背景急性缺血性卒中因其高的發(fā)病率和致殘率,給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān),已成為我國(guó)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。有效的治療對(duì)于減輕或改善卒中所致的神經(jīng)功能缺損癥狀,減輕卒中所致的疾病負(fù)擔(dān)至關(guān)重要。中醫(yī)治療卒中有著悠久的歷史,在長(zhǎng)期的醫(yī)學(xué)實(shí)踐中,歷代醫(yī)家總結(jié)了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn),尤其是王永炎院士提出的“毒損腦絡(luò)”學(xué)說(shuō),將中醫(yī)對(duì)中風(fēng)的認(rèn)識(shí)推向了一個(gè)新高度,也推進(jìn)了中醫(yī)治療中風(fēng)的進(jìn)程。根據(jù)“毒損腦絡(luò)”學(xué)說(shuō),提出了清熱解毒通絡(luò)法。苦碟子注射液在缺血性卒中治療方面療效確切,可以減輕炎癥反應(yīng)并改善神經(jīng)功能和臨床結(jié)局,但其作用機(jī)制尚未明確。近年的研究顯示,Notch信號(hào)通路可能參與了腦梗死炎癥反應(yīng)過(guò)程。因此本研究擬探討苦碟子注射液干預(yù)急性腦梗死損傷的機(jī)制及與Notch信號(hào)通路的相關(guān)性。目的觀察苦碟子注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷火毒證大鼠缺血半暗帶炎癥反應(yīng)、Notch信號(hào)通路、神經(jīng)元病理結(jié)構(gòu)的改變及神經(jīng)元凋亡情況的影響,探討苦碟子治療急性腦梗死火毒證的療效機(jī)制。方法將128只SPF級(jí)SD雄性大鼠,按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組、模型組、Notch-1抑制組(DAPT組)及苦碟子組,每組32只。除假手術(shù)組外,其余各組采用Longa聯(lián)合角叉菜膠腹腔注射制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注火毒證模型。再灌注后立即腹腔注射,其中假手術(shù)組及模型組給予等體積的生理鹽水(3.6ml/kg·d),各給藥組分別給予對(duì)應(yīng)藥物腹腔注射,其中苦碟子組給予苦碟子注射液3.6ml/kg·d,DAPT組給予DAPT 500ug/kg·d,每天1次,連續(xù)給藥3d。于造模后第3h、24h、48h、72h取材,采集缺血半暗帶腦組織,采用Western blot及RT-PCR法檢測(cè)苦碟子注射液治療后Notch-1、Jagged-1、Hes-1、IKK、NF-κ B、Caspase-3在缺血半暗帶腦組織中的表達(dá);用透射電鏡觀察苦碟子注射液干預(yù)后缺血半暗帶神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變;HE染色觀察神經(jīng)元一般形態(tài)結(jié)構(gòu)改變情況;TUNEL染色觀察缺血半暗帶神經(jīng)元凋亡情況。結(jié)果1.大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分:組間比較:假手術(shù)組神經(jīng)功能評(píng)分為0分。再灌注3h、24h、48h DAPT組和苦碟子組神經(jīng)功能評(píng)分與模型組相比無(wú)顯著下降(p0.05),再灌注72h時(shí)DAPT組和苦碟子組評(píng)分較模型組下降顯著(p0.05);DAPT組與苦碟子組神經(jīng)功能評(píng)分組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。組內(nèi)比較:模型組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);DAPT組、模型組神經(jīng)功能于24h后呈逐漸下降趨勢(shì),其中72h神經(jīng)功能評(píng)分較3h顯著下降(p0.05)。2.與假手術(shù)組相比,模型組3h即可見(jiàn)Notch-1、Jagged-1、Hes-1、IKK、NF-κ B、caspase-3mRNA和蛋白表達(dá)增加(p0.05);且相同時(shí)間模型組上述基因和蛋白表達(dá)均高于假手術(shù)組(p0.05)。模型組Notch-1、IKK、caspase-3蛋白的表達(dá)于3h～24h達(dá)高峰,隨后呈下降趨勢(shì);NF-κ B蛋白的表達(dá)與24h～48h達(dá)高峰;Jagged-1、Hes-1蛋白于3h～48h持續(xù)高表達(dá)。3.與模型組相比,DAPT治療減少缺血半暗帶Notch-1、Jagged-1、Hes-1、IKK、NF-κB、caspase-3 mRNA和蛋白的水平,部分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;組內(nèi)比較,DAPT組Notch信號(hào)通路蛋白表達(dá)趨勢(shì)與模型組大致相似。4.