黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)為唇形科黃芩屬植物,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,是常用大宗中藥材。黃芩根部作為中藥,而黃芩地上部位作為“黃芩茶”代茶飲用,已有近千年的歷史。目前,在一些地區(qū)已有黃芩茶商品銷售。另外,黃芩地上部位的總黃酮也已開發(fā)為黃芩莖葉解毒膠囊上市。但相對黃芩豐富的資源量來說,黃芩地上部位的有效利用量僅占很小的比例。隨著綜合利用成為中藥資源綠色發(fā)展的趨勢,黃芩地上部位較好的利用價值和發(fā)展?jié)摿υ絹碓揭鹑藗兊年P注。然而,當前對黃芩地上部位的質(zhì)量評價研究仍缺乏系統(tǒng)研究,限制了黃芩綜合利用產(chǎn)業(yè)的提升。因此,本研究從黃芩地上部位的化學成分、多指標含量測定、活性評價方面展開了系統(tǒng)的質(zhì)量評價研究。同時,從資源擴大利用的角度,采用藥用植物親緣學的思路開展了黃芩屬藥用親緣學的初步探索。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1、采用多種色譜分離技術,從黃芩地上部位中分離鑒定得到11個化合物,包括:異紅花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)、紅花素7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(2)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(3)、漢黃芩素(4)、大波斯菊苷(5)、白楊素(6)、異紅花素(7)、丁香醛(8)、反式羥苯基丙烯酸(9)、異高山黃芩素-8-O-β-D葡萄糖醛酸苷(10)、對羥基苯甲醛(11)。其中化合物3、8、11為首次在黃芩莖葉中發(fā)現(xiàn),化合物1和2為自然界相對較為稀有的二氫黃酮苷,且在黃芩地上部位含量較高,可成為黃芩地上部位質(zhì)量評價的指標性化合物。2、采用HPLC-DAD技術對黃芩不同部位中共77份樣品(包括34份根、15份莖、15份葉及13份花)的化學成分進行了系統(tǒng)分析,較全面地比較黃芩根、莖、葉和花等不同組織器官中化學成分的差異及分布情況,并建立了黃芩不同部位的指紋圖譜。對15種主要黃酮化合物成分的含量測定表明,黃芩不同部位中主要黃酮類成分差異顯著。進一步采用UPLC-QTOF-MS技術結(jié)合多元統(tǒng)計分析確定了黃芩地上和地下部位的差異性化合物共31個,根據(jù)精確分子量、紫外光譜、保留時間并結(jié)合文獻報道鑒定出其中的17個成分。3、采用熒光素酶報告基因法對枯芩、子芩、總莖葉的水提物和醇提物以及化合物黃岑苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、異紅花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、異高山黃芩素-8-O-β-D葡萄糖醛酸苷進行了抗病毒活性篩選,并結(jié)合HPLC含量測定方法測定了黃芩不同部位提取物中15種主要黃酮類化合物的含量,進行了量效關系評價。結(jié)果表明與傳統(tǒng)藥用根部相比,黃芩地上部位及其所含的主要成分也具有一定的抗病毒活性,同時結(jié)果也顯示枯芩的抗流感活性要強于子芩,為臨床傳統(tǒng)上枯芩多用于肺部上呼吸道感染(清肺熱)提供了科學證據(jù)。