背景:目前,迷迭香酸具備的低毒性和抗腫瘤活性特性已經(jīng)成為腫瘤治療的熱點(diǎn)化合物之一。然而由于其水溶性較低且抗腫瘤活性較低限制了其應(yīng)用,同時(shí)由于鼻咽癌的預(yù)后不佳,迫切需要新的治療方法。因此,我們課題組通過(guò)參照迷迭香酸結(jié)構(gòu),將其酯鍵用酰胺鍵取代提高水溶性、羧酸酯化以提高膜滲透性,從而合成了新的迷迭香酸類似物。目的:通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討迷迭香酸類似物RA-C1是否通過(guò)激活依賴于Caspase的線粒體通路抑制鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)其凋亡,并探索RA-C1的抗腫瘤機(jī)制。方法:我們通過(guò)參照迷迭香酸結(jié)構(gòu)式合成了迷迭香酸類似物,命名為(R,E)-3-(3,4-二羥基苯基)-2-(3-(3,4-二羥基苯基)丙烯酰氨基)丙酸甲酯,簡(jiǎn)稱RA-C1。采用MTT法測(cè)定RA-C1對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系CNE-1、CNE-2以及HONE-1細(xì)胞的選擇抑制作用,同時(shí)測(cè)定其對(duì)人體正常的人血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和人類胚胎腎細(xì)胞293(HEK 293)的毒副作用。再者進(jìn)一步擬探討RA-C1對(duì)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的抑制的藥理學(xué)機(jī)制。分別采用Hoechst 33342染色和Annexin-V FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡,隨后采用JC-1熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位并采用Western blotting檢測(cè)細(xì)胞色素C、Bax、Bcl-2、Caspase 3、Caspase 9的表達(dá)情況。結(jié)果:隨著RA-C1的濃度逐漸增大,對(duì)CNE-1細(xì)胞的增殖抑制率也增大。同時(shí)Hoechst 33342染色和Annexin-V FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,隨著RA-C1濃度增大,凋亡特征越明顯,早期凋亡率越大。此外,隨著細(xì)胞色素C的釋放和Caspase-9和Caspase-3的激活,RA-C1能夠使線粒體膜電勢(shì)的下降,且加入抗氧化劑NAC能夠逆轉(zhuǎn)線粒體膜電位的下降趨勢(shì)。Western blotting結(jié)果顯示RA-C1能夠降低Bcl-2蛋白、升高Bax蛋白的表達(dá)。結(jié)論:RA-C1有效地抑制鼻咽癌細(xì)胞CNE-1細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡,其機(jī)制很可能是通過(guò)激活依賴Caspase的線粒體通路促進(jìn)CNE-1細(xì)胞的凋亡。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

細(xì)胞高分化鼻咽癌細(xì)胞株 CNE-1、CNE-2、HONE-1，胃癌腺癌 MCF-7 細(xì)胞、肝癌 SMMC-7721 細(xì)胞，均由廣西研究所提供，本課題組液氮中保存。人血管內(nèi)皮細(xì)胞（胎腎細(xì)胞 293（HEK 293）由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心鼻氮保存。以上細(xì)胞均是培養(yǎng)于含 10% 胎牛血清的 RPM100U/m L 青霉素和 100U/m L 鏈霉素，置于 37℃、相培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期觀察，1×PBS 緩沖液清洗，0.25 %DTA）消化傳代。藥物香酸（RA）（純度＞ 98%，購(gòu)自成都曼思特生物科技0.31，脂水分配系數(shù) ClogP = 1.0996，結(jié)構(gòu)式如下圖 1

定期觀察，1×PBS 緩沖液清洗，0.25 %胰TA）消化傳代。藥物酸（RA）（純度＞ 98%，購(gòu)自成都曼思特生物科技有.31，脂水分配系數(shù) ClogP = 1.0996，結(jié)構(gòu)式如下圖 1-1圖 1-1 RA 的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Figure 1-1 Chemical structure of RA-C1酸類似物 RA-C1（純度 ≥ 98%，分子量 373.36，分子式系數(shù) ClogP = 0.945，結(jié)構(gòu)式見圖 1-2），由廣西醫(yī)科大藥物化學(xué)教研室李清老師提供。

RA-C1 對(duì)人正常 HUVEC 和 HEK 293 細(xì)胞增殖作用的影響 (48 h). *P > 0.05 與空白對(duì)照（0 μmol/L）相比. ( x±s, n=3)Figure 3-1. The effects of RA-C1 on proliferation of HUVEC and HEK 293 cells. (48 h)*P > 0.05 compared with control group. ( x±s, n=3 ）T 法測(cè)定 RA-C1 對(duì)鼻咽癌 CNE-1 細(xì)胞的增殖抑制活性表 3-2 的 MTT 結(jié)果所示，各濃度的 RA-C1 組（0，10，20，30，l/L）分別作用于 CNE-1 細(xì)胞 24、48、72 h 后，RA-C1 組對(duì) CN長(zhǎng)的抑制作用隨著作用時(shí)間和藥物濃度的增大而增大，呈現(xiàn)時(shí)間依賴關(guān)系，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05)。計(jì)算得各時(shí)間點(diǎn) 為 32.84±2.28，28.28±2.42, 16.24±3.08 μmol/L。同時(shí) MTT 結(jié)果顯 作用 24 h 時(shí)，其濃度變化與細(xì)胞增值抑制率的線性關(guān)系較好，另旨在研究 RA-C1 對(duì) CNE-1 細(xì)胞早期凋亡的影響，故選擇 RA-C1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2828361