目的:探討β-細(xì)辛醚對谷氨酸引起PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用以及NMDA受體亞型和突觸素表達(dá)的影響。方法:PC12細(xì)胞分為正常組,模型組和治療組組,正常組用無血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),模型組用含50mM谷氨酸的無血清DMEM培養(yǎng),治療組用10 μM的β-細(xì)辛醚與含50mM谷氨酸的無血清DMEM培養(yǎng)共同培養(yǎng),2 h后觀察電子顯微鏡下細(xì)胞形態(tài),用cck-8檢測其活力;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2+、線粒體膜電位(MMP)、細(xì)胞凋亡等的變化。免疫熒光技術(shù)檢測突觸素(SYP)在各組細(xì)胞中的表達(dá),并用PCR擴增技術(shù)對其細(xì)胞內(nèi) NMDA 受體亞型的基因(NR1,NR2A,NR2B,NR2C,NR2D,NR3A,NR3B)mRNA 的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果:經(jīng)谷氨酸損傷的PC12細(xì)胞與正常培養(yǎng)的細(xì)胞相比,活力明顯低于正長培養(yǎng)組細(xì)胞(P0.01)。與治療組比,治療組明顯活力高于模型組(P0.01),與正常組比,正常組活力高于治療組。通過流式分析,模型組的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與正常組細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度相比,明顯高于正常組(P0.01);與治療組相比,細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度略高于治療組(P0.05);與正常組比,治療組Ca2+濃度無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。模型組線粒體膜電位與正常組相比,明顯低于正常組(P0.01);與治療組比,略低與治療組(P0.05);與正常組比,正常組線粒體膜電位高于治療組(P0.01)。模型組的細(xì)胞凋亡率與正常組比,明顯高于正常組(P0.01);與治療組相比,略高于治療組(P0.05);與正常組比,正常組凋亡率低于治療組(P0.01)。通過免疫熒光技術(shù),與正常組比,模型組細(xì)胞中SYP熒光強度明顯弱于正常組(P0.01),與治療組比,治療組SYP熒光強度強于模型組(P0.05),正常組SYP陽性細(xì)胞數(shù)相比與模型組增多(P0.01),SYP陽性細(xì)胞數(shù)與模型組比較多(P0.05);與正常組比,治療組SYP陽性細(xì)胞數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。與正常組比,模型組細(xì)胞中NMDA受體亞型NR1 mRNA的表達(dá)顯著低于正常組(P0.01),而模型組NR2A的表達(dá)也顯著低于正常組(P0.01);與模型組比,治療組細(xì)胞中NR1mRNA表達(dá)量顯著高于模型組(P0.01),治療組中NR2A的表達(dá)也高與模型組(P0.05)。與正常組比,模型組細(xì)胞中NR2BmRNA的表達(dá)低于正常組(P0.05),模型組中NR2CmRNA的表達(dá)顯著低于正常組(P0.01);與模型組比,治療組細(xì)胞中NR2BmRNA表達(dá)量高于模型組(P0.05),治療組中NR2C的表達(dá)高與模型組(P0.05)與正常組比,模型組細(xì)胞中NR2DmRNA的表達(dá)沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而模型組NR3A mmRNA的表達(dá)顯著低于正常組(P0.01);與模型組比,治療組細(xì)胞中NR2DmRNA表達(dá)沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),治療組中NR3A的表達(dá)高與模型組(P0.05)。與正常組比,治療組中NR1、NR2B、NR2C、NR2D、NR3AmRNA的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而NR2AmRNA的表達(dá)則低于正常組(P0.05)。但是我們沒有檢測到NR3B亞型基因在各組細(xì)胞中的的表達(dá)。結(jié)論:β-細(xì)辛醚能夠?qū)劝彼釗p傷的PC12細(xì)胞有一定的保護(hù)作用,能夠增強突觸素(SYP)在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),其機制可能是通過調(diào)節(jié)NMDA受體亞型基因的表達(dá)來起保護(hù)作用,但是其如何調(diào)節(jié)NMDA受體亞型基因,有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    1.1 谷氨酸及其與NMDA受體的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 谷氨酸及其理化性質(zhì)
        1.1.2 谷氨酸在醫(yī)藥領(lǐng)域的用途及研究
        1.1.3 谷氨酸在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的研究
        1.1.4 NMDA受體及其生理結(jié)構(gòu)
        1.1.5 NMDA受體生理功能的研究
        1.1.6 NMDA受體與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究現(xiàn)狀
    1.2 突觸素（SYP）的研究近況
        1.2.1 突觸素及其形態(tài)結(jié)構(gòu)及其種類
        1.2.2 突觸素生理功能的研究
        1.2.3 突觸素與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究
    1.3 PC12細(xì)胞及其谷氨酸損傷模型研究
        1.3.1 PC12細(xì)胞來源及其特性
        1.3.2 PC12細(xì)胞的分化及其研究
    1.4 中藥石菖蒲有效成分及其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響
        1.4.1 中藥石菖蒲及其有效成分
        1.4.2 石菖蒲對中樞神經(jīng)對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用
        1.4.3 石菖蒲有效成分β -細(xì)辛醚及其藥理作用
    1.5 谷氨酸損傷PC12細(xì)胞模型以及B-細(xì)辛醚的對其保護(hù)作用的研究
        1.5.1 谷氨酸損傷PC12細(xì)胞模型的研究
        1.5.2 β-細(xì)辛醚對谷氨酸損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用
第二章 實驗研究
    2.1 谷氨酸損傷PC12細(xì)胞模型建立及B-細(xì)辛醚保護(hù)作用濃度篩選
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
        2.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2.1.4 結(jié)果
2+濃度、線粒體膜電位、細(xì)胞凋亡'>    2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)CA²⁺濃度、線粒體膜電位、細(xì)胞凋亡
        2.2.1 實驗材料及儀器
        2.2.2 實驗方法
        2.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2.2.4 結(jié)果
        2.2.5 討論
    2.3 免疫組化檢測突觸素（SYP）蛋白表達(dá)
        2.3.1 實驗材料及儀器
        2.3.2 實驗方法
        2.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2.3.4 結(jié)果
        2.3.5 討論
    2.4 PCR擴增檢測NMDAR亞型基因在各組中的表達(dá)
        2.4.1 實驗材料及試劑
        2.4.2 實驗步驟
        2.4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2.4.4 結(jié)果
        2.4.5 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
統(tǒng)計學(xué)審核證明
在校期間發(fā)表論文情況
致謝

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