為了分析葉生小皮傘菌株ME-1通過不同發(fā)酵方式得到的發(fā)酵產(chǎn)物中麥角甾醇和麥角甾酮2種活性成分的含量,采用HPLC雙波長法測定液體發(fā)酵菌絲體和固體發(fā)酵產(chǎn)物中的麥角甾醇和麥角甾酮含量。結(jié)果表明:麥角甾醇、麥角甾酮分別在0.1～10.0和0.012 3～0.123 0 g,線性良好(R~2=0.999 8、R~2=0.999 6),精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD均小于2.0%,加樣回收率在99.30%～103.93%范圍內(nèi);含量分析表明,液體發(fā)酵菌絲體中麥角甾醇含量為125.0μg/g,麥角甾酮含量為1.2μg/g;固體發(fā)酵物中麥角甾醇的含量為37.7μg/g,麥角甾酮的含量為4.8μg/g。由此看出,利用液體發(fā)酵方式可在其菌絲體中獲得更多的麥角甾醇,而固體發(fā)酵產(chǎn)物中的麥角甾銅含量較高。本研究建立了穩(wěn)定、高效、重現(xiàn)性好的葉生小皮傘活性成分的HPLC雙波長分析法,明確了不同發(fā)酵方式下不同發(fā)酵產(chǎn)物中麥角甾醇和麥角甾酮的差異,為葉生小皮傘的綜合評價(jià)和質(zhì)量控制提供了理論依據(jù)。
【部分圖文】：

藪級(jí)哉掌啡芤骸⒙蠼晴尥?哉掌啡芤漢?供試樣品溶液，分別按照“1.3”項(xiàng)下的色譜條件，利用高效液相色譜儀進(jìn)行分析檢測。結(jié)果顯示，葉生小皮傘液體發(fā)酵菌絲體和固體發(fā)酵產(chǎn)物中均含有麥角甾醇和麥角甾酮。麥角甾醇對照品和麥角甾酮對照品色譜圖如圖1所示；供試樣品色譜圖如圖2和圖3所示。1007550250058.97610152025(a)(b)min響應(yīng)值（mAU）Responsevalue23.512001150100500010205060min3040時(shí)間（min）Time圖1麥角甾醇對照品（a）和麥角甾酮對照品（b）的HPLC色譜圖Fig.1HPLCchromatogramsofergosterolreferencesub-stance（a）andergosteronereferencesubstance（b）

第4期577550250058.93410152025(a)(b)響應(yīng)值（mAU）Responsevalue8.98950040030020010000510251520時(shí)間（min）Time圖2菌絲體（a）和固體發(fā)酵產(chǎn)物（b）中麥角甾醇的HPLC色譜圖Fig.2HPLCchromatogramsofergosterolinmycelium（a）andsolidfermentationproduct（b）10.07.55.02.50.001023.647203040(a)(b)響應(yīng)值（mAU）Responsevalue23.622010203040時(shí)間（min）Time10.07.55.02.50.0圖3菌絲體（a）和固體發(fā)酵產(chǎn)物（b）中麥角甾酮的HPLC色譜圖Fig.3HPLCchromatogramsofergosteroneinmycelium（a）andsolidfermentationproduct（b）2.2方法學(xué)考察2.2.1線性關(guān)系考察分別取麥角甾醇、麥角甾酮對照品溶液，依次進(jìn)樣1、2、4、8、10L，測定吸收峰面積，以麥角甾醇、麥角甾酮的進(jìn)樣質(zhì)量和色譜峰面積分別作為橫坐標(biāo)、縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得麥角甾醇和麥角甾酮的線性回歸方程分別為Y=215942X51911（R2=0.9998）和Y=28058X+2779.8（R2=0.9996），表明麥角甾醇和麥角甾酮分別在0.1~10.0和0.0123~0.1230g線性關(guān)系良好。2.2.2精密度試驗(yàn)取麥角甾醇、麥角甾酮對照品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，每次進(jìn)樣10L，分別得到麥角甾醇和麥角甾酮的RSD分別為0.83%和0.55%，RSD均小于2.0%，表明該測量方法精密度良好。2.2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取ME-1菌絲體和固體發(fā)酵產(chǎn)物供試品溶液，分別在配制后0、4、8、12、16、20、24h

5(a)(b)響應(yīng)值（mAU）Responsevalue8.98950040030020010000510251520時(shí)間（min）Time圖2菌絲體（a）和固體發(fā)酵產(chǎn)物（b）中麥角甾醇的HPLC色譜圖Fig.2HPLCchromatogramsofergosterolinmycelium（a）andsolidfermentationproduct（b）10.07.55.02.50.001023.647203040(a)(b)響應(yīng)值（mAU）Responsevalue23.622010203040時(shí)間（min）Time10.07.55.02.50.0圖3菌絲體（a）和固體發(fā)酵產(chǎn)物（b）中麥角甾酮的HPLC色譜圖Fig.3HPLCchromatogramsofergosteroneinmycelium（a）andsolidfermentationproduct（b）2.2方法學(xué)考察2.2.1線性關(guān)系考察分別取麥角甾醇、麥角甾酮對照品溶液，依次進(jìn)樣1、2、4、8、10L，測定吸收峰面積，以麥角甾醇、麥角甾酮的進(jìn)樣質(zhì)量和色譜峰面積分別作為橫坐標(biāo)、縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得麥角甾醇和麥角甾酮的線性回歸方程分別為Y=215942X51911（R2=0.9998）和Y=28058X+2779.8（R2=0.9996），表明麥角甾醇和麥角甾酮分別在0.1~10.0和0.0123~0.1230g線性關(guān)系良好。2.2.2精密度試驗(yàn)取麥角甾醇、麥角甾酮對照品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，每次進(jìn)樣10L，分別得到麥角甾醇和麥角甾酮的RSD分別為0.83%和0.55%，RSD均小于2.0%，表明該測量方法精密度良好。2.2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取ME-1菌絲體和固體發(fā)酵產(chǎn)物供試品溶液，分別在配制后0、4、8、12、16、20、24h進(jìn)樣分析，記錄峰面積，并計(jì)算出供試峰面積的RSD
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