目的:本論文旨在提取和純化新疆兩色金雞菊總黃酮,同時建立純化總黃酮有效部位的UPLC化學(xué)成分分析與含量測定方法;另外,考察總黃酮中化學(xué)成分的清除自由基、抗氧化以及抑制α-葡萄糖苷酶活性的能力,為兩色金雞菊新藥研發(fā),以及其體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)的研究提供基礎(chǔ)依據(jù)。方法:(1)采用響應(yīng)面分析(Response Surface Analysis Methodology,RSM)法超聲波提取總黃酮,Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)模型優(yōu)化,確定超聲波提取參數(shù),通過XDA-1、NKA-10、AB-8等10余種大孔吸附樹脂對提取總黃酮的吸附和解吸性能的考察,篩選出具有較強(qiáng)的吸附性能和較好的解吸能力的大孔樹脂,純化與富集總黃酮有效部位。(2)采用UPLC-PDA對大孔吸附樹脂純化后總黃酮進(jìn)行定性分析,采用ACQUITY UPLC?HSS T3(1.8μm,2.1×100 mm),以乙腈-0.5%甲酸水為流動相,流速0.2 ml·min-1,進(jìn)樣體積1μl,溫度30o C,檢測波長280 nm,確定總黃酮含有的化學(xué)成分,建立各化學(xué)成分純化前后的含量測定方法,分別獲得各化學(xué)成分含量。(3)采用薄層色譜-生物自顯影(Thin Layer Chromatography Bioautography,TLC-Bio)技術(shù)跟蹤檢識新疆兩色金雞菊純化總黃酮中具有抗氧化、α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的活性有效成分,建立總黃酮體外清除自由基,抗脂質(zhì)過氧化和α-糖苷酶活性抑制的實(shí)驗(yàn)方法。結(jié)果:(1)經(jīng)過對超聲時間、液料比、乙醇濃度這三個條件優(yōu)化后,確定為液料比21:1、提取時間30 min、乙醇濃度60%,獲得質(zhì)量較穩(wěn)定、含量較高的總黃酮提取物,提取率平均可達(dá)4.65%;篩選出AB-8型大孔吸附樹脂對新疆兩色金雞菊總黃酮進(jìn)行純化富集:總黃酮上樣濃度為0.54 mg·ml-1,上樣量為樹脂體積的2.1 BV,吸附平衡4 h,2~3 BV蒸餾水沖洗柱床,2.2 BV的50%乙醇洗脫,分段收集,可獲得較高含量的總黃酮有效部位。(2)在新疆兩色金雞菊純化總黃酮定性分析中,確定純化后總黃酮含有以下種物質(zhì):矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、綠原酸、黃諾馬苷、櫟草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、蘆丁、黃酮奧卡寧、馬里苷、奧卡寧、木犀草素、槲皮素,分別測定含量,其線性范圍分別10.04-100.4μg·ml-1、2.51-40.16μg·ml-1、49.80-298.80μg·ml-1、49.80-298.80μg·ml-1、2.51-40.16μg·ml-1、50.00-300.00μg·ml-1、64.00-384.00μg·ml-1、50.20-301.20μg·ml-1、2.48-39.68μg·ml-1、2.50-40.00μg·ml-1在濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r值均0.999),加樣回收率均在98%-100%。(3)在TLC-Bio方法篩選總黃酮生物活性成分的實(shí)驗(yàn)中,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8:7.4:3)為展開劑,分別以DPPH與ABTS甲醇溶液進(jìn)行顯色,檢識分析大孔吸附樹脂純化后總黃酮中具有抗氧化作用成分;以相同薄層色譜條件展開純化總黃酮,以α-葡萄糖苷酶為酶源,以對硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷(p NPG)為底物,以固藍(lán)B鹽為顯色劑,日光下檢識到具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的化學(xué)成分;純化后總黃酮體外清除DPPH、ABTS與抗脂質(zhì)過氧化的能力(IC50)依次是,(58.75±2.549)、(23.13±0.0004)與(19.74±1.09)μg·ml-1;采用p NPG法測定α-葡萄糖苷酶與大鼠小腸α-糖苷酶群的抑制活性,其IC50分別為(46.79±9.024)與(0.771±7.735)mg·ml-1。結(jié)論:(1)響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲波提取總黃酮工藝參數(shù),可獲得較高含量的總黃酮提取物;AB-8型大孔吸附樹脂對兩色金雞菊總黃酮有效部位具有較好的純化富集作用。(2)總黃酮中含有的馬里苷、黃諾馬苷、奧卡寧、黃酮奧卡寧具有較好自由基清除能力與α-葡萄糖苷酶活性抑制能力;(3)純化后總黃酮對DPPH、ABTS、超氧陰離子自由基與脂質(zhì)過氧化均有具有較強(qiáng)的抗氧化活性,可作為一種新的自由基清除劑和天然抗氧化劑;純化后總黃酮具有作為新型α-葡萄糖苷酶抑制劑與抗氧化劑的藥用開發(fā)價值。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284.1;R285
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號表
前言
第一章 兩色金雞菊總黃酮的提取、純化工藝
    1.1 響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲波提取總黃酮工藝
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 方法與結(jié)果
        1.1.3 討論
        1.1.4 小結(jié)
    1.2 兩色金雞菊總黃酮純化工藝
        1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2.2 方法與結(jié)果
        1.2.3 討論
        1.2.4 小結(jié)
第二章 兩色金雞菊總黃酮化學(xué)成分分析及其含量測定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 儀器與試劑
        2.1.2 對照品與藥材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
        2.2.1 供試品溶液的制備
        2.2.2 對照品溶液的制備
        2.2.3 色譜條件
        2.2.4 定性分析
        2.2.5 含量測定及方法學(xué)考察
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 兩色金雞菊總黃酮成分生物活性研究
    3.1 薄層色譜-生物自顯影技術(shù)考察總黃酮中活性成分
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 方法與結(jié)果
        3.1.3 討論
        3.1.4 小結(jié)
    3.2 總黃酮抗氧化活性研究
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
        3.2.3 討論
        3.2.4 小結(jié)
    3.3 總黃酮糖苷酶抑制活性研究
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.3.2 方法與結(jié)果
        3.3.3 討論
        3.3.4 小結(jié)
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
附件

