目的:經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),天然化合物漢防己甲素有著優(yōu)良的抗腫瘤效果。課題組前期對(duì)其進(jìn)行了5位的化學(xué)結(jié)構(gòu)改造,并對(duì)其進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選,發(fā)現(xiàn)5位改造后的抗腫瘤效果有所改善。在此基礎(chǔ)上,本文繼續(xù)以漢防己甲素為先導(dǎo)化合物,通過對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造,期望尋找到更加有效的新型抗腫瘤化合物,并對(duì)篩選出來的活性較好的化合物做初步的抗腫瘤機(jī)制研究。方法:以漢防己甲素為先導(dǎo)化合物,低溫環(huán)境下進(jìn)行5位溴取代,生成中間體5-溴漢防己甲素,再通過Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)與一系列硼酸衍生物反應(yīng),得到相應(yīng)的目標(biāo)化合物。并將化合物的結(jié)構(gòu)通過MS(質(zhì)譜)、~1H NMR(核磁共振氫譜)、13C NMR(核磁共振碳譜)、熔點(diǎn)測(cè)定等技術(shù)手段進(jìn)行確證。采用CCK-8法對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行了初步的體外抗腫瘤活性篩選。以先導(dǎo)化合物漢防己甲素為陽性對(duì)照藥物,通過考察目標(biāo)化合物對(duì)P388(小鼠白血病細(xì)胞)、A549(人肺癌細(xì)胞)的抑制率來確定其抗腫瘤效果。對(duì)目標(biāo)化合物的抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行初步探索,從13個(gè)目標(biāo)化合物中篩選出活性較好的目標(biāo)化合物h5,通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定目標(biāo)化合物對(duì)A549細(xì)胞的凋亡及凋亡周期的影響。結(jié)果:本文共合成13個(gè)未見文獻(xiàn)報(bào)道的新的漢防己甲素衍生物。經(jīng)MS、1H NMR、13C NMR、熔點(diǎn)測(cè)定等技術(shù)手段對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明均為目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)。CCK-8法的體外抗腫瘤活性測(cè)定結(jié)果表明:大部分目標(biāo)化合物的IC50值小于10μM,其中以P388細(xì)胞株篩選的13個(gè)新化合物的活性,目標(biāo)化合物h5、h11、h13的活性均優(yōu)于先導(dǎo)化合物漢防己甲素;以A549細(xì)胞株篩選的13個(gè)新化合物的活性,13個(gè)目標(biāo)化合物的活性均優(yōu)于漢防己甲素。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果分析表明:目標(biāo)化合物h5可促進(jìn)A549細(xì)胞的凋亡,且成一定的濃度依賴性;目標(biāo)化合物h5對(duì)A549細(xì)胞有一定的細(xì)胞周期阻滯作用,作用的周期為S期和G2期。結(jié)論:經(jīng)鑒定,13個(gè)新的漢防己甲素衍生物均為目標(biāo)化合物,且均未見文獻(xiàn)報(bào)道。CCK-8法對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行的體外P388和A549細(xì)胞增值抑制活性篩選,結(jié)果表明目標(biāo)化合物h5、h11、h13對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞均有較高的生物活性。其初步的構(gòu)效關(guān)系表明:在先導(dǎo)化合物的結(jié)構(gòu)中引入含N、O、S的雜環(huán)基團(tuán),有助于先導(dǎo)化合物的抗腫瘤活性改善;在先導(dǎo)化合物的結(jié)構(gòu)中引入的苯并呋喃基團(tuán)的生物活性優(yōu)于苯并噻吩,指示可能在引入的基團(tuán)中相對(duì)于噻吩,呋喃有更好的改善作用;當(dāng)引入的基團(tuán)為六元雜環(huán)苯并體系時(shí),與先導(dǎo)化合物相連的鍵在其雜環(huán)上比在其苯環(huán)上更有抗腫瘤活性。為進(jìn)一步通過結(jié)構(gòu)優(yōu)化尋求更加有效的抗腫瘤化合物提供了參考。目標(biāo)化合物h5對(duì)A549細(xì)胞的凋亡呈濃度依賴性,且通過對(duì)細(xì)胞周期的阻滯作用而誘導(dǎo)凋亡。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

圖 1 反應(yīng)流程及 R 基1.2.2 中間產(chǎn)物 5-溴漢防己甲素衍生物的合成將 3 g 漢防己甲素加入到 50 mL 單口瓶中，依次加入 20 mL 三氟乙酸和 10 m水，并且充分溶解。之后將溴水的乙酸溶液 5 mL（1.2 mol/L）緩慢滴入單口瓶中在冰鹽浴中反應(yīng) 4.5 小時(shí)（保持溫度在-15℃以下）。之后，淬滅反應(yīng)（50 mL 冰水）同時(shí)用氨水調(diào)節(jié) pH 到堿性，產(chǎn)物用 200 mL 二氯甲烷萃取 2 次（100 mL/次）。并二氯甲烷層，用飽和食鹽水洗滌二氯甲烷層 3 次，適量無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，將濾液減壓旋轉(zhuǎn)蒸干。最后，用 200 mL 乙醚重結(jié)晶，過濾后，濾液真空干燥得中間產(chǎn)物。1.2.3 目標(biāo)化合物漢防己甲素衍生物的合成將中間產(chǎn)物 5-溴漢防己甲素 70 mg（0.1 mmol）加入 50 mL 三頸瓶，用甲苯：

圖 2 化合物 h5 對(duì) A549 細(xì)胞凋亡的影響（*P<0.05）合物 h5 對(duì) A549 細(xì)胞的周期影響結(jié)果可以看出：目標(biāo)化合物 h5 在 10 μM 作用于 A549 53.2%降到 44.9%，而細(xì)胞的 S 期和 G2 期的細(xì)胞百分含Control 10 μM

化合物h5對(duì)A549細(xì)胞凋亡周期的影響（*P<0.05）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2830046