與模型組相比,苦碟子注射液可減少缺血半暗帶Notch-1、Jagged-1、Hes-1、IKK、NF-κ B、caspase-3 mRNA和蛋白的表達(dá),部分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異�？嗟咏M缺血半暗帶Notch-1、Jagged-1、Hes-1、IKK、NF-κ B、Caspase-3mRNA和蛋白的表達(dá)水平低于DAPT組,部分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。組內(nèi)比較,苦碟子組Notch-1、IKK蛋白的表達(dá)于3h～24h達(dá)高峰,隨后呈下降趨勢(shì)(p0.05);Jagged-1、caspase-3表達(dá)于24h達(dá)高峰;Hes-1、NF-κ B蛋白的表達(dá)于24h～48h達(dá)高峰。5.透射電鏡觀察:與假手術(shù)組相比,模型組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度損傷,可見(jiàn)核固縮、異染色質(zhì)增多,線(xiàn)粒體破壞明顯,電子致密;隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng),模型組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)改變明顯。同一再灌注時(shí)間相比,DAPT組、苦碟子組神經(jīng)元細(xì)胞器結(jié)構(gòu)較模型組改善�？嗟咏M改善情況略微好于DAPT組。6.HE染色:模型組大鼠觀察到梗死側(cè)腦組織破壞,結(jié)構(gòu)疏松,神經(jīng)元數(shù)量減少,多呈三角形,可見(jiàn)胞漿濃縮、胞核固縮。與模型組相比,苦碟子組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)明顯改善;DAPT組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)較模型組改善。7.TUNEL染色結(jié)果:模型組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于假手術(shù)組。再灌注48h時(shí),DAPT組、苦碟子組凋亡神經(jīng)元數(shù)量顯著少于模型組(p0.05),DAPT組與苦碟子組之間差異不顯著(p0.05)。結(jié)論1.急性腦梗死后Notch信號(hào)通路被激活,缺血腦組織中Notch-1、Jagged-1、Hes-1、IKK、NF-κ B和caspase-3的表達(dá)明顯增多。2.苦碟子注射液可通過(guò)抑制炎癥反應(yīng),減少神經(jīng)元凋亡減輕腦缺血再灌注損傷,改善火毒證大鼠神經(jīng)功能�？嗟拥闹委熜Ч麅�(yōu)于DAPT。3.苦碟子注射液減輕腦缺血再灌注損傷可能與調(diào)控Notch信號(hào)通路有關(guān)。4.苦碟子在給藥后3h時(shí)即可抑制Notch信號(hào)通路活性,且相同時(shí)間點(diǎn)Notch信號(hào)通路活性低于模型組。因此,臨床上宜盡早予以苦碟子注射液治療急性腦梗死,以改善神經(jīng)功能。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

取正常大鼠腦組織觀察神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)。正常組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核大而圓，??染色均勻，表面光滑；胞質(zhì)中含大量游離核糖體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)正常；血管??壁結(jié)構(gòu)完整，血管內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜連接緊密。見(jiàn)圖３－１。??ＢＲ??Ａ：正常組１２０００Ｘ：?Ｂ：正常組７００００Ｘ??圖３－１正常組神經(jīng)元電鏡結(jié)果??３．?２假手術(shù)組??假手術(shù)各時(shí)間組神經(jīng)元細(xì)胞器形態(tài)未見(jiàn)明顯改變，偶見(jiàn)自噬體。見(jiàn)圖３－２。??＿畫(huà)??Ａ：假手術(shù)組７００００Ｘ；?Ｂ：假手術(shù)組７００００Ｘ??圖３－２假手術(shù)組神經(jīng)元電鏡結(jié)采??３．３模型組??模型組Ｉｄ組較３ｈ組細(xì)胞器結(jié)構(gòu)改變明顯，細(xì)胞質(zhì)明顯水腫，線(xiàn)粒體嵴模糊，部分??嵴和膜融合，可見(jiàn)膜結(jié)構(gòu)不同程度破壞，電子致密，吋見(jiàn)核固縮，０噬體多見(jiàn)。模型組??隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)改變明顯，可見(jiàn)核固縮、胞漿濃縮，胞核異染色質(zhì)增??多，固縮神經(jīng)元較多；線(xiàn)粒體腫脹，線(xiàn)粒體嵴枚糊，部分嵴和膜融含，線(xiàn)粒體電子致密??度增高，可見(jiàn)線(xiàn)粒體－自噬體形成，粗面內(nèi)質(zhì)Ｍ腫脹、脫顆粒：血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫，內(nèi)??皮細(xì)胞間緊密連接斷裂。阽圖３－３。??５１??

