本文采用乙醇回流法及超臨界CO_2提取法對丹參中丹參酮的提取工藝進行優(yōu)化,結(jié)合單因素和正交實驗,得出乙醇回流法最佳工藝條件為料液比1:8,溫度70℃,浸泡時間1h,回流時間2h,最高丹參總酮提取率達3.12%。超臨界CO_2提取法最佳工藝條件為壓力35Mpa,溫度45℃,時間2h,夾帶劑流速1.0mL/min,丹參總酮的最高提取率達4.58%。相比之下,超臨界CO_2提取法的提取效率更高。通過液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)對丹參粗提物進行成分分析,鑒定出丹參提取物中的4種主要成分分別為丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮和二氫丹參酮,根據(jù)建立的4種丹參酮標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出每種成分的具體含量。結(jié)果顯示,丹參酮提取率總體表現(xiàn)為丹參酮IIA隱丹參酮丹參酮I二氫丹參酮。采用了AKTA純化系統(tǒng)對丹參粗提取物進行進一步的分離。分離后各組分經(jīng)薄層色譜法(TLC)及高效液相色譜(HPLC)鑒定,結(jié)果表明四種主要丹參酮成分均被較好的分離開來,HPLC檢測出四種丹參酮純度分別為:丹參酮IIA:96.685%、丹參酮I:93.083%、隱丹參酮:94.968%、二氫丹參酮:99.621%。丹參酮的理化活性研究具體包含抑菌活性及抗癌活性兩大方面,在抑菌實驗中,CFU實驗結(jié)果表明四種丹參酮均表現(xiàn)出不同程度的抑菌效果,其中隱丹參酮的抑菌能力最強,其次為二氫丹參酮和丹參酮I,丹參酮ⅡA的抑菌效果最弱。MIC實驗更進一步證實了隱丹參酮具有出色的抑菌能力,其中對金黃色葡萄球菌的MIC值為20±0.08μg/mL,對大腸桿菌的MIC值為15±0.03μg/mL。經(jīng)掃描電鏡(SEM)觀察,發(fā)現(xiàn)隱丹參酮可破壞大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的細(xì)胞膜,造成細(xì)菌的生長、繁殖功能障礙,最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡。實驗選用丹參中含量最高的活性成分丹參酮IIA作為抗癌活性研究對象,由于其自身水溶性較差,無法直接作用于正常腫瘤細(xì)胞,因此采用表面活性劑泊洛沙姆188對丹參酮IIA進行包裹,制成固體分散體,后經(jīng)SEM表征及溶解度測試實驗,證明丹參酮IIA-P188-SD的水溶性是普通丹參酮ⅡA標(biāo)品的5倍�？拱┗钚詫嶒炛�,采用不同濃度梯度的丹參酮IIA-P188-SD處理人胃癌細(xì)胞7901,經(jīng)過LIVE/DEAD實驗驗證和流式細(xì)胞儀檢測,證明丹參酮IIA-P188具有抑制癌細(xì)胞生長的作用,且抗癌活性隨藥物濃度上升而提高。
【學(xué)位單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284.2;R285
【部分圖文】：

4 結(jié)果與分析4.1 丹參提取物的化學(xué)成分分析4.1.1 LC-MS 檢測結(jié)果通過 HPLC 外標(biāo)法鑒定，丹參提取物的色譜結(jié)果如圖 1 所示，質(zhì)譜檢測結(jié)果見圖2：

丹參酮ⅡA：27.3min。保留時間均與圖 1A 中相應(yīng)成分相對應(yīng)，因此對這四種物質(zhì)的鑒定結(jié)果有了初步的判斷，根據(jù)圖 2 質(zhì)譜檢測結(jié)果，確定這四種物質(zhì)的相對分子質(zhì)量，圖2A、B、C、D的最大離子碎片分別為m/z 277、297、277、295，與二氫丹參酮（M=276）、隱丹參酮（M=296）、丹參酮Ⅰ（M=276）、丹參酮ⅡA（M=294）的相對分子質(zhì)量相對應(yīng)，因此結(jié)合圖 1 和圖 2 可確定這 4 個峰分別為二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ以及丹參酮ⅡA；根據(jù)峰面積比對結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA（31.6%）、丹參酮Ⅰ（11.6%）、隱丹參酮（15.5%）、二氫丹參酮（7.2%）這四種成分峰面積之和占總峰面積比的65.9%,因此確定二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA 為丹參提取物中的主要成分。

圖 3 丹參酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 3 The standard curve of tanshinone以溶液濃度為橫坐標(biāo) X，色譜峰面積為縱坐標(biāo) Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖 3 所示四種丹參酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為：丹參酮ⅡA：y=77486x-5633，R2=0.997；丹參酮Ⅰ：y=27350x-917.4，R2=0.996；隱丹參酮：y=27381x-775.4，R2=0.998；二氫丹參酮：y=35934x-144.9，R2=0.998。4.1.2 精密度實驗精密度實驗結(jié)果如表3所示，丹參酮ⅡA的RSD為0.50%，丹參酮ⅠRSD為0.99隱丹參酮 RSD 為 0.72%，二氫丹參酮 RSD 為 0.76%，RSD 值＜2%，說明儀器精密度良好。

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本文編號：2834123