目的評(píng)估菊粉對(duì)不同階段T2DM小鼠的干預(yù)效果及機(jī)制;評(píng)估菊粉對(duì)PCOS小鼠的干預(yù)效果及機(jī)制。方法1.造模與分組:(1)根據(jù)空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(oral glucose tolerance tests,OGTT)和是否給予菊粉干預(yù)將90只db/db小鼠分成糖尿病前期組(PDM)、早期糖尿病組(EDM)、糖尿病組(DM)、PDM菊粉干預(yù)組(INU/PDM)、EDM菊粉干預(yù)組(INU/EDM)和DM菊粉干預(yù)組(INU/DM),干預(yù)組小鼠用菊粉連續(xù)干預(yù)6周;(2)將40只C57BL/6J雌性小鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(CON)、模型組(MOD)、菊粉組(INU)、二甲雙胍組(MET),最后三組給予20天的6mg/100g脫氫表雄酮和60%高脂飲食來(lái)形成PCOS小鼠模型,INU和MET組分別給予菊粉、二甲雙胍干預(yù)21天。2.實(shí)驗(yàn)方法:(1)菊粉干預(yù)后,每周監(jiān)測(cè)一次db/db小鼠和C57BL/6J小鼠的體重(body weight,BW),并且db/db小鼠還需要每周監(jiān)測(cè)一次FBG,每?jī)芍鼙O(jiān)測(cè)一次OGTT;(2)C57BL/6J小鼠在21天的干預(yù)結(jié)束后,進(jìn)行胰島素耐量試驗(yàn)(insulin tolerance test,ITT)觀察胰島素抵抗情況;(3)用ELISA檢測(cè)db/db小鼠中血清糖化血紅蛋白(glycated hemoglobin,GHb)和C57BL/6J小鼠血清中激素六項(xiàng)水平;(4)用AU400全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)db/db小鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)和總膽固醇(total cholesterol,TC)的變化情況;(5)用HE染色觀察C57BL/6J小鼠卵巢的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;(6)用顯色基質(zhì)鱟試劑盒檢測(cè)db/db小鼠和C57BL/6J小鼠血漿中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的水平;(7)用微量樣本多重蛋白定量技術(shù)(Cytometric Bead Array,CBA)檢測(cè)db/db小鼠、C57BL/6J小鼠血漿中炎癥因子的水平;(8)免疫組化法檢測(cè)db/db小鼠肝臟中巨噬細(xì)胞變化情況;(9)用16S rRNA腸道菌群測(cè)序檢測(cè)db/db小鼠和C57BL/6J小鼠腸道菌群的變化情況;(10)Spearman相關(guān)分析檢測(cè)db/db小鼠和C57BL/6J小鼠血漿炎癥因子與腸道菌群之間的相關(guān)性。結(jié)果第一部分:菊粉能夠顯著降低不同階段T2DM小鼠的BW、FBG、GHb、TG、TC以及LPS、IL-6、TNF-α、IL-17A的水平,但I(xiàn)L-17A在PDM和INU/PDM組之間沒(méi)有顯著差異。此外,INU/PDM和INU/EDM組小鼠血漿中IL-10與相應(yīng)未干預(yù)組相比顯著升高,而在INU/DM組中無(wú)顯著差異。肝臟免疫組化顯示:菊粉能夠降低不同階段T2DM小鼠肝臟中的巨噬細(xì)胞和脂肪空泡。16S rRNA腸道菌群測(cè)序顯示:菊粉能夠使不同階段T2DM小鼠腸道菌群藍(lán)藻門(mén)(Cyanobacteria)、擬桿菌屬(Bacteroides)顯著升高,Ruminiclostridium_6顯著下降。與相應(yīng)的未干預(yù)組相比,脫鐵桿菌門(mén)(Deferribacteres)和軟壁菌門(mén)(Tenericutes)在INU/DM組中顯著下降,而Mucispirillum在INU/PDM和INU/EDM組中顯著降低。Spearman相關(guān)分析顯示:Cyanobacteria、Bacteroides分別與IL-10,Deferribacteres、Tenericutes、Mucispirillum分別與IL-6和TNF-α,Mucispirillum、Ruminococcaceae_6分別與IL-17A和LPS,Ruminococcaceae_6與TNF-α呈正相關(guān),而Cyanobacteria、Bacteroides分別與IL-6和TNF-α,Cyanobacteria與IL-17A,Ruminococcaceae_6與IL-10呈負(fù)相關(guān)。第二部分:膳食菊粉能夠顯著降低PCOS小鼠的BW、睪酮(Testosterone,T)、TNF-α、IL-6、IL-17A水平,增加血清雌二醇(Estradiol,E2)水平,改善胰島素抵抗,但I(xiàn)L-10在INU和MOD組之間沒(méi)有顯著差異。卵巢HE染色顯示:菊粉能夠使PCOS小鼠卵泡內(nèi)顆粒層和黃體增加。16S rRNA腸道菌群測(cè)序顯示:與MOD組相比,INU組小鼠雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)顯著升高,并且變形桿菌門(mén)(Proteobacteria)、螺桿菌屬(Helicobacter)和Parasutterella顯著降低。Spearman相關(guān)分析顯示:Bifidobacterium與TNF-α、IL-6、IL-17A呈負(fù)相關(guān),而Helicobacter與血漿炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-17A)呈正相關(guān)。結(jié)論(1)菊粉可通過(guò)抑制炎癥和調(diào)節(jié)腸道菌群來(lái)改善處于不同階段的T2DM。(2)菊粉可以通過(guò)抑制炎癥和調(diào)節(jié)腸道菌群來(lái)改善PCOS。
【學(xué)位單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

22圖 1 小鼠的常規(guī)指標(biāo)變化情況。A. BW: PDM vs. INU/PDM; B. BW: EDM vs.INU/EDM; C. BW: DM vs. INU/DM; D. FBG: PDM vs. INU/PDM; E. FBG: EDMvs. INU/EDM; F. FBG: DM vs. INU/DM; G-I. 不同組小鼠 OGTT 變化情況 ; J.各組小鼠 GHb 水平; K. 各組小鼠 TG 水平; L. 各組小鼠 TC 水平。*P<0.05，**P<0.01.

各組小鼠血漿LPS水平

各組小鼠中血漿促炎和抗炎細(xì)胞因子的水平

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本文編號(hào)：2828372