發(fā)布時(shí)間：2020-09-29 06:35

　　 腫瘤的惡性進(jìn)展與組織損傷密切相關(guān)。惡性腫瘤常發(fā)生在慢性損傷部位,慢性損傷所導(dǎo)致的炎癥是癌癥發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素。巨噬細(xì)胞在組織損傷及修復(fù)中具有重要作用,其在不同的環(huán)境中激活為不同的表型,通常表現(xiàn)為經(jīng)典活化的M1型和替代活化的M2型。M1型巨噬細(xì)胞以分泌IL-6,NO,ROS為主,具有促炎和組織損傷的作用;M2型巨噬細(xì)胞以分泌IL-10和TGF-β為主,在抗炎和組織損傷修復(fù)中起關(guān)鍵作用�？喙宪誈是從苦瓜中提取的主要活性成分,具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化等藥理作用,其防治腫瘤作用是否與影響巨噬細(xì)胞相關(guān)未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的是探究巨噬細(xì)胞極化表型在苦瓜苷G阻止肺損傷和癌前病變中的作用及機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)分為體內(nèi)研究,體外研究,機(jī)制研究三個(gè)部分進(jìn)行。在體外實(shí)驗(yàn)中,分別用LPS和IL-10極化RAW264.7為M1樣和M2樣巨噬細(xì)胞,以不同濃度的苦瓜苷G處理M1樣和M2樣巨噬細(xì)胞,免疫熒光檢測(cè)對(duì)巨噬細(xì)胞表型的影響;MTT檢測(cè)對(duì)巨噬細(xì)胞增殖能力的影響;中性紅和吞噬細(xì)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響;激光全息細(xì)胞成像分析對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響;Annexin V-FITC/PI染色檢測(cè)對(duì)凋亡的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),建立烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型,HE染色法檢測(cè)烏拉坦誘導(dǎo)肺癌過(guò)程中小鼠肺部病理變化;免疫熒光檢測(cè)肺組織中NLRP3表達(dá),評(píng)價(jià)苦瓜苷G對(duì)肺損傷和肺癌前病變的影響。建立LPS肺損傷模型,采用氯屈膦酸鈉脂質(zhì)體(LEC)耗竭巨噬細(xì)胞、過(guò)繼性輸注M1樣和M2樣巨噬細(xì)胞檢測(cè)巨噬細(xì)胞在肺損傷中的作用。使用動(dòng)物呼吸能量代謝測(cè)量系統(tǒng)監(jiān)測(cè)小鼠肺功能變化;伊文思藍(lán)染色檢測(cè)小鼠肺上皮細(xì)胞通透性變化;干濕法檢測(cè)小鼠肺水含量影響;HE染色法檢測(cè)小鼠肺部病理變化,評(píng)價(jià)苦瓜苷G對(duì)肺損傷的影響及這種影響與巨噬細(xì)胞的相關(guān)性。機(jī)制研究中,體外極化的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)中,AO染色檢測(cè)巨噬細(xì)胞中紅色酸性囊泡(AVOs)、免疫熒光和Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3-B、P62表達(dá),觀察細(xì)胞自噬;熒光探針DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ROS;ELISA試劑盒測(cè)試IL-12,IL-10和TGF-β水平;比色測(cè)定試劑盒檢測(cè)NO(一氧化氮)水平,評(píng)價(jià)苦瓜苷G對(duì)不同極化表型巨噬細(xì)胞功能的影響。烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型中,免疫熒光檢測(cè)苦瓜苷G對(duì)肺泡中巨噬細(xì)胞表型的影響,ELISA試劑盒檢測(cè)IL-6,IL-12,IL-10,TGF-β水平變化;LPS誘導(dǎo)肺損傷模型中,免疫熒光和Western blot檢測(cè)苦瓜苷G對(duì)肺部巨噬細(xì)胞表型的影響,驗(yàn)證苦瓜苷G的肺損傷和肺癌前病變阻止作用與改變巨噬細(xì)胞表型的相關(guān)性。最后,運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析苦瓜苷G調(diào)控巨噬細(xì)胞表型的可能機(jī)制。體外結(jié)果顯示,苦瓜苷G增加巨噬細(xì)胞的吞噬能力,在不影響M2樣巨噬細(xì)胞活性的劑量下,抑制M1樣巨噬細(xì)胞增殖,改變其細(xì)胞形態(tài)、誘導(dǎo)其凋亡。體內(nèi)結(jié)果顯示,在烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型中,烏拉坦呈時(shí)間依賴(lài)性導(dǎo)致肺損傷和癌前病變,苦瓜苷G能顯著阻止肺損傷和癌前病變,這種作用具有巨噬細(xì)胞依賴(lài)性。在LPS誘導(dǎo)肺損傷模型中,輸注IL-10誘導(dǎo)的M2樣巨噬細(xì)胞改善肺損傷,輸注LPS誘導(dǎo)的M1樣巨噬細(xì)胞加劇肺損傷;苦瓜苷G降低M1樣巨噬細(xì)胞的促進(jìn)損傷功效,與輸注M2樣巨噬細(xì)胞協(xié)同改善肺功能、肺通透性和肺損傷。機(jī)制研究顯示,苦瓜苷G體外促進(jìn)M1巨噬細(xì)胞自噬,降低其ROS、NO、IL-12水平,升高IL-10、TGF-β水平,相對(duì)增加了M2樣巨噬細(xì)胞比率。在烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型中,苦瓜苷G增加肺泡Arginase+巨噬細(xì)胞,升高肺泡灌洗液中IL-10、TGF-β水平,降低IL-12、IL-6水平;LEC刪除巨噬細(xì)胞后苦瓜苷G的肺損傷和癌前病變阻止作用減弱。在LPS誘導(dǎo)的肺損傷模型中,苦瓜苷G降低M1樣標(biāo)志物iNOS表達(dá)、增加M2樣標(biāo)志物Arginase表達(dá)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果表明苦瓜苷G通過(guò)NF-κB,PPAR等信號(hào)通路降低M1樣巨噬細(xì)胞表型、維持其M2樣表型。綜上所述,M2樣巨噬細(xì)胞在組織損傷修復(fù)中扮演重要角色,組織損傷的及時(shí)治愈可以阻止肺癌前病變,苦瓜苷G可以選擇性地抑制M1樣并促使其向M2樣巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化促進(jìn)肺損傷愈合、進(jìn)而阻止肺癌前病變。
【學(xué)位單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2-1 苦瓜苷 G 對(duì)極化巨噬細(xì)胞表型的影響Fig 2-1 Effect of mommordicoside G on polarized macrophages phenotypesestern blot 檢測(cè) M1 樣、M2 樣巨噬細(xì)胞 Arginase 表達(dá)顯示:苦瓜苷 G 處理 M1 樣、M2 樣巨噬細(xì)胞后 Arginase 的表達(dá)增加P < 0.05 vs Control）圖 2-2 極化巨噬細(xì)胞 Arginase 的表達(dá)Fig 2-2 Expression of polarized macrophageArginase

