紅芪(Radix Hedysari)也稱為獨根,為豆科植物多序巖黃芪Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.的干燥根,是甘肅道地藥材。經(jīng)多年研究發(fā)現(xiàn),紅芪具有提高免疫、抗腫瘤、抗氧化和抗肝纖維化等多種多樣的生物學(xué)活性。此外,實驗室前期研究表明紅芪防治CCl_4誘導(dǎo)小鼠肝損傷療效顯著。目前,國內(nèi)外大多是對中藥單體化合物、單味藥或單個復(fù)方進行防治肝損傷的研究,但是將多個復(fù)方同時進行篩選比較研究較少,并且對多個以紅芪為主藥的復(fù)方篩方研究及拆方研究尚屬空白。本論文開展的具體內(nèi)容如下:第一部分:篩選防治肝損傷的紅芪復(fù)方。皮下注射四氯化碳(CCl_4)-花生油致小鼠肝損傷,分別給予4個紅芪復(fù)方(20 g原藥材·kg~(-1),每日1次)灌胃,7周后測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性;測定肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量;采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肝組織病理變化。結(jié)果顯示,CCl_4所致小鼠肝損傷效果明顯;4個紅芪復(fù)方對CCl_4所致小鼠肝損傷藥效顯著,但藥效活性存在差異,其中紅芪復(fù)方三的效果最佳。第二部分:對篩選出的紅芪復(fù)方三通過撤藥拆方的方法進行精簡方劑的拆方研究。從紅芪中藥復(fù)方君、臣、佐、使配伍關(guān)系出發(fā),以君藥紅芪為核心,通過撤藥拆方的方法,將其它四味中藥各去掉一味作為四個拆方組。通過CCl_4-花生油皮下注射致小鼠肝損傷,同時給予紅芪復(fù)方三全方及四個紅芪復(fù)方拆方(20 g原藥材·kg~(-1),每日1次)灌胃,7周后測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性、及白球蛋白比值(A/G);測定肝組織勻漿中總超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量;采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肝組織病理變化。結(jié)果表明,CCl_4所致小鼠肝損傷效果明顯;紅芪復(fù)方三全方和四個紅芪復(fù)方拆方對CCl_4所致小鼠肝損傷藥效顯著,但藥效活性存在差異,其中紅芪復(fù)方拆方一效果最佳。第三部分:建立了HPLC-DAD法分析紅芪復(fù)方三全方和各拆方化學(xué)成分的分析方法。對紅芪復(fù)方三全方和各拆方的主要色譜峰進行峰歸屬和HPLC圖譜成分差異比較。色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流動相為乙腈-0.2%乙酸水溶液,梯度洗脫,檢測波長330 nm,柱溫30℃。結(jié)果顯示,用HPLC-DAD技術(shù)能夠?qū)t芪復(fù)方三全方和各拆方通過峰歸屬進行定性鑒別和成分差異的比較。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5;R284.1
【部分圖文】：

陽性對照組 0.1 220.39±41.892.43±0.73紅芪復(fù)方一組 20.0 269.11±43.41㥮,△1.80±0.95㥮紅芪復(fù)方二組 20.0 242.18±48.11㥮2.08±1.08㥮紅芪復(fù)方三組 20.0 203.06±41.15㥮2.21±0.73㥮紅芪復(fù)方四組 20.0 206.00±35.30㥮2.39±0.55㥮注：與空白組比較*P＜0.05；與模型組比較㥮P＜0.05；與陽性對照組比較△P＜0.052.4.5 對 CCl4誘導(dǎo)的肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響各組小鼠肝組織經(jīng)切片、HE 染色后顯微鏡下觀察，空白組小鼠肝組織清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞排列規(guī)則呈放射狀，匯管區(qū)清楚。CCl4模型組小鼠肝細胞空泡樣變，水腫嚴重，脂肪變性，排列不規(guī)整，可見少量灶狀壞死，是典型的肝損傷病理特征，說明 CCl4造模成功。與模型組比較，陽性對照組和各紅芪復(fù)方組病理性損傷如細胞腫脹范圍、脂肪變性程度、肝組織壞死區(qū)域等均得到不同程度改善。見圖 2-1。

紅芪復(fù)方三全方組 20 265.54±22.97㥮1.77±0.22㥮紅芪復(fù)方拆方一組 20 250.26±24.01㥮1.04±0.28㥮,△,▲紅芪復(fù)方拆方二組 20 263.21±23.55㥮1.47±0.38㥮紅芪復(fù)方拆方三組 20 250.96±12.07㥮1.30±0.51㥮,△,▲紅芪復(fù)方拆方四組 20 248.29±31.81㥮1.49±0.42㥮注：與空白組比較*P＜0.05；與模型組比較㥮P＜0.05；與陽性對照組比較△P＜0.05；與紅芪復(fù)方三全方組比較▲P＜0.053.4.5 對 CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響各組小鼠肝組織經(jīng)切片、HE 染色后顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，空白組小鼠肝組織清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞排列規(guī)則呈放射狀，匯管區(qū)清楚。CCl4模型組小鼠肝細胞空泡樣變，排列不規(guī)整，水腫嚴重，脂肪變性，可見小灶狀炎性細胞浸潤，是典型的肝損傷病理特征，說明 CCl4造模成功。與模型組比較，陽性對照組、紅芪復(fù)方三全方組和各拆方組病理性損傷如肝組織壞死區(qū)域，細胞腫脹、脂肪變性等均有不同程度減輕，以紅芪復(fù)方拆方一組損傷程度最低。見圖 3-1。

圖 4-1 紅芪復(fù)方三全方與紅芪的 HPLC 圖譜圖 4-2 紅芪復(fù)方三全方與茵陳的 HPLC 圖譜1245678111221ⅡⅡ綠原酸紅芪復(fù)方三全方茵陳t /

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本文編號：2834651