目的優(yōu)化黃連膏提取工藝,并評價(jià)其體外抗炎活性。方法以藥材粒度、煎炸時(shí)間、煎炸溫度、浸泡時(shí)間為影響因素,姜黃素總量為評價(jià)指標(biāo),正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝。檢測黃連膏提取油(0.05、0.5、1μL/mL)對Hacat細(xì)胞中TARC、MDC、RANTES、IL-8水平的抑制作用。結(jié)果最佳工藝為飲片不浸泡而直接投入5倍量香油中,200℃下煎炸4 h,姜黃素總量為1.198 g。黃連膏提取油降低了TARC、MDC、RANTES、IL-8水平,并呈劑量依賴性(P0.05,P0.01)。結(jié)論該方法穩(wěn)定可行,可用于提取體外抗炎活性較強(qiáng)的黃連膏。
【部分圖文】：

圖6顯示,TNF-α、IFN-γ處理后IL-8水平高于空白對照組(P<0.05),而0.05、0.5、1 μL/mL黃連膏提取油對其水平有較強(qiáng)的抑制作用(P<0.01)。3 討論

采用重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析,發(fā)現(xiàn)不同造模濃度TNF-α、IFN-γ對HaCat細(xì)胞存活率影響的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),并隨著造模濃度升高而逐漸降低(P<0.05)。圖1顯示,當(dāng)造模濃度為20 ng/mL時(shí),細(xì)胞存活率為50%,即為LD50。2.3.2 細(xì)胞毒性試驗(yàn)

0.25% EDTA-胰蛋白酶消化HaCat細(xì)胞后,MEM完全培養(yǎng)基吹打稀釋成濃度為4×104/mL的細(xì)胞懸液,以每孔100 μL的體積加到96孔板中,置于5%CO2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁后棄去完全培養(yǎng)基,加入空白培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)6 h,再加入含0.05、0.5、1、2 μL/mL黃連膏提取油的MEM空白培養(yǎng)基各100 μL,以MEM空白培養(yǎng)基為空白對照組[14],每組平行設(shè)置6個(gè)副孔,作用24 h后每孔加入5 mg/mL MTT溶液20 μL,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,棄去原培養(yǎng)液,加入150 μL DMSO溶解,振蕩3 min使結(jié)晶物充分溶解,在490 nm波長處檢測吸光度(OD),計(jì)算細(xì)胞存活率,結(jié)果見圖2。由此可知,提取油濃度為2 μL/mL時(shí)對細(xì)胞生長有抑制作用(P<0.01),存活率為77%,而在0.05～1 μL/mL時(shí)無細(xì)胞毒性,故最終選擇0.05、0.5、1 μL/mL作為實(shí)驗(yàn)濃度。2.3.3 TARC、MDC、RANTES、IL-8水平檢測
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