目的:研究來源于中藥甘草中的活性成分甘草苷對(duì)中波紫外線(UVB)誘導(dǎo)人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)光老化的保護(hù)作用及其作用機(jī)制,為有效成分甘草苷預(yù)防和治療皮膚光老化提供理論依據(jù)。方法:1.用不同濃度的甘草苷作用于HaCaT細(xì)胞,噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖率,篩選出藥物的最佳有效安全濃度。2.用30mJ/cm2的UVB照射HaCaT細(xì)胞,制備光老化模型,將篩選出的有效安全濃度作用于光老化HaCaT細(xì)胞,MTT法測(cè)定甘草苷對(duì)光老化HaCaT細(xì)胞增殖率的影響。3.用試劑盒分別測(cè)定甘草苷對(duì)光老化HaCaT細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、過氧化氫酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量的影響。4.蛋白免疫印記(Western Blot)法檢測(cè)甘草苷對(duì)光老化HaCaT細(xì)胞中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)蛋白表達(dá)量的影響。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)甘草苷對(duì)光老化HaCaT細(xì)胞總凋亡率的影響。6.實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)法檢測(cè)甘草苷對(duì)光老化HaCaT中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-9 mRNA表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1.與空白對(duì)照組比較,10-10、10-9、10-8mol/L甘草苷組細(xì)胞增殖率顯著升高(P0.05,P0.01),可明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖;10-4、10-3mol/L甘草苷組細(xì)胞增殖率顯著降低(P0.01),可明顯抑制細(xì)胞增殖;10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷組細(xì)胞增殖率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),對(duì)細(xì)胞無明顯的促增殖與抑制作用,為最佳有效安全濃度。2.與空白對(duì)照組比較,UVB組細(xì)胞增殖率顯著降低(P0.01);與UVB組比較,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB組細(xì)胞增殖率顯著升高(P0.01)。3.與空白對(duì)照組比較,UVB組SOD、GSH、CAT活性顯著降低(P0.01),MDA、ROS 含量顯著升高(P0.01);與 UVB 組比較,10-7、l0-6、10-5mo1/L甘草苷+UVB 組 SOD、GSH、CAT 活性明顯上升(P0.05,P0.01),MDA、ROS含量顯著降低(P0.01)。4.與空白對(duì)照組比較,UVB組IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01);與 UVB 組比較,10-7、10-6、10-5mol/L 甘草苷+UVB 組 IL-lβ、IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05,P0.01)。5.與空白對(duì)照組比較,UVB組細(xì)胞總凋亡率顯著升高(P0.01);與UVB組比較,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB組細(xì)胞總凋亡率顯著降低(P0.01)。6.與空白對(duì)照組比較,UVB組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P0.01),,Bax、Caspase-3 及 Caspase-9 mRNA 表達(dá)水平顯著升高(P0.01);與 UVB 組比較,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平顯著升高(P0.05,P0.01),Bax、Caspase-3 及 Caspase-9 mRNA 表達(dá)水平顯著降低(P0.05,P0.01)。7.與空白對(duì)照組比較,UVB組Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01);與UVB組比較,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB組Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.05,P0.01),Bax、Caspase-3 及 Caspase-9 蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05,P0.01)。結(jié)論:甘草苷可促進(jìn)光老化HaCaT細(xì)胞的增殖,提高細(xì)胞中SOD、GSH、CAT活性,降低MDA、ROS含量,抑制炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá),降低細(xì)胞總凋亡率,促進(jìn)抗凋亡細(xì)胞因子Bcl-2mRNA及蛋白的表達(dá),抑制促凋亡相關(guān)細(xì)胞因子Bax、Caspase-3、Caspase-9mRNA及蛋白的表達(dá),從而有效的抑制皮膚光老化。
【學(xué)位單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

甘草苷組；丨．１０＿３ｍｏｌ／Ｌ甘草苷組。??３．２甘草苷對(duì)光老化ＨａＣａＴ細(xì)胞增殖率的影響??如表２－２和圖２－２所示，與空白對(duì)照組比較，ＵＶＢ組細(xì)胞增殖率顯著降低??＜０．０１），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與ＵＶＢ組比較，１０－７、１０－６、ｌ〇－５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋Ｕ??ＶＢ組細(xì)胞增殖率顯著升高（Ｐ＜０．０１），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。??表２－２甘草苷對(duì)光老化ＨａＣａＴ細(xì)胞增殖率的影響（：〒±．ｖ，ｎ＝６）??俎別?濃度（ｍｏｌ／Ｌ）?吸光值（０Ｄ）?細(xì)胞增殖率（％）??空白對(duì)照組?－?０．５４３?土?０．０１２?１００??ＵＶＢ?組?－?０．４５９±０．０２４“?８５＊＊??１〇－７?０．５２０±０．０１８ｒｆ＃?９６＃＃??甘草苷＋ＵＶＢ?組?丨０－６?０＿５３２±０．０１５＃＃?９８＃＃??１〇－５?０．５３７?±?０．０１２＃＃?９９ｍ??注：與空白對(duì)照組比較，，＊＊戶＜０．０丨：與ＵＶＢ組比較，??２５??

