大豆異黃酮是存在于傳統(tǒng)中藥中的一種天然酚類化合物,也存在于淡豆豉中,對預(yù)防大多數(shù)慢性疾病有良好的作用。然而常規(guī)飼料中通常含有異黃酮類成分,會對該類成分的體內(nèi)檢測及其藥代動力學(xué)過程產(chǎn)生影響,造成不可避免的干擾。本論文分別研究不同飼料對大豆異黃酮在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)的影響,建立了一種高靈敏度,高選擇性的LC-MS/MS方法,同時檢測大鼠血漿中的大豆苷,大豆苷元,黃豆黃苷,黃豆黃素,染料木苷,染料木素成分,并成功測定了大鼠進(jìn)食常規(guī)含異黃酮飼料后體內(nèi)大豆異黃酮的動態(tài)變化水平,并將其應(yīng)用于該飼養(yǎng)條件下的大鼠給藥后體內(nèi)異黃酮濃度的校正,以消除常規(guī)飼料中的異黃酮成分對測定的干擾,從而應(yīng)用于大鼠口服淡豆豉提取物后的大豆苷,大豆苷元,黃豆黃苷,黃豆黃素,染料木苷,染料木素藥代動力學(xué)研究。并計算相關(guān)的臨床前藥代動力學(xué)參數(shù),比較不同飲食對大鼠血漿中的異黃酮成分測定的影響。本課題開展了以下四個方面的研究:一、淡豆豉中六種異黃酮成分在大鼠血漿中分析方法的建立與確證本研究采用LC-MS/MS技術(shù)同時檢測大鼠血漿中的六種異黃酮成分,建立了一種快速、靈敏、選擇性的LC-MS/MS法同時測定進(jìn)食不同飼料大鼠口服淡豆豉提取物后血漿中六種異黃酮的含量。該方法具有良好的選擇性、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和線性范圍,證明該方法適用于六種異黃酮成分藥代動力學(xué)研究。大鼠血漿采用乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取,以槲皮素作為內(nèi)標(biāo)物。色譜分析條件為反相C18柱(100 mm×3.0 mm),流動相組成為乙腈和水(含有0.1%甲酸),梯度洗脫,流速為0.4 ml/min,分析時間為13 min;電噴霧離子源,負(fù)離子(大豆苷元、大豆黃素、染料木素和黃豆黃苷)和正離子(大豆苷、染料木苷和IS)切換模式下進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測。生物樣品在各自的線性范圍內(nèi),線性關(guān)系良好(R0.99),日內(nèi)和日間精密度(RSD)均小于14.9%,準(zhǔn)確度(RE)在-9.3%~14.5%之間。分析物的回收率為85.7%~117%。該方法簡便、專屬、靈敏,可以為檢測同時存在于藥物和飼料中的活性成分的藥代動力學(xué)研究提供借鑒。二、淡豆豉異黃酮在進(jìn)食不含異黃酮飼料的SD大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究利用所建立的LC-MS/MS定量分析方法測定了進(jìn)食不含異黃酮飼料大鼠口服給藥淡豆豉后體內(nèi)大豆苷,大豆苷元,黃豆黃苷,黃豆黃素,染料木苷,染料木素的濃度,并繪制了六種大豆異黃酮藥物濃度-時間曲線(即藥時曲線)。根據(jù)測定濃度,采用非房室模型法估算藥代動力學(xué)參數(shù),并對藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析,用于大豆異黃酮藥代動力學(xué)過程進(jìn)行相關(guān)評價。三、淡豆豉異黃酮在進(jìn)食常規(guī)飼料的SD大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究本實驗提出了動態(tài)基線濃度校正的辦法。利用所建立的LC-MS/MS定量分析方法測定了進(jìn)食常規(guī)含異黃酮飼料的大鼠口服給藥淡豆豉后體內(nèi)大豆苷,大豆苷元,黃豆黃苷,黃豆黃素,染料木苷,染料木素的動態(tài)變化水平,通過在每個相應(yīng)的時間點(diǎn)血漿濃度減去被分析物的基線濃度,用校正后的血漿濃度測定了口服給藥后大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究的主要參數(shù),從而應(yīng)用于大鼠口服淡豆豉提取物后的體內(nèi)大豆異黃酮的藥代動力學(xué)研究。該方法簡便、專屬、靈敏,可以很好的去消除食源性化學(xué)成分的干擾,可以為檢測同時存在于藥物和飼料中的活性成分的藥代動力學(xué)研究提供借鑒。四、不同進(jìn)食大鼠灌胃給藥淡豆豉提取物后的比較藥代動力學(xué)與無異黃酮飲食喂養(yǎng)的大鼠相比,進(jìn)食含異黃酮常規(guī)飼料的大鼠表現(xiàn)出不同的藥動學(xué)參數(shù),表明含異黃酮的商業(yè)食品的攝入可能會影響六種異黃酮的口服給藥后大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)行為。這也提示我們,不同飲食對大鼠灌胃給藥淡豆豉提取物后的藥代動力學(xué)的影響不可忽視。
【學(xué)位單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

大豆苷元，黃豆黃苷，黃豆黃素，染料木苷，染料木素及內(nèi)標(biāo)槲皮素結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of daidzin, daidzein, glycitin, glycitein, genistin，genistein and quercetin (IS).

15圖 2 分析物和內(nèi)標(biāo)的產(chǎn)物離子質(zhì)譜圖Fig.2 Product ion mass spectra of the analytes and internal standards.

D3 大鼠血漿中大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素、染料木素的典無異黃酮飲食喂養(yǎng)大鼠的空白血漿樣品，B 空白血漿標(biāo)準(zhǔn)添加六個分析物及內(nèi)標(biāo)，C豆豉提取物 1.58 g/kg 后 4 小時收集大鼠血漿樣本，D 禁食 12 小時后商業(yè)飼料喂養(yǎng)鼠的基線血漿樣本）.3 Representative MRM chromatograms of genistein, genistin, daidzein, daidzin, glycite and quercetin (IS): (A) blank plasma sample obtained from a rat fed with isoflavones-fr blank plasma sample spiked with six analytes at LLOQ and IS, (C) plasma sample collet 4 h after oral administration of SSP extracts at a dose of 1.58 g/kg and (D) baseline plasample obtained from a rat fed with commercial food after 12 h fasting.準(zhǔn)曲線和 LLOQ準(zhǔn)曲線和 LLOQ 如表 2 所示，y 代表分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值， X

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2824589