千金子為大戟科植物續(xù)隨子(Euphorbia Lathyris L.)的干燥成熟種子,具有瀉下逐水,破血消癥等功效,常用于治療毒蛇咬傷、急性淋巴細胞性白血病、小兒癲癇等疾病。千金子中分得的多種二萜醇酯類化合物是千金子中主要的藥效物質(zhì),但至今為止對該類成分的含量測定、生物活性以及以該類成分作為有效部位的研究鮮見報道。本文對千金子中的二萜醇酯類化學成分、二萜醇酯類有效部位的制備方法、藥材及有效部位中二萜醇酯類化學成分的含量測定方法以及生物活性等內(nèi)容進行了深入研究。首先,本文利用柱層析及制備型高效液相色譜等分離手段,從千金子中分離得到8個二萜醇酯類化合物單體,并利用NMR等波譜學手段鑒定了其化學結(jié)構(gòu)。它們分別為6,17-環(huán)氧千金二萜醇-5,15-二乙酸-3-苯乙酸酯(化合物Ⅰ)、7-羥基-千金二萜醇-5,15-二乙酸-3,7-二苯甲酸酯(化合物Ⅱ)、千金二萜醇-5,15-二乙酸-3-苯甲酸酯(化合物Ⅲ)、17-羥基-異千金二萜醇-15,17-二乙酸-3-苯乙烯酸酯(化合物Ⅳ)、17-羥基-異千金二萜醇-5,15,17-三乙酸-3-苯甲酸酯(化合物Ⅴ)、千金二萜醇-5,15-二乙酸-3-煙酸酯(化合物Ⅵ)、千金二萜醇-5,15-二乙酸-3-苯乙酸酯(化合物Ⅶ),7-羥基-千金二萜醇-5,15-二乙酸-3-苯甲酸-7-煙酸酯(化合物Ⅷ)。其次,本文建立了千金子中七種二萜醇酯類成分的HPLC含量測定的方法。這七種二萜醇酯類成分分別為化合物Ⅰ~化合物Ⅶ。通過對提取溶劑種類、提取方法、提取溶劑用量和提取次數(shù)等因素的考察,確立了最佳提取方法并進行了HPLC含量測定方法學考察。實驗結(jié)果表明,化合物I~VII在0.005 mg/m L~0.2mg/mL范圍內(nèi)峰面積S和進樣濃度C具有良好的線性關(guān)系,檢測限在0.03~0.80ng范圍內(nèi)。化合物I~VII的精密度、重復性、穩(wěn)定性的RSD值均小于2.0%,加樣回收率在96.5%~99.2%范圍內(nèi),RSD值在0.26%~0.75%范圍內(nèi),說明本實驗所建立的含量測定方法具有靈敏度高、精密度好、準確度高等優(yōu)點。含量測定結(jié)果表明,千金子藥材中化合物I-VII的含量分別為:3.260、2.165、4.745、0.705、1.365、0.425、0.615 mg/g,七個化合物的含量之和為13.3 mg/g,其中化合物I、II、III、V的含量較高。在明確千金子中二萜醇酯類成分及其含量的基礎(chǔ)上,本文首次發(fā)明了先采用機械壓榨的方法制得千金子油,再利用甲醇萃取方法獲得二萜醇酯有效部位的制備方法,并建立了有效部位中七種二萜醇酯類成分(化合物I~VII)的HPLC含量測定方法。結(jié)果表明,利用3倍體積的甲醇萃取千金子油3次,回收甲醇,干燥,即可得到二萜醇酯有效部位。經(jīng)測定,該有效部位中化合物I~VII的含量之和為77.21%。最后,本文研究了八種二萜醇酯類化合物單體及二萜醇酯有效部位對酪氨酸酶的抑制作用。結(jié)果表明,其中七種化合物及二萜醇酯有效部位對酪氨酸酶具有抑制作用且呈劑量效應(yīng)關(guān)系,千金二萜醇-5,15-二乙酸-3-苯甲酸酯(化合物Ⅲ)的抑制率最高。這一研究結(jié)果提示千金二萜醇酸酯類化合物及其有效部位可能具有皮膚美白功效。綜上所述,本實驗從千金子中分離鑒定了8個二萜醇酯類化合物單體,首次采用壓榨及甲醇萃取的方式從千金子中分離得到了二萜醇酯類有效部位;首次建立了千金子藥材中及二萜醇酯有效部位中七種二萜醇酯類化合物的HPLC含量測定方法;首次對分離得到的八種二萜醇酯類化合物及其有效部位抑制酪氨酸酶作用進行了研究。本實驗的研究結(jié)果為千金子質(zhì)量標準的完善以及千金子中二萜醇酯類成分的開發(fā)利用提供了新的科學依據(jù)。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R284.1;O652
【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 植物學特征
    1.2 化學成分
        1.2.1 二萜類
        1.2.2 香豆素類
        1.2.3 甾醇類
        1.2.4 脂肪酸
        1.2.5 其他類化合物
    1.3 含量測定
    1.4 藥理作用
        1.4.1 祛斑美白作用
        1.4.2 抗腫瘤作用
