目的:研究漆姑草提取物(HSJ)對人早幼粒白血病細胞HL-60和人慢性髓系白血病細胞K562的誘導(dǎo)分化作用,并探討其誘導(dǎo)分化的作用機制。方法:實驗設(shè)置藥物組(2000、1000、500、250、125、62.5μg/mL HSJ)、陽性藥對照組(100μg/mL吡柔比星)、陰性對照組,MTT法檢測HSJ作用HL-60和K562細胞24、48、72 h的增殖抑制率。根據(jù)MTT結(jié)果設(shè)置藥物組(250、125、62.5μg/mL HSJ)和陰性對照組,經(jīng)HSJ作用HL-60和K562細胞48 h后,采用NBT還原實驗法分別測定HL-60和K562細胞分化能力;瑞氏-吉姆薩染色法分別觀察HL-60和K562細胞形態(tài)的變化;流式細胞術(shù)檢測HL-60細胞分化相關(guān)抗原CD11b和CD14陽性細胞的表達率以及K562細胞分化相關(guān)抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b陽性細胞的表達率;Western-Blot法檢測HL-60細胞c-myc蛋白表達以及K562細胞GATA1和PU.1蛋白表達。結(jié)果:1.HSJ對HL-60細胞誘導(dǎo)分化研究實驗結(jié)果:(1)HSJ能夠抑制HL-60細胞的增殖,經(jīng)HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分別為251、156和102μg/mL。(2)NBT還原實驗結(jié)果顯示,HSJ能增加HL-60細胞的NBT還原能力,與陰性對照組的NBT還原率(0.83±0.29)%相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的NBT還原率(16.67±1.76)%、(10.83±1.26)%、(6.00±0.87)%提高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)瑞氏-吉姆薩染色觀察細胞形態(tài)發(fā)現(xiàn),與陰性對照組比較,給藥組HL-60細胞核漿比例減小,核仁變?yōu)槟I形或蠶豆形,出現(xiàn)明顯的細胞分化形態(tài)。(4)流式細胞術(shù)檢測HL-60細胞分化相關(guān)抗原陽性細胞的表達率發(fā)現(xiàn),和陰性對照組的CD11b陽性細胞表達率(41.13±0.42)%比較,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的CD11b陽性細胞表達率(66.77±4.27)%、(52.27±0.95)%、(46.27±0.38)%增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);和陰性對照組的CD14陽性細胞表達率(53.30±7.23)%比較,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的CD14陽性細胞表達率(96.63±0.23)%、(85.25±3.80)%、(63.84±0.78)%增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5)Western-Blot法檢測HL-60細胞分化相關(guān)蛋白c-myc的表達顯示,和陰性對照組的c-myc蛋白表達(0.71±0.02)相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組c-myc蛋白表達(0.38±0.01、0.45±0.01、0.58±0.02)降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.HSJ對K562細胞誘導(dǎo)分化研究實驗結(jié)果:(1)HSJ能夠有效抑制K562細胞的增殖,經(jīng)HSJ作用24 h、48 h和72h后的IC50分別為195、112和80μg/mL。(2)NBT還原實驗結(jié)果顯示,HSJ能增加K562細胞的NBT還原能力,與陰性對照組的NBT還原率(0.92±0.17)%相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的NBT還原率(23.47±3.15)%、(9.33±2.56)%、(4.00±0.47)%提高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)瑞氏-吉姆薩染色觀察細胞形態(tài)發(fā)現(xiàn),與陰性對照組比較,給藥組K562細胞核漿比例減小,出現(xiàn)分葉狀細胞核,部分細胞核凹陷,出現(xiàn)明顯的細胞分化形態(tài)。(4)流式細胞術(shù)檢測K562細胞分化相關(guān)抗原陽性細胞的表達率,和陰性對照組的CD11b陽性細胞表達率(58.70±9.60)%比較,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的CD11b陽性細胞表達率(97.53±3.26)%、(90.93±1.90)%、(78.30±6.62)%增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);和陰性對照組的CD14陽性細胞表達率(52.43±5.40)%比較,HSJ(250、125μg/mL)組的CD14陽性細胞表達率(94.57±2.37)%、(83.05±6.86)%增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);和陰性對照組的CD41a陽性細胞表達率(53.37±8.03)%比較,HSJ(250、125μg/mL)組的CD41a陽性細胞表達率(94.57±2.25)%、(86.07±3.68)%增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);和陰性對照組的CD42b陽性細胞表達率(46.10±10.32)%比較,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的CD42b陽性細胞表達率(94.47±4.05)%、(84.33±2.73)%、(69.63±6.88)%增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5)Western-Blot法檢測K562細胞分化相關(guān)蛋白表達顯示,和陰性對照組的GATA-1蛋白表達(0.02±0.01)相比,HSJ(250、125、62.5μg/m L)組的GATA-1蛋白表達(0.63±0.04、0.57±0.03、0.18±0.02)增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);和陰性對照組的PU.1蛋白表達(0.01±0.01)相比,HSJ(250、125、62.5μg/mL)組的PU.1蛋白表達(0.53±0.02、0.17±0.03、0.11±0.01)增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:HSJ對HL-60和K562細胞具有一定誘導(dǎo)分化作用,其能誘導(dǎo)HL-60細胞向成熟粒細胞、單核細胞方向分化;誘導(dǎo)K562細胞向成熟粒細胞、單核細胞、巨核細胞、紅細胞方向分化。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

18圖 2-2 HSJ 對分化相關(guān)抗原 CD11b 陽性細胞表達率的影響Fig.2-2 Effect of HSJ on the expression rate of CD11b positive cells

圖 2-3 HSJ 對分化相關(guān)抗原 CD14 陽性細胞表達率的影響Fig.2-3 Effect of HSJ on the expression rate of CD14 positive cells2.1.5 HSJ 對 HL-60 細胞 c-myc 蛋白表達的影響與陰性對照組比較，經(jīng)不同濃度 HSJ 作用后，c-myc 蛋白表達降低，差異有

圖 2-4HSJ 對 HL-60 細胞 c-myc 蛋白表達的影Fig.2-4 Effect of HSJ on c-myc protein expression in H2.2 HSJ 對 K562 細胞的誘導(dǎo)分化作用2.2.1 HSJ 對 K562 細胞增殖抑制率的影響

【參考文獻】

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本文編號：2823979