且發(fā)現(xiàn)黃芩地上部位高含量的異紅花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和野黃芩苷與黃芩地上部位不同提取物的抗流感病毒活性間顯示出一定的量效關系。進一步利用二代高通量測序篩選(HTS2)技術研究黃芩地上部位的水提取物和醇提取物及其主要成分異紅花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和野黃芩苷對HepG2細胞的作用,通過生物信息學軟件分析在轉(zhuǎn)錄水平上找到各個化合物及提取物作用HepG2細胞后的差異表達基因。首次揭示了黃芩地上部位提取物及主要成分在HepG2細胞模型中顯著影響的顯著差異基因,以及對不同通路或疾病表型的可能參與機制,為進一步研究黃芩地上部位的藥理活性機制提供了起點和新的思路。4、采用UPLC-QTOF-MS技術,首次對采集得到的黃芩屬14種植物次生代謝產(chǎn)物進行了分析和比較。發(fā)現(xiàn)根系較發(fā)達的狹葉黃芩亞組植物的根部化學成分較為相近,而其它同組不同系甚至不同部位差異性較大,可用化學手段分開。并對化學研究背景幾乎為空白的4個種及2個變種(縉云黃芩、紅莖黃芩柳葉變種、京黃芩、京黃芩黑龍江變種、大齒黃芩、纖弱黃芩)黃芩屬植物進行了化學成分的在線鑒定。除縉云黃芩和紅莖黃芩柳葉變種發(fā)現(xiàn)了少量二萜類化合物外,其他種鑒定出的主要是黃酮類化合物成分及少量的串聯(lián)糖苷類化合物。同時,采用HPLC-DAD方法檢測了 15種黃酮類化合物在黃芩屬14種植物的分布情況,結(jié)果顯示這些種普遍含有異紅花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、紅花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、野黃芩苷、黃芩苷、大波斯菊苷、異高山黃芩素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、白楊素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和漢黃芩苷等八種化合物。從化學成分的角度來看,除粘毛黃芩、麗江黃芩外,大齒黃芩和甘肅黃芩的地上部位與黃芩有較高的相似性,顯示其資源利用等同性的潛力�；谏鲜龌瘜W成分的比較,結(jié)合形態(tài)學分類和傳統(tǒng)應用,本文對黃芩屬的藥用親緣學進行了簡要的分析和探討。綜上所述,本研究在對黃芩地上部位化學成分研究基礎上,首次采用多指標的方法了建立同時檢測黃芩主要有效成分含量測定的HPLC方法,為黃芩地上部位及其相關產(chǎn)品的質(zhì)量評價奠定了基礎。該研究為傳統(tǒng)上根部作為中藥黃芩應用而地上部位作為茶飲提供了物質(zhì)基礎層次的合理解釋;對黃芩地上部位的抗病毒活性研究以及高通量篩選研究為黃芩地上部的應用和黃芩植物資源的綜合利用開發(fā)提供初步的科學依據(jù);對黃芩屬14種植物的化學成分的分析和比較研究,不僅填補了其中4個種及2個變種植物的化學背景空白,同時對黃芩屬藥用親緣學的深入研究提供了較好的基礎。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R282.71
【部分圖文】：