        1.4.3 抗腫瘤多藥耐藥作用
        1.4.4 致瀉作用
        1.4.5 毒副作用
    1.5 臨床應(yīng)用
    1.6 研究意義與研究內(nèi)容
        1.6.1 研究意義
        1.6.2 研究內(nèi)容
第2章 千金子中二萜醇酯類成分的研究
    2.1 實驗部分
        2.1.1 實驗儀器與試劑
        2.1.2 千金子中二萜醇酯類化合物的提取分離
    2.2 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
        2.2.1 化合物Ⅰ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.2 化合物Ⅱ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.3 化合物Ⅲ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.4 化合物Ⅳ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.5 化合物Ⅴ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.6 化合物Ⅵ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.7 化合物Ⅶ的結(jié)構(gòu)解析
        2.2.8 化合物Ⅷ的結(jié)構(gòu)解析
    2.3 小結(jié)
第3章 千金子中二萜醇酯類成分的含量測定
    3.1 實驗儀器及試劑
    3.2 色譜條件
        3.2.1 UV檢測波長的確定
        3.2.2 流動相的選擇
    3.3 千金子藥材中二萜醇酯類成分的提取條件考察
        3.3.1 提取溶劑考察
        3.3.2 提取方法考察
        3.3.3 液料比考察
        3.3.4 提取次數(shù)考察
        3.3.5 提取條件的確立
    3.4 千金子藥材中二萜醇酯類成分的方法學考察
        3.4.1 供試品溶液的制備
        3.4.2 對照品儲備液的制備
        3.4.3 線性關(guān)系
        3.4.4 精密度
        3.4.5 重復性
        3.4.6 穩(wěn)定性
        3.4.7 加樣回收率實驗
        3.4.8 檢出限和定量限
    3.5 含量測定
        3.5.1 供試品溶液的制備
        3.5.2 對照品溶液的制備
        3.5.3 樣品的測定
    3.6 小結(jié)
第4章 千金子二萜醇酯有效部位的制備與含量測定方法研究
    4.1 二萜醇酯有效部位的制備條件考察
        4.1.1 萃取劑考察
        4.1.2 液料比考察
        4.1.3 萃取次數(shù)考察
        4.1.4 提取條件的確立
    4.2 二萜醇酯有效部位含量測定的方法學考察
        4.2.1 二萜醇酯有效部位的制備
        4.2.2 對照品儲備液的制備
        4.2.3 重復性
        4.2.4 穩(wěn)定性
        4.2.5 加樣回收率實驗
    4.3 含量測定
        4.3.1 供試品溶液的制備
        4.3.2 對照品溶液的制備
        4.3.3 樣品的測定
    4.4 小結(jié)
第5章 千金子二萜醇酯類物質(zhì)抑制酪氨酸酶活性研究
    5.1 儀器與試劑
    5.2 實驗原理
    5.3 樣品溶液的配置
    5.4 抑制酪氨酸酶的活性實驗方法
    5.5 實驗結(jié)果分析
第6章 總結(jié)
    6.1 千金子化學成分的研究
    6.2 千金子中二萜醇酯類化合物的 HPLC 含量測定方法
    6.3 千金子中二萜醇酯有效部位的制備方法與含量測定方法
    6.4 二萜醇酯有效部位及二萜醇酯單體化合物抑制酪氨酸酶的活性
參考文獻
附圖
作者簡介及在校期間的科研成果
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2842980