０．８－１??ＡＢＣＤＥＦＧＨ?Ｉ??圖２－１甘草苷有效安全濃度的篩選??注：與空白對(duì)照組比較，＊／？＜０．０５，?“ＰｃＯ．Ｏｌ。Ａ，空白對(duì)照組；Ｂ．丨〇－ｌ°ｍｏｌ／Ｌ甘草苷組；Ｃ．１０－９ｍｏｌ／Ｌ甘草苷??組；Ｄ．ＩＯ＿８ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷組；Ｅ．ｌ〇－７ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷組：Ｆ．ｌ〇－６ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷組；Ｇ．１０－５ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷組．，；Ｈ．ｌＣｒ＊ｍｏｌ／Ｌ??甘草苷組；丨．１０＿３ｍｏｌ／Ｌ甘草苷組。??３．２甘草苷對(duì)光老化ＨａＣａＴ細(xì)胞增殖率的影響??如表２－２和圖２－２所示，與空白對(duì)照組比較，ＵＶＢ組細(xì)胞增殖率顯著降低??＜０．０１），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與ＵＶＢ組比較，１０－７、１０－６、ｌ〇－５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋Ｕ??ＶＢ組細(xì)胞增殖率顯著升高（Ｐ＜０．０１），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。??表２－２甘草苷對(duì)光老化ＨａＣａＴ細(xì)胞增殖率的影響（：〒±．ｖ，ｎ＝６）??俎別?濃度（ｍｏｌ／Ｌ）?吸光值（０Ｄ）?細(xì)胞增殖率（％）??空白對(duì)照組?－?０．５４３?土?０．０１２?１００??ＵＶＢ?組?－?０．４５９±０．０２４“?８５＊＊??１〇－７?０．５２０±０．０１８ｒｆ＃?９６＃＃??甘草苷＋ＵＶＢ?組?丨０－６?０＿５３２±０．０１５＃＃?９８＃＃??１〇－５?０．５３７?±?０．０１２＃＃?９９ｍ??注：與空白對(duì)照組比較，，＊＊戶＜０．０

??如表３－４和圖３－２、３－３所示。與空白對(duì)照組比較，ＵＶＢ組ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６和??ＴＮＦ－ｃｔ蛋白表達(dá)量顯著升高（尸＜０．０１），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與ＵＶＢ組比較，１０－７、??１０＿６、１０＿５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋ＵＶＢ組ＩＬ－１（３、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白表達(dá)量顯著降低??（戶＜０．０５，Ｐ＜０．０１），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且１０＿７、１０＿６、１０＿５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋ＵＶＢ??組ＩＬ－１（３、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白的表達(dá)呈濃度依賴性，隨著甘草苷藥物濃度的升高，??ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白的表達(dá)降低越顯著。由此可知，１〇－７、１０＿６、］０＿５ｍｏｌ／Ｌ??甘草苷能夠抑制光老化細(xì)胞中ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白的表達(dá)。??表３－４甘草苷對(duì)光老化ＨａＣａＴ細(xì)胞中ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ蛋白表達(dá)量的影響（〒：ｔｏ，?ｎ＝３）??組別?濃度（ｍｏｌ／Ｌ）?ＩＬ－Ｉ?ｐ／ｐ－ａｃｔｉｎ?ＩＬ－６／ｐ－ａｃｔｉｎ?ＴＮＦ－ａ／ｐ－ａｃｔｉｎ??空白對(duì)照組?－?０．１０８±０．０１６?０．１８３±０．０１２?０．１４７±０．０１２??ＵＶＢ?組?－?０．２４７±０＿０３廣?０．６２６±０．０２７“?０．２６６土０．０２４＂??１〇－７?０．１８４±０．０３０＃?０．３８５±０．０５１＃＃?０．２１２±０．０１６＃＃??甘草苷＋ＵＶＢ?組?１〇－６?０．１３丨?±０．０３９＃＃?０．３３７±０．０２７＃＃?０．１６５±０．０２３＃＃??１〇－５?０．１２１?±０．０３６＃＃?０．２３８±０．０３４＃＃?０．１５９±０．０２３＃＃??注：與空白對(duì)照組比較
【參考文獻(xiàn)】

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