金蟬花(Cordyceps cicadae)為麥角菌科真菌大蟬草及其寄主山蟬若蟲形成的干燥復(fù)合體,與冬蟲夏草的無性型同屬,在民間是一種藥食兩用真菌。其性寒味甘,具疏散風(fēng)熱、定驚鎮(zhèn)痙等功效。蟬花主要生長(zhǎng)在四川、江浙地區(qū)、福建、安徽及云南等省份。近年來,冬蟲夏草的大規(guī)模采收導(dǎo)致資源枯竭,金蟬花與冬蟲夏草成分相似,功效相近,有望開發(fā)成冬蟲夏草的替代品。本論文系統(tǒng)分析了金蟬花中營(yíng)養(yǎng)成分,建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金蟬花中6個(gè)核苷類成分的方法,并對(duì)其主要有效成分(甘露醇、麥角甾醇和核苷類成分)進(jìn)行含量測(cè)定。采用體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)對(duì)不同濃度乙醇醇沉金蟬花多糖進(jìn)行篩選,得到最佳抗氧化活性多糖組分,研究了其對(duì)果蠅壽命及抗氧化活性的影響,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討,為金蟬花進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容如下:1.金蟬花營(yíng)養(yǎng)成分研究。按照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),對(duì)12個(gè)不同產(chǎn)地的金蟬花樣品中主要營(yíng)養(yǎng)成分、粗多糖以及金屬成分進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果顯示,纖維素、粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分及碳水化合物等含量分別為36.98%～42.84%、33.9%～37.62%、4.46%～8.87%、4.37%～6.06%、5.77%～9.59%和3.08%～8.40%。金蟬花粗多糖含量為2.27%～3.58%。金蟬花中金屬成分Cd、Pb、Hg、As的含量均低于國(guó)標(biāo)中食用菌重金屬的限量標(biāo)準(zhǔn)(1.0 mg/kg、0.2 mg/kg、0.1 mg/kg和0.5mg/kg)。2.金蟬花核苷類成分的LC-MS分析及含量測(cè)定。采用高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)-質(zhì)譜(Mass Spectrometry,MS)聯(lián)用法對(duì)金蟬花水超聲提取物中核苷類成分進(jìn)行定性分析,初步鑒定出7種主要核苷類成分,并對(duì)峰面積較大的6個(gè)核苷類成分(腺嘌呤、尿苷、肌苷、鳥苷、腺苷和N6-(2-羥乙基)腺苷)建立了HPLC同時(shí)測(cè)定的方法,測(cè)定了12個(gè)不同產(chǎn)地金蟬花核苷類成分的含量。結(jié)果顯示,該方法分離度及峰形良好,精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和重復(fù)性等考察良好,可進(jìn)行核苷類成分的檢測(cè)分析;不同產(chǎn)地金蟬花的6個(gè)核苷類成分分別為17.6～77.34μg/g、1077.56～1538.21μg/g、50.24～481.39μg/g、293.84～705.44μg/g、408.2～784.27μg/g和534.24～921.91μg/g。3.金蟬花麥角甾醇及甘露醇含量測(cè)定。根據(jù)中國(guó)藥典規(guī)定,分別采用HPLC法和紫外分光光度計(jì)法,測(cè)定12個(gè)不同產(chǎn)地的金蟬花菌核、子實(shí)體和整株中麥角甾醇和甘露醇的含量。結(jié)果顯示,整株金蟬花麥角甾醇含量為281.88～683.1μg/g,子實(shí)體中麥角甾醇含量明顯高于菌核,分別為540.57～1800.39μg/g和129.83～229.55μg/g。金蟬花中甘露醇含量為82.12～136.24 mg/g,菌核中甘露醇含量略高于子實(shí)體,其均值分別為112.53～154.29 mg/g和68.71～105.62 mg/g。4.金蟬花多糖體外抗氧化研究。通過不同濃度乙醇醇沉金蟬花水提物,得到6個(gè)金蟬花多糖組分CP 30～CP 80,并測(cè)定不同濃度醇沉金蟬花多糖的DPPH自由基和·OH自由基清除能力、總還原能力和總抗氧化能力。結(jié)果顯示,金蟬花多糖組分抗氧化活性為:CP70CP60CP80CP50CP30CP40,表明金蟬花多糖組分CP70具有最佳抗氧化活性。5.金蟬花多糖CP70體內(nèi)抗氧化研究。利用雙氧水(H_2O_2)應(yīng)激果蠅模型和正常生理衰老果蠅模型,研究高、中、低劑量(10 mg/mL、5 mg/mL和1 mg/mL)金蟬花多糖組分CP70對(duì)果蠅壽命的影響,并測(cè)定了中劑量組(5 mg/mL)金蟬花多糖組分CP70對(duì)果蠅體內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量以及過氧化氫酶(CTA)活力的影響,同時(shí)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)測(cè)定4種衰老相關(guān)基因(CAT、過氧化物歧化酶SOD1、MTH和SIRT2)mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示,金蟬花多糖CP70組分對(duì)兩種模型下果蠅的平均壽命和最高壽命均有延長(zhǎng),且中等劑量組(5 mg/mL)效果最為顯著;5 mg/mL金蟬花多糖組分CP70顯著升高了CAT酶(P0.01)和GSH-Px酶活力(P0.001),降低了MDA的含量(P0.001);另外,金蟬花多糖組分CP70顯著上調(diào)了果蠅體內(nèi)CAT、SOD1和MTH mRNA水平的表達(dá)(P0.05),而對(duì)SIRT2mRNA水平的表達(dá)無顯著差異,推測(cè)金蟬花多糖組分CP70能顯著延長(zhǎng)果蠅壽命可能與上調(diào)抗氧化相關(guān)基因CAT、SOD1和MTH的表達(dá)水平有關(guān)。
【學(xué)位單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

圖 1.1 野生金蟬花Fig.1.1 The picture of Cordyceps cicadae籍[17]是唐代（公元 8 世紀(jì)中期）藏醫(yī)病的方劑。在 1765 年，清代醫(yī)藥學(xué)家

具有抗炎、抗腫瘤、腎臟保護(hù)、鎮(zhèn)靜A 對(duì)小菜蛾具有一定的殺蟲活性,可導(dǎo)致和致死等現(xiàn)象。朱碧純[58]等發(fā)現(xiàn)從金驚厥模型有抑制作用，并推測(cè)其機(jī)制可能 HEA 對(duì)小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型NF-αm RNA 的水平。一種真菌和細(xì)菌的代謝產(chǎn)物[60]，具有免余佳文[62,63]等建立了柱前衍生化高效液而，野生蟬花中 ISP-1 含量較少[63]，徐離得到 ISP-1，且優(yōu)化了多球殼菌素的分小鼠腎小球系膜細(xì)胞肥大及細(xì)胞外基質(zhì)活的大鼠腎小球系膜細(xì)胞增生有抑制作

圖 2.1 葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2.1 The Glucose standard curve表 2.3 金蟬花多糖成分含量（%）（n=3）Tab 2.3 The polysaccharide contents of Cordyceps Cicadae樣品 多糖含量% 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差S01 3.33 0.06S02 3.03 0.06S03 3.58 0.07S04 3.03 0.10S05 2.63 0.04S06 2.66 0.07S07 2.79 0.10

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本文編號(hào)：2829489