下咽癌屬于頭頸部惡性腫瘤,易出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移及早期遠(yuǎn)處擴(kuò)散,惡性程度較高,總生存率較低。臨床上70%患者確診時(shí)已處于癌癥中晚期,這是因?yàn)橄卵拾┌l(fā)病部位隱匿、缺乏早期臨床癥狀等原因。目前外科手術(shù)是臨床上治療下咽癌最常采用的手段,當(dāng)手術(shù)不能完全切除腫瘤組織或患者無法耐受手術(shù)治療時(shí),往往還需要臨床醫(yī)生結(jié)合患者個(gè)人實(shí)際情況進(jìn)行特異性治療方案設(shè)計(jì),選擇結(jié)合放化療等輔助治療手段,盡管如此下咽癌患者的預(yù)后仍然不好,五年生存率也不高。此外,下咽癌患者在手術(shù)或放化療之后,可能或多或少地出現(xiàn)身體某些機(jī)能的損傷和缺失,嚴(yán)重的甚至對(duì)日常生活造成一定的困擾,影響了患者的生活質(zhì)量,也給患者及其家庭造成巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。中醫(yī)作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué),一直在遠(yuǎn)期治療方面有所建樹,中醫(yī)藥治療癌癥可以大大提高患者的生活質(zhì)量和生存率。隨著近年中醫(yī)藥治療癌癥的研究得到越來越多的重視,我們希望開啟中醫(yī)藥治療頭頸部腫瘤的新方法,以提高患者的生存率及生活質(zhì)量。為此我們選擇了常見中醫(yī)藥材藤梨根(獼猴桃根)作為我們的研究藥物。目的:選取中華獼猴桃根乙酸乙酯提取物EE-ACP為研究藥物,深入觀察具有抗癌作用的傳統(tǒng)中藥材對(duì)于人下咽癌Fadu細(xì)胞的抑制作用,并判斷其可能的作用機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)運(yùn)用CCK8法對(duì)比不同濃度梯度的EE-ACP對(duì)Fadu細(xì)胞生長影響情況;Hoechst33258法記錄EE-ACP作用后Fadu細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞儀測試不同濃度作用下Fadu細(xì)胞凋亡壞死比例及分布情況,并通過Western Blot研究其潛在的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)數(shù)值選取了均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差的方式和SPSS23.0統(tǒng)計(jì)專用軟件進(jìn)行記錄,檢驗(yàn)水平以P0.05定為是結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1.CCK8法:用遞增濃度梯度的EE-ACP(100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml、400μg/ml、500μg/ml、700μg/ml)分別作用于Fadu細(xì)胞24、48、72 h后增殖抑制且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),存在時(shí)間-濃度關(guān)系,通過計(jì)算可得,其三個(gè)時(shí)間組的IC50分別為300,160和100μg/ml。2.Hoechst33258染色法:不同濃度梯度的的EE-ACP(150μg/ml、250μg/ml、350μg/ml、450μg/ml、550μg/ml)分別作用于Fadu細(xì)胞24 h后,顯微鏡下觀察藍(lán)色深染的細(xì)胞核數(shù)量逐漸上升,這一現(xiàn)象意味著細(xì)胞凋亡的數(shù)量和比例增高。3.流式細(xì)胞凋亡:FITC-Annexin V/PI雙染法顯示,遞增濃度梯度的EE-ACP(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml)分別作用Fadu細(xì)胞24 h后,第二和第四象限紅色點(diǎn)數(shù)量增多,代表Fadu細(xì)胞早晚期的凋亡數(shù)量加大。4.Western Blot法:結(jié)果顯示,不同濃度EE-ACP(10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml)作用Fadu細(xì)胞24 h后,TP53蛋白表達(dá)量逐漸隨著EE-ACP濃度的增加而呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)。結(jié)論:中華獼猴桃根乙酸乙酯提取物EE-ACP可以抑制Fadu細(xì)胞增殖,引發(fā)早晚期凋亡,其可能的作用機(jī)制與調(diào)控突變型TP53基因的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 1 所示。在圖 1 中不難發(fā)現(xiàn)，當(dāng) EE-ACμ g/ml 后，F(xiàn)adu 細(xì)胞的抑制率與 600μ g/ml 組相比較，差異不具（p>0.05）。最終我們選取的濃度梯度是從 100μ g/ml 至 700μ g等條件下設(shè)計(jì)了 5-氟尿嘧啶對(duì)于下咽癌 Fadu 細(xì)胞的最適濃度曲果如圖 2 所示。為了對(duì)照我們選取了5-Fu在同樣條件下與EE-ACP比較分析兩兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 3 所示，根據(jù)圖像分析在 24、48、72 小時(shí)作用后和對(duì)照組 5-Fu 的細(xì)胞存活率曲線均向下走行且抑制效果表現(xiàn)出強(qiáng)度依賴性。與 5-氟尿嘧啶組相比 EE-ACP 對(duì) Fadu 細(xì)胞的抑制效果逐漸趕尿嘧啶組并最終將 Fadu 細(xì)胞存活率控制在 10%以內(nèi)，在 24、48、EE-ACP 對(duì) Fadu 細(xì)胞的 IC50 分別為 300，160 和 100μ g/ ml。在里，作用 24、48h 后 5-氟尿嘧啶組均未達(dá)到半數(shù)致死，作用 72h對(duì) Fadu 細(xì)胞的 IC50 為 100μ g/ ml。

-氟尿嘧啶對(duì)下咽癌Fadu細(xì)胞抑制作用曲線

第 19 頁圖 3 CCK8 法，5-氟尿嘧啶和中華獼猴桃根對(duì)下咽癌 Fadu 細(xì)胞的抑制3.2 Hoechst33258 染色觀察 EE-ACP 對(duì) Fadu 細(xì)胞核形態(tài)學(xué)影響hoechst33258 實(shí)驗(yàn)法可以根據(jù)細(xì)胞核染色的情況判斷細(xì)胞的狀態(tài)，這種方法形象直觀操作簡便、可以直接在鏡下看到藥物作用后細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2831165