取正常大鼠腦組織觀察神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)。正常組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核大而圓，??染色均勻，表面光滑；胞質(zhì)中含大量游離核糖體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)正常；血管??壁結(jié)構(gòu)完整，血管內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜連接緊密。見(jiàn)圖３－１。??ＢＲ??Ａ：正常組１２０００Ｘ：?Ｂ：正常組７００００Ｘ??圖３－１正常組神經(jīng)元電鏡結(jié)果??３．?２假手術(shù)組??假手術(shù)各時(shí)間組神經(jīng)元細(xì)胞器形態(tài)未見(jiàn)明顯改變，偶見(jiàn)自噬體。見(jiàn)圖３－２。??＿畫(huà)??Ａ：假手術(shù)組７００００Ｘ；?Ｂ：假手術(shù)組７００００Ｘ??圖３－２假手術(shù)組神經(jīng)元電鏡結(jié)采??３．３模型組??模型組Ｉｄ組較３ｈ組細(xì)胞器結(jié)構(gòu)改變明顯，細(xì)胞質(zhì)明顯水腫，線(xiàn)粒體嵴模糊，部分??嵴和膜融合，可見(jiàn)膜結(jié)構(gòu)不同程度破壞，電子致密，吋見(jiàn)核固縮，０噬體多見(jiàn)。模型組??隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)改變明顯，可見(jiàn)核固縮、胞漿濃縮，胞核異染色質(zhì)增??多，固縮神經(jīng)元較多；線(xiàn)粒體腫脹，線(xiàn)粒體嵴枚糊，部分嵴和膜融含，線(xiàn)粒體電子致密??度增高，可見(jiàn)線(xiàn)粒體－自噬體形成，粗面內(nèi)質(zhì)Ｍ腫脹、脫顆粒：血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫，內(nèi)??皮細(xì)胞間緊密連接斷裂。阽圖３－３。??５１??

Ａ：模型組?３ｈ?１２００００Ｘ；?Ｂ：模型組?２４ｈ?１５００００Ｘ；?Ｃ：模型組?４８ｈ?７００００Ｘ；??Ｄ：模?７２ｈ?１００００Ｘ??圖３－３模型組神經(jīng)元電鏡結(jié)果??３．４?ＤＡＰＴ?組??ＤＡＰＴ組各時(shí)間組與模型組相比，神經(jīng)元形態(tài)稍好，細(xì)胞核染色比較均勻，異染色質(zhì)??較少，部分線(xiàn)粒體腫脹、嵴模糊，部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹、脫顆粒，線(xiàn)粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)??結(jié)構(gòu)改變較模型組輕。見(jiàn)圖３－４。??瞧??＿＿??Ａ：?ＤＡＰＴ?組?３ｈ?１２００００Ｘ；?Ｂ：?ＤＡＰＴ?組?２４ｈ?５００００Ｘ；?Ｃ：?ＤＡＰＴ?組?４８ｈ?７００００Ｘ??Ｄ：?ＤＡＰＴ?組?７２ｈ?１２００００Ｘ??圖３－４?ＤＡＰＴ組神經(jīng)元電鏡結(jié)果??５２??
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本文編號(hào)：2837613