發(fā)布時(shí)間：2020-09-22 15:24

　　 小葉金錢草(Hydrocotyle sibthorpioides Lam.),為傘形科天胡荽屬植物天胡荽,中國傳統(tǒng)中藥之一。論文主要工作如下:1、電噴霧質(zhì)譜對乙酸乙酯萃取物化學(xué)成分的初步鑒定。2、化學(xué)成分分離(層析柱色譜和高速逆流色譜分離)。3、波譜表征及結(jié)構(gòu)解析。4、抗炎活性研究。研究取得了以下研究成果和結(jié)論。1通過色譜質(zhì)譜聯(lián)用對小葉金錢草乙酸乙酯萃取物的化學(xué)組成進(jìn)行研究。以色譜峰信息(紫外光譜、質(zhì)譜數(shù)據(jù))、質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(天然有機(jī)化學(xué)質(zhì)譜圖集)提供的信息,對化學(xué)成分做出初步鑒定。2經(jīng)HPLC分析,采用葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)對小葉金錢草乙酸乙酯萃取物進(jìn)行初步分離。聯(lián)合HSCCC分離制備,采取正己烷-正丁醇-水溶劑體系對樣品進(jìn)行分離。最終從中分離得到14種單體化合物,經(jīng)~1H NMR和~(13)C NMR鑒定為:香草酸(1)、4-羥基苯甲酸(2)、原兒茶酸(3)、沒食子酸(4)、槲皮素(5)、山柰酚(6)、木犀草素(7)、芹菜素(8)、楊梅苷(9)、槲皮苷(10)、紫云英苷(11)、楊梅素3-O-半乳糖苷(12)、異楊梅樹皮苷(楊梅素3-O-葡萄糖苷)(13)和槲皮素3,3'-二-α-L-鼠李糖苷(16)。3采用DM 301型大孔樹脂粗分、葡聚糖凝膠純化、反相硅膠層析分離,結(jié)合梯度HSCCC從正丁醇萃取物中分離得到4種單體化合物。通過梯度HSCCC對分配系數(shù)差異較大的化合物15和化合物17進(jìn)行分離,并在溶劑中添加冰乙酸來改善物質(zhì)的分配系數(shù),為黃酮苷類化合物分離提供方法學(xué)參考。所得化合物經(jīng)~1H NMR和~(13)C NMR鑒定為:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(14)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(15)、槲皮素3,3'-二-α-L-鼠李糖苷(16)和楊梅素3,3'-二-α-L-鼠李糖苷(17)。4經(jīng)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞(RAW 264.7),使用ELISA試劑盒測試單體化合物對RAW 264.7中腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細(xì)胞介素(IL-6)的抑制水平。結(jié)果表明化合物2具有較強(qiáng)的抗炎活性,且有機(jī)酸類化合物活性要高于黃酮類化合物。
【學(xué)位單位】：青海師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285.5
【部分圖文】：

小葉金錢草化學(xué)成分分離鑒定及生物活性研究7圖1.1 小葉金錢草化學(xué)成分研究技術(shù)路線Fig1.1 The technological way of research for chemical constituent from Hydrocotylesibthorpioides Lam.1.5 研究意義及創(chuàng)新點(diǎn)目前小葉金錢草成分分離方面主要通過柱層析手段，但所需分離時(shí)間長、損耗溶劑多以及樣品不可逆吸附等。因此建立快速有效的分離方法意義重大。研究以高效液相色譜為基礎(chǔ)，對乙酸乙酯萃取物指紋圖譜進(jìn)行研究，并通過LC-MS/MS對其復(fù)雜化學(xué)成分進(jìn)行初步鑒定。其次，通過層析分離（葡聚糖凝膠、反相硅膠和大孔樹脂等）與高速逆流色譜相結(jié)合的方法，對乙酸乙酯和正丁醇萃取物化學(xué)成分進(jìn)行分離，成功從小葉金錢草中分離出包含同分異構(gòu)體在內(nèi)的黃酮苷、酚類等化合物，并通過核磁共振波譜對有機(jī)化合物特征信號進(jìn)行總結(jié)研究，為分離的天然有機(jī)化合物提供新思路以及對微量成分的快速富集提供借鑒。

小葉金錢草化學(xué)成分分離鑒定及生物活性研究2.4 HPLC-ESI-MS/MS 正負(fù)離子模式離子流色譜圖采用2.2.3所述色譜-質(zhì)譜分析方法獲得小葉金錢草乙酸乙酯萃取物正離子模式離子流色譜見圖 2.3，離子流色譜圖相關(guān)信息，見表 2.3。正離子模式下質(zhì)譜分子離子峰強(qiáng)度大于 1*106的質(zhì)譜信號共有 14 個(gè)（表 2.3），負(fù)離子模式下質(zhì)譜分子離子峰強(qiáng)度大于 1*106的質(zhì)譜信號共有 14 個(gè)（表 2.4）。2.2.5 中以正離子模式為例進(jìn)行分析，通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫以及文獻(xiàn)信息查閱對可能對應(yīng)的化合物進(jìn)行初步鑒定，負(fù)離子模式鑒定結(jié)果與正離子模式類似，這里不再贅述。

圖 3.1 小葉金錢草醇提浸膏（a）、乙酸乙酯萃取物（b）的高效液相色譜圖Fig 3.1 HPLC chromatogram of the Ethanol extract(a) and EtOAc-soluble fractions(b) of Hydrocotylesibthorpioides Lam.3.835 峰6212.2271.2AU0.001.00納米300.00 400.005.860 峰11205.1259.4293.8AU0.001.00納米300.00 400.009.493 峰18205.1253.5AU0.000.50納米300.00 400.0010.802 峰20207.5290.2323.6AU0.000.50納米300.00 400.0014.068 峰25206.3298.6355.9AU0.000.50納米300.00 400.0015.511 峰28206.3327.2AU0.000.200.40納米300.00 400.0017.793 峰32206.3266.5309.3AU0.2019.009 峰34206.3254.6A348.7U1.0019.775 峰35203.9254.6353.5AU0.50

【參考文獻(xiàn)】

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1 蒲首丞;中藥鵝不食草和天胡荽的化學(xué)成分及其抗腫瘤活性研究[D];天津大學(xué);2009年

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