目的研究馬錢(qián)子堿對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響及其可能機(jī)制的探討。方法將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231注射到裸鼠皮下,構(gòu)建三陰性乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,并將造模成功的裸鼠隨機(jī)分為馬錢(qián)子堿低、中、高劑量組(15、30、60 mg/kg),陽(yáng)性對(duì)照組(紫杉醇5 mg/kg)和陰性對(duì)照組(1%DMSO)。其中馬錢(qián)子堿組和陰性對(duì)照組采用灌胃給藥,每天一次;紫杉醇組采用腹腔注射,兩天一次,共給藥4周。期間每周兩次對(duì)裸鼠體重、移植瘤長(zhǎng)、短徑進(jìn)行測(cè)量,并按公式計(jì)算移植瘤的體積。治療結(jié)束后隔天采用脫頸處死法處死裸鼠,剝離移植瘤。觀察馬錢(qián)子堿對(duì)裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)影響,并計(jì)算各組裸鼠移植瘤大小、重量及腫瘤生長(zhǎng)抑制率,細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原(Ki-67)染色評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖情況;凋亡原位末端標(biāo)記法(TUNEL實(shí)驗(yàn))及凋亡蛋白Caspase-3免疫組化染色來(lái)評(píng)估馬錢(qián)子堿對(duì)裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡的影響。體外培養(yǎng)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,并用不同濃度的馬錢(qián)子堿(25、50、100、200、400μg/m L)處理MDA-MB-231細(xì)胞48 h,收取細(xì)胞中的總蛋白,用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表達(dá)水平,觀察不同濃度的馬錢(qián)子堿處理三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞后,對(duì)凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)的影響。結(jié)果在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,皮下注射乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞6周后,共有16只裸鼠造模成功,移植瘤長(zhǎng)徑約0.5 cm,其中一只因進(jìn)食及營(yíng)養(yǎng)狀況較差,舍棄不用,余下15只裸鼠隨機(jī)分為五組,并進(jìn)行相應(yīng)的治療。治療結(jié)束后裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)情況顯示:與陰性對(duì)照組相比,馬錢(qián)子堿中、高劑量組(30、60 mg/kg)及陽(yáng)性對(duì)照組(紫杉醇5 mg/kg)移植瘤體積明顯縮小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而馬錢(qián)子堿低劑量組(15 mg/kg)移植瘤體積未見(jiàn)明顯差別;與陽(yáng)性對(duì)照組相比,陰性對(duì)照組及馬錢(qián)子堿低劑量組移植瘤體積顯著增大,而馬錢(qián)子堿高、中劑量組無(wú)明顯區(qū)別。對(duì)各組移植瘤標(biāo)本進(jìn)行Ki-67染色、TUNEL實(shí)驗(yàn)及Caspase-3免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果中提示:與陰性對(duì)照組相比,馬錢(qián)子堿中、高劑量組(30、60 mg/kg)及陽(yáng)性對(duì)照組(紫杉醇5 mg/kg)在上述實(shí)驗(yàn)中均具有顯著差別,而馬錢(qián)子堿低劑量組(15 mg/kg)則無(wú)明顯差別。在體外實(shí)驗(yàn)中,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示:200、400μg/m L濃度的馬錢(qián)子堿處理的三陰性乳腺癌細(xì)胞(TNBC),其Caspase-3蛋白的表達(dá)水平明顯高于其他劑量組及陰性對(duì)照組,而其他濃度的馬錢(qián)子堿處理的三陰性乳腺癌細(xì)胞,Caspase-3蛋白的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯區(qū)別。結(jié)論馬錢(qián)子堿能抑制三陰性乳腺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),其機(jī)制可能與馬錢(qián)子堿誘導(dǎo)三陰性乳腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡有關(guān)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

19圖 1：治療結(jié)束后各組小鼠剝離的移植瘤大體圖片E 依次為：陰性對(duì)照組、馬錢(qián)子堿 15、30、60mg/kg 組及紫杉ages of transplanted tumors of mice in each group after treatmentnegative control group, brucine 15, 30, 60 mg/kg group and paclita

圖 3 各組移植瘤 Ki-67 免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占陰性對(duì)照組百分比與陰性對(duì)照組相比較：**p<0.01；與紫杉醇組相比：##p<0.01mber of Ki-67 immunohistochemical positive cells in each group accounpercentage of negative control groupd with the negative control group:**p<0.01; compared with the paclitaxe

ining and Ki-67 staining of transplanted tumors of nude mice in eachMagnification × 200: negative control group; B:brucine 15 mg/kg; C: brucine 30 mg/kg;D: brucine 60 mg/kg; E: paclitaxel group圖 2 對(duì)各組裸鼠移植瘤進(jìn)行 HE 染色及 Ki-67 染色 放大倍數(shù)×2：陰性對(duì)照組；B：馬錢(qián)子堿 15mg/kg；C：馬錢(qián)子堿 30mg/kg；D：馬錢(qián)子堿 60mg/kg；E：紫杉醇組

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本文編號(hào)：2828415