第一部分PSD抗日本血吸蟲活性的研究目的研究(Pulsatilla saponin D,PSD)對小鼠體內(nèi)發(fā)育不同階段的日本血吸蟲的滅殺效果。方法將感染過日本血吸蟲尾蚴的ICR小鼠根據(jù)體重隨機分為2批進行實驗,每批分為6個組,每組10只小鼠。第1批感染血吸蟲尾蚴后的14天開始給藥,第2批感染尾蚴后的第35天開始給藥。在感染后14-18天和35-39天進行尾靜脈注射,劑量組(分別為10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg),每天給藥2次,連續(xù)給藥5天;吡喹酮組以300mg/kg劑量口服灌胃(PO)吡喹酮,1次量灌胃;青蒿琥酯組以300mg/kg劑量經(jīng)口服灌胃(PO)青蒿琥酯,1次量灌胃;以感染后未治療組作為對照。感染49天后通過摘除眼球進行血液采集,解剖小鼠并收集蟲體計算數(shù)量,計算減蟲率和減雌率,摘取肝臟用4%KOH消化,計算減卵率。結(jié)果PSD組檢獲平均蟲荷數(shù)與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組的減蟲率與對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組檢查獲得的平均雌蟲數(shù)與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組的減雌率與對照組相比有明顯差異(*P0.05,**P0.01),PSD組檢獲平均蟲卵數(shù)與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01)。結(jié)論低劑量組(10mg/kg)、中劑量組(20mg/kg)和高劑量組(40mg/kg)的PSD對于感染后的小鼠均有不同程度的治療效果:在相同的成長期內(nèi),不同劑量的PSD作用于小鼠體內(nèi)日本血吸蟲,高劑量(40mg/kg)組的殺蟲效果比其他劑量組效果明顯;在同劑量的條件下,PSD對感染35天齡的成蟲治療效果優(yōu)于14天齡童蟲的治療效果。在所有的不同劑量的實驗組中,減雌率高于減蟲率,與感染后未治療的對照組相比,雌蟲的數(shù)量減少明顯。第二部分PSD抗曼氏血吸蟲活性的研究目的觀察PSD對小鼠體內(nèi)發(fā)育不同階段曼氏血吸蟲的殺蟲效果。方法將感染曼氏血吸蟲尾蚴的小鼠根據(jù)體重隨機分2批進行實驗,每批4個組,每組10只小鼠。第1批感染后第14天開始給藥,第2批感染后第42天開始給藥。在感染后第14-18天和第42-46天尾靜脈注射40mg/kg PSD,每天2次,連續(xù)注射5天;吡喹酮組以300mg/kg劑量經(jīng)口服灌胃吡喹酮,1次量灌胃;青蒿琥酯組以300mg/kg劑量經(jīng)口服灌胃青蒿琥酯,1次量灌胃;以感染后未治療的對照組進行對照。感染第56天后通過摘除眼球取血并解剖小鼠,收集蟲體計數(shù),計算減蟲率和減雌率。取肝臟用4%KOH消化并計算減卵率。結(jié)果PSD組檢獲平均蟲荷數(shù)與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組的減蟲率與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組檢獲平均雌蟲數(shù)與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組的減雌率與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01),PSD組檢獲平均蟲卵數(shù)與未經(jīng)過治療的對照組相比有顯著差異(*P0.05,**P0.01)。結(jié)論同一劑量PSD(40mg/kg)對小鼠體內(nèi)不同發(fā)育階段的曼氏血吸蟲有不同程度的治療效果:42天齡成蟲殺滅效果好于14天齡童蟲殺滅效果;在所有單一劑量(40mg/kg)的實驗治療組中,減雌率要高于減蟲率,與感染后未治療的對照組相比,雌蟲的數(shù)量減少明顯;PSD可顯著降低42天蟲齡小鼠體內(nèi)的總蟲荷數(shù)量及雌蟲的數(shù)量。第三部分PSD對于已經(jīng)感染日本血吸蟲的小鼠體內(nèi)免疫調(diào)控的機制和其殺蟲作用的初步研究目的將肝臟組織進行包埋切片,在光學(xué)顯微鏡下觀察PSD對感染了日本血吸蟲小鼠肝臟組織病理學(xué)的影響,并檢測相關(guān)體內(nèi)免疫因子的動態(tài)變化,進而研究PSD對小鼠日本血吸蟲病引發(fā)的炎癥反應(yīng)的影響;通過掃描電子顯微鏡進行掃描觀察血吸蟲表皮的形態(tài)變化,來初步探索PSD對日本血吸蟲的作用機理。方法將感染日本血吸蟲的ICR小鼠根據(jù)體重隨機分為2批,每批6組,每組10只。第1批感染后第14天開始給藥,第2批感染后第35天開始給藥。在感染后14-18d組和35-39d尾靜脈注射不同劑量的PSD(10mg/kg,20mg/kg和40mg/kg),每天2次,連續(xù)5d;吡喹酮組以300mg/kg劑量經(jīng)口灌服吡喹酮,1次量灌胃;青蒿琥酯組經(jīng)口服灌胃青蒿琥酯(300mg/kg),1次量灌胃;以感染但是未治療組作為對照。感染7周后通過摘除小鼠眼球的方式采集血液并解剖小鼠,將肝臟組織包埋切片,在光鏡下觀察PSD對肝臟肉芽腫的影響;參照產(chǎn)品說明書,用夾心法ELISA測定血清中IgG、TNF-α、IL-4和IL-17。將ICR小鼠感染30條尾蚴,42天之后,用枸櫞酸鈉(0.3%)溶液灌注沖蟲,獲得無菌的日本血吸蟲成蟲。用4ml RPMI 1640含10%胎牛血清,100 U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素和80μl兔紅細胞的培養(yǎng)基對日本血吸蟲成蟲進行培養(yǎng),12小時后,將培養(yǎng)基更換含不同濃度的PSD(3.75、7.5、15、30、60μg/ml)培養(yǎng)基中培養(yǎng)72小時。所有的蟲體均在37℃,含5%CO_2和95%空氣的環(huán)境中培養(yǎng)7天,培養(yǎng)基每3天更換一次,觀察PSD對體外日本血吸蟲成蟲的殺傷作用。用含有60μg/ml的PSD的培養(yǎng)基培養(yǎng)無菌的日本血吸蟲成蟲4個小時,然后放置于10%的戊二醛緩沖液中,保持4℃,4小時;PBS溶液(1%),4℃,2小時。PBS洗完后,將蟲體放置在乙醇中脫水,并在液態(tài)的CO_2中干燥。最后,將標本用掃描電子顯微鏡掃描,觀察PSD對蟲體表皮的影響。結(jié)果感染日本血吸蟲但是并未治療的對照組小鼠肝臟的組織結(jié)構(gòu)明顯改變,表現(xiàn)出炎性浸潤和產(chǎn)生大量肉芽腫的特點,與未治療的對照組相比,經(jīng)PSD治療后的小鼠肝臟內(nèi)肉芽腫炎癥的大小顯著降低。通過PSD(20mg/kg)對感染14-18天和35-39天的小鼠進行治療發(fā)現(xiàn),肝臟中炎性細胞的數(shù)量顯著減少,肝小葉的結(jié)構(gòu)恢復(fù)并接近正常組織,大部分肝細胞呈現(xiàn)出正常的狀態(tài)。通過ELISA的方法對PSD對小鼠免疫反應(yīng)的影響進行測定,結(jié)果表明:與感染組相比,PSD(20mg/kg)能有效降低IgG,TNF-α,IL-4和IL-17的表達,表現(xiàn)出最佳的免疫調(diào)節(jié)作用。此外,掃描電子顯微鏡的檢查結(jié)果顯示治療組雄性蟲體表皮呈現(xiàn)異常結(jié)構(gòu),間結(jié)節(jié)皮層區(qū)呈現(xiàn)廣泛的水腫、糜爛和脫皮。結(jié)論20mg/kg和10mg/kg PSD的治療劑量都可以顯著降低肉芽腫的炎性反應(yīng),降低血吸蟲蟲卵對肝的損傷。通過掃描電子顯微鏡觀察,60μg/ml PSD治療組雄性蟲體表面損傷最為嚴重,受損的皮層脫落,并暴露出皮下組織。這些結(jié)果表明,PSD具有一定的抗血吸蟲活性的作用。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1-1 不同劑 PSD 對 內(nèi) 14 日本 吸蟲 用后的減蟲率Figure 1-1. Worm reduction rates in 14d of S. japonicum in mice at different dosagePSD.**P<0.01 vs NC (T. test)