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王菲;山顯彤;張家境;王戰(zhàn)勇;;響應(yīng)面法優(yōu)化白花菜中黃酮類化合物的提取研究[J];遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報;2017年01期

2 高飛;陳芳;馬旗聯(lián);郝麗莉;劉江云;李雅麗;楊世林;;HPLC同時測定雪菊中4種黃酮類成分[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2016年20期

3 古扎力努爾·艾爾肯;王健;蘭怡;李新霞;李琳琳;王燁;毛新民;;兩色金雞菊花提取物的抗氧化活性測定及TLC-Bio分析抗氧化活性成分[J];新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2016年07期

4 木合塔爾·吐爾洪;買買提·吐爾遜;熱薩萊提·伊敏;楚剛輝;木尼熱·阿不都克力木;;RP-HPLC法同時測定昆侖雪菊中綠原酸、蘆丁、槲皮素和木犀草素的量[J];中草藥;2016年09期

5 姚新成;王新兵;張婷;陳文;唐輝;;新疆兩色金雞菊總黃酮含量測定顯色反應(yīng)體系[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2015年03期

6 邱佳俊;高飛;李雅麗;劉江云;木胡牙提·烏拉斯?jié)h;郝麗莉;楊世林;;雪菊總黃酮抗氧化活性研究[J];中國現(xiàn)代中藥;2015年05期

7 袁輝;趙建勇;楊文菊;;新疆不同產(chǎn)地雪菊UPLC指紋圖譜的建立及其成分測定[J];中草藥;2015年08期

8 姚新成;張婷;石瑞坤;王貝貝;陳文;;新疆兩色金雞菊中總黃酮含量測定方法的研究[J];石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年02期

9 梁樂;李琳琳;古扎力努爾·艾爾肯;李新霞;毛新民;;薄層生物自顯影技術(shù)篩選兩色金雞菊中的活性成分[J];藥物分析雜志;2015年03期

10 劉愛敬;廖爭爭;郭琳;趙旭;畢開順;賈英;;大孔樹脂純化黃秋葵黃酮及其體外抗氧化活性研究[J];食品工業(yè)科技;2015年16期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 阿賽古麗;昆侖雪菊化學(xué)成分分析和多糖的提取及活性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張發(fā)強(qiáng);雪菊化學(xué)成分的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定[D];吉林大學(xué);2014年

本文編號：2842546