北京協(xié)和醫(yī)學院＆中國醫(yī)學科學院?碩士研究生論文??氯仿部位具體分離流程如圖４所示。氯仿部位（４２．３５ｇ）經(jīng)硅膠柱色譜??（２００？３００目），石油醚■■乙酸乙酯梯度洗脫（１００：０？０：１００），餾分經(jīng)ＴＬＣ檢測后合??并得到Ｆｄ？Ｆｒ８等８個組分。Ｆｒ５組分繼續(xù)經(jīng)硅膠柱色譜（３００？４００目），石油??醚－乙酸乙酯梯度洗脫（８：２？１：１），所得亞組份經(jīng)Ｓｅｐｈａｄｅｘ?ＬＨ－２０凝膠柱色譜純??化，洗脫劑為氯仿－甲醇（３：７），得到化合物４?（５ｍｇ）和６?（１３．６?ｍｇ）。Ｆｒ６組分操??作同Ｆｒ５組分得化合物７?（４．３ｍｇ）、８?（９．６ｍｇ）。??１３Ｋ

?碩士研究生論文??氯仿部位具體分離流程如圖４所示。氯仿部位（４２．３５ｇ）經(jīng)硅膠柱色譜??（２００？３００目），石油醚■■乙酸乙酯梯度洗脫（１００：０？０：１００），餾分經(jīng)ＴＬＣ檢測后合??并得到Ｆｄ？Ｆｒ８等８個組分。Ｆｒ５組分繼續(xù)經(jīng)硅膠柱色譜（３００？４００目），石油??醚－乙酸乙酯梯度洗脫（８：２？１：１），所得亞組份經(jīng)Ｓｅｐｈａｄｅｘ?ＬＨ－２０凝膠柱色譜純??化，洗脫劑為氯仿－甲醇（３：７），得到化合物４?（５ｍｇ）和６?（１３．６?ｍｇ）。Ｆｒ６組分操??作同Ｆｒ５組分得化合物７?（４．３ｍｇ）、８?（９．６ｍｇ）。??干繰黃芩地上部分（１３Ｋｇ）??Ｉ?＿ｒ〇＜５。乙薛ｉ〇倍量提�。炒危看危欤铦饪s??浸膏??萃取（吞油薛、氣訪、乙酸乙黯、ＪＥ丁酵）??ｉ?Ｉ?Ｉ?１??石油ｇ節(jié)位?氯貧部位?乙酸乙圉部位?正丁醇部位?水部位??（７７．６？）?（Ｓ９．７ｇ）?（１８９ｇ）?（７３１．５＂ｇ）?（３２３６．５８）??大？Ｌ殘尚鉺街??Ｄ１０１??ｎ￣￣￣￣￣ｎ??ＺＤＣ－ｌ?ＺＤＣ－２?ＺＤＣ－３?ＺＤＣ－４?ＺＤＣ－？?ＺＤＣ－６??（本）（３０％乙＿＞?ｉ５＜＾〇乙銲）門〇％乙番）（７〇＾乙每’）（無水乙孬）??干法上柱．Ｍａ??ｉ￣￣１?ｉ?Ｊ?ｌ??ＨＱ－１?ＨＱ－；?ＨＱ－５?ＨＱ＾４?ＨＱ－５??ｔ水）?（１０％甲酵）?ＧＯ％甲酵甲Ｐ＇，?ｒ〇？ｃ甲酵？，??Ｉ?Ｉ?■??ｉ??ＬＨ－２０?＂???ｔ????Ｉ＂＂＂Ｉ￣￣Ｉ１?＾Ｉ?Ｉ?Ｉ?１??ｒ．

２．１供試品溶液的制備??取黃芩各部位千燥樣品，粉碎、過４０目篩，精密稱取粉末約０．５ｇ于５０ｍｌ的容??量瓶中，精密加入相應體積的７０％乙醇至近刻度，超聲提�。常胺昼�，放置室溫，??用７０％乙醇定容至刻度，０．４５?｜ａｍ濾膜過濾，作為供試品溶液。??２．３對照品溶液的制備??分別精密稱�。保捣N對照品適量，置１０?ｍＬ容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻??度，混勾，得到各標準品的儲備液。將各標準品的儲備液各取適量后，置于１０ｍｌ??容量瓶中，混勻，并用甲醇定容置刻度，混勻后得混合標準品的儲備液。在混合標??準品的儲備液，各對照品濃度分別為２．０８０?ｍｇ／ｍＬ（ｌ）、１．４３５?（２）?ｍｇ／ｍＬ、０．１９６（３）??ｍｇ／ｍＬ、０．０４６?（４）?ｍｇ／ｍＬ、０．１３６?（５）?ｍｇ／ｍＬ、１．０８０?（６）?ｍｇ／ｍＬ、０．２３２?（７）?ｍｇ／ｍＬ、??０．１２８（８）ｍｇ／ｍＬ、０．０６７（９）?ｍｇ／ｍＬ、０．０４１（１０）?ｍｇ／ｍＬ、０．０５０?（１１）?ｍｇ／ｍＬ、０．０３８??（１２）?ｍｇ／ｍＬ、０．０６６?（１３）?ｍｇ／ｍＬ、０．０１３?（１４）?ｍｇ／ｍＬ?和?０．０１６?ｍｇ／ｍＬ?（１５）?ｍｇ／ｍＬ，戶斤??有的標準品溶液均儲存在４°Ｃ。??
【參考文獻】

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本文編號：2838571