【摘要】：冬凌草甲素是從唇形科植物冬凌草中分離的天然有機(jī)化合物,具有有較強(qiáng)的抗腫瘤、抗菌及抗突變作用,主要作為臨床藥物治療各種癌癥,且有顯著療效。近年來,冬凌草甲素的藥用價(jià)值引起廣泛關(guān)注,但目前沒有冬凌草甲素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的毒性報(bào)道,因此,本實(shí)驗(yàn)首先建立卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,在培養(yǎng)體系中添加不同濃度冬凌草甲素培養(yǎng)卵巢顆粒細(xì)胞,通過分析卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量、抗氧化劑及抗氧化能力、激素分泌的情況,探討冬凌草甲素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞抗氧化功能的影響。(1)實(shí)驗(yàn)一大鼠卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系建立取25-29日齡大鼠處死,無菌條件收取卵巢顆粒細(xì)胞,加入細(xì)胞培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱培養(yǎng),顯微鏡觀察卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài),HE染色和免疫組化鑒定顆粒細(xì)胞。結(jié)果卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài)完好,細(xì)胞純度在90%以上。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明建立的卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系可用于后期實(shí)驗(yàn)研究。(2)實(shí)驗(yàn)二冬凌草甲素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞活力及分泌雌激素的影響收集卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng),同時(shí)在培養(yǎng)體系中添加不同濃度(0、7.5、10.0、12.5、15.0μg/m L)冬凌草甲素24h,CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力,試劑盒分析雌激素含量。結(jié)果隨著冬凌草甲素給藥濃度的增加,卵巢顆粒細(xì)胞增殖率降低,雌二醇分泌量逐漸減少,孕酮含量顯著下降。結(jié)果表明冬凌草甲素抑制卵巢顆粒細(xì)胞增殖及雌激素分泌。(3)實(shí)驗(yàn)三冬凌草甲素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞抗氧化能力的影響卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中添加trolox及冬凌草甲素培養(yǎng)24h,TBA法和DNTB法分別檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)MDA、GSH含量,ELISA檢測(cè)抗氧化物酶活力,DCFH-DA探針和Hoechst 33342染色法檢測(cè)ROS含量。結(jié)果隨著冬凌草甲素給藥濃度的增加,卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)MDA含量增加,GSH含量降低,抗氧化酶(SOD、GSH-Px和CAT)活力下降,ROS含量增加;trolox干預(yù)組卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)MDA含量明顯減少,抗氧化物GSH含量、SOD、GSH-Px、CAT酶活力顯著增加。結(jié)果表明冬凌草甲素抑制卵巢顆粒細(xì)胞抗氧化功能,trolox能緩解冬凌草甲素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的氧化損傷。
【學(xué)位授予單位】：北京農(nóng)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

不同培養(yǎng)時(shí)間原代卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài)觀察（100×）

不同培養(yǎng)時(shí)間卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖

敝臉魷炙勞�。�?2 不同培養(yǎng)時(shí)間卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖3.2 卵巢顆粒細(xì)胞鑒定采用 HE 法對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行染色，結(jié)果見圖 3。在顯微鏡下可見貼壁的卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài)完好，大小均一，輪廓清晰，呈多邊形或梭型，細(xì)胞核染成深藍(lán)色，呈卵圓形或不規(guī)則形，位于細(xì)胞中央，細(xì)胞漿染成淡紅色并含有許多顆粒。
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本文編號(hào)：2842690