目的:本研究通過(guò)建立Hep G2人肝癌細(xì)胞株和C2C12小鼠成肌細(xì)胞株IR模型,觀察PIP對(duì)AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)信號(hào)通路激活后肝細(xì)胞中糖異生關(guān)鍵因子TORC2(環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)輔激活物2)、肌細(xì)胞中GLUT4(葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4)以及兩種細(xì)胞中PGC-1α(過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體γ協(xié)同刺激因子1α)的干預(yù)作用。探索PIP改善糖代謝紊亂作用及可能的分子藥理學(xué)機(jī)制。方法:1.觀察PIP對(duì)Hep G2人肝癌細(xì)胞IR模型糖代謝紊亂相關(guān)因子的m RNA和蛋白的干預(yù)作用:用終濃度為1μM的DEX誘導(dǎo)HepG2人肝癌細(xì)胞建立IR模型,將其分為:IR模型組、陽(yáng)性藥組(ROG組和Met組)、PIP組。給藥干預(yù)后分別檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間段各組的葡萄糖消耗量并收集細(xì)胞,檢測(cè)目的因子:AMPKα、TORC2、PGC-1α蛋白及m RNA的表達(dá)。2.觀察PIP對(duì)C2C12小鼠成肌細(xì)胞IR模型糖代謝紊亂相關(guān)因子的m RNA和蛋白干預(yù)作用:C2C12小鼠成肌細(xì)胞在六孔板中長(zhǎng)至70%-80%時(shí),換用含2%馬血清的培養(yǎng)液代替完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)7-10天,成肌細(xì)胞即分化為肌小管細(xì)胞。采用終濃度為0.5m M的PA誘導(dǎo)分化好的肌小管細(xì)胞建立IR模型,將其分為:IR模型組、陽(yáng)性藥組(ROG組和Met組)、PIP組。給藥干預(yù)后分別檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間段各組的葡萄糖消耗量并收集細(xì)胞,檢測(cè)目的因子:AMPKα、PGC-1α、GLUT4蛋白及m RNA表達(dá)。結(jié)果:1.1μM的DEX作用于Hep G2人肝癌細(xì)胞48h后成功建立IR模型,用陽(yáng)性藥(ROG、Met)和PIP干預(yù)后,IR模型細(xì)胞葡萄糖消耗量顯著增加。2.0.5m M的PA作用于C2C12肌小管細(xì)胞16h后成功建立IR模型,用陽(yáng)性藥(ROG、Met)和PIP干預(yù)后,IR模型細(xì)胞葡萄糖消耗量顯著增加。3.五個(gè)濃度PIP分別干預(yù)IR模型HepG2細(xì)胞后,顯示上調(diào)AMPKα的m RNA和蛋白表達(dá),抑制TORC2、PGC-1α的m RNA和蛋白表達(dá)。4.對(duì)比五個(gè)濃度PIP對(duì)HepG2細(xì)胞作用后五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的葡萄糖消耗量,及各對(duì)應(yīng)因子的m RNA表達(dá)和蛋白表達(dá),顯示的時(shí)效和量效結(jié)果是10μM,24h時(shí)PIP各項(xiàng)指標(biāo)作用最顯著。5.五個(gè)濃度PIP分別干預(yù)IR模型C2C12細(xì)胞后,顯示上調(diào)AMPKα、PGC-1α、GLUT4 m RNA表達(dá);其蛋白表達(dá)也相應(yīng)增加。6.對(duì)比五個(gè)濃度PIP對(duì)C2C12細(xì)胞作用后五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的葡萄糖消耗量,及各對(duì)應(yīng)因子的m RNA表達(dá)和蛋白表達(dá),顯示的時(shí)效和量效結(jié)果是36h 10μM對(duì)GLUT4蛋白表達(dá)促進(jìn)明顯,36h 5μM對(duì)PGC-1α蛋白表達(dá)促進(jìn)明顯。結(jié)論:1.PIP通過(guò)上調(diào)細(xì)胞p-AMPKα的表達(dá)激活A(yù)MPK信號(hào)通路,增加Hep G2細(xì)胞、C2C12細(xì)胞IR模型上清中葡萄糖的消耗量而改善糖代謝紊亂。2.激活A(yù)MPK信號(hào)通路后,可抑制HepG2細(xì)胞中TORC2、PGC-1α的表達(dá),減少糖異生。上調(diào)C2C12細(xì)胞中PGC-1α、GLUT4的表達(dá),增加糖轉(zhuǎn)運(yùn)。這些因子都是與IR的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的,這可能是PIP改善IR的部分作用機(jī)理。
【學(xué)位單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)與說(shuō)明
引言
一、PIP對(duì)HepG2細(xì)胞IR模型糖代謝AMPK信號(hào)通路下游靶點(diǎn)的干預(yù)研究
    第一章 HepG2細(xì)胞培養(yǎng)及IR模型的建立
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第二章 PIP對(duì)HepG2細(xì)胞IR模型糖代謝紊亂的改善作用
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第三章 PIP對(duì)HepG2細(xì)胞IR模型AMPKα、TORC2、PGC-1α mRNA的影響
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第四章 PIP對(duì)HepG2細(xì)胞IR模型AMPKα、p-AMPK、TORC2、PGC-1α蛋白表達(dá)的影響
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
二、PIP對(duì)C2C12細(xì)胞IR模型糖代謝AMPK信號(hào)通路下游靶點(diǎn)的干預(yù)研究
    第一章 C2C12細(xì)胞培養(yǎng)及IR模型的建立
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第二章 PIP對(duì)C2C12細(xì)胞IR模型糖代謝紊亂的改善作用
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第三章 PIP對(duì)C2C12細(xì)胞IR模型PGC-1α、GLUT4 mRNA的影響
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.結(jié)果及結(jié)論
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
    第四章 PIP對(duì)C2C12細(xì)胞IR模型AMPKα、p-AMPK、PGC-1α、GLUT4蛋白表達(dá)的影響
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        5.本章小結(jié)
討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章
致謝

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