圖 1-1 不同劑 PSD 對 內(nèi) 14 日本 吸蟲 用后的減蟲率igure 1-1. Worm reduction rates in 14d of S. japonicum in mice at different dosaPSD.**P<0.01 vs NC (T. test)

白頭翁皂苷提取物 PSD 抗日本血吸蟲和曼氏血吸蟲的藥效研究 表 1.3 PSD 對 內(nèi) 日本 吸蟲的殺滅 用（35d）Table 1.3 The killing effect of PSD on S. japonicum. of 35d infection in組別 給藥劑量 平均蟲數(shù) 減蟲率 平均雌蟲數(shù) 減雌率mg/kg x±s (%) ±s (%)PSD-LB 10 36.0±10.2** 27.8% 17.6±4.5* 38.4PSD-MB 20 28.2±13.3* 43.1% 10.1±5.2** 58.2PSD-HB 40 26.6±16.1* 48.2% 9.0±5.0** 62.4%PZQ-B 300 8.3±14.9** 80.2% 3.1±5.9** 86.5%ART-B 300 4.4±4.0** 91.5% 1.2±1.2** 95.6%對照組 51.2±10.7 24.1±5.7注：*與對照組比較，P<0.05, **與對照組比較，P<0.01(T. test)
【參考文獻】

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本文編號：2842651