（如圖2-2）（*P < 0.05 vs Control）圖 2-2 極化巨噬細(xì)胞 Arginase 的表達(dá)Fig 2-2 Expression of polarized macrophageArginase2.4.2 苦瓜苷 G 對(duì) M1 樣、M2 樣巨噬細(xì)胞形態(tài)的影響

圖 2-3 苦瓜苷 G 對(duì)極化巨噬細(xì)胞形態(tài)的影響Fig 2-3 Effect of Momordicoside G on the Morphology of polarized macrophages2.4.3 苦瓜苷 G 對(duì) M1 樣、M2 樣巨噬細(xì)胞增殖能力的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：不同濃度的苦瓜苷 G 處理 M1 樣和 M2 樣巨噬細(xì)胞后，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)苦瓜苷 G 抑制 M1 樣巨噬細(xì)胞的增殖但對(duì) M2 樣巨噬細(xì)胞無(wú)明顯的影響。（如圖 2-4）（*P< 0.05, **P < 0.01 vs Control）。圖 2-4 苦瓜苷 G 對(duì)極化巨噬細(xì)胞增殖能力的影響

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王永川;魏麗娟;劉俊田;李世霞;王慶生;;發(fā)達(dá)與發(fā)展中國(guó)家癌癥發(fā)病率與死亡率的比較與分析[J];中國(guó)腫瘤臨床;2012年10期

本文編號(hào)：2829371