄Ⅰ 苔蘚照片
附錄Ⅱ 補(bǔ)充信息
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表

【參考文獻(xiàn)】

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1 張婭嬌;婁紅祥;;天然化合物的抗真菌作用機(jī)制[J];食品與藥品;2006年07期

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3 朱瑞良，王幼芳;4種值得注意的中國苔類植物[J];華東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1994年01期

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本文編號(hào)：2845195