靈芝是我國的傳統(tǒng)中藥,它的藥用價值得到了全球的認(rèn)可。隨著中藥分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,靈芝基因組圖譜得以精細(xì)繪制,推薦靈芝成為藥用模式真菌。靈芝三萜化合物有著廣泛藥理作用,成為了現(xiàn)代中藥開發(fā)研究的源泉之一。由于靈芝三萜來源問題導(dǎo)致產(chǎn)量參差不齊,靈芝三萜高產(chǎn)菌株的篩選有待更多的研究。以傳統(tǒng)中藥理論為基礎(chǔ),結(jié)合最新的中藥鑒定分析技術(shù)、現(xiàn)代化工藝生產(chǎn)技術(shù),對靈芝三萜酸高產(chǎn)菌株進(jìn)行深入研究,對菌株篩選和應(yīng)用有重要意義。本文主要研究了靈芝菌株的培養(yǎng)、DNA條形碼的提取、ITS序列擴(kuò)增以及靈芝的鑒定分析。確定了供試菌株的種類為Ganoderma lucidum、Ganoderma sinense和Ganoderma applanatum。得到了赤芝(Ganoderma lucidum)、紫芝(Ganoderma sinense)、扁芝(Ganoderma applanatum)三種菌株的主導(dǎo)單倍型,這三種菌株的ITS序列長度分別為542 bp,544 bp,548 bp。實(shí)驗(yàn)表明靈芝ITS序列有很好的鑒定作用。針對靈芝三萜酸的提取,以適合藥企實(shí)際生產(chǎn)為基礎(chǔ),引入了比較具有創(chuàng)新性的響應(yīng)曲面法,通過建立數(shù)學(xué)模型對該提取方法的過程進(jìn)行優(yōu)化研究。實(shí)驗(yàn)表明以無水乙醇作為提取溶劑,采用回流法能提高靈芝三萜酸的提取率。通過模型分析和實(shí)際操作,最終得到的工藝參數(shù)為:提取時間2 h,液料比11:1,提取次數(shù)3次。在對靈芝單倍體研究的實(shí)驗(yàn)中,確定了0.6M甘露醇、1.5%酶解液在37℃進(jìn)行兩小時反應(yīng)作為分離方法。通過進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測,確定了靈芝的單倍體結(jié)構(gòu)。該方法操作簡單、穩(wěn)定性強(qiáng),為后續(xù)研究提供了很好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：武漢理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

圖 1-1 靈芝三萜化合物的 7 種基本骨架靈芝三萜化合物有很多種類。在陳若蕓[31]等的研究中詳細(xì)的介紹了 103 萜化合物的結(jié)構(gòu)，對此類化合物做了系統(tǒng)的研究。羅俊[32]等人通過實(shí)驗(yàn)分到了 19 個新型的三萜類化合物，并對其做了詳細(xì)的介紹。在最近的幾年時，科研工作者對于研究三萜類化合物，又發(fā)現(xiàn)了 25 種新的該類化合物，這合物存在于靈芝屬真菌的孢子或者子實(shí)體內(nèi)。這些新型的化合物主要從赤

分析提取結(jié)果（靈芝基因組）脂糖凝膠電泳，上述實(shí)驗(yàn)中所獲得的 DNA 產(chǎn)物可見的條帶，OD260/280值在1.8上下浮動，故依A 的質(zhì)量，能符合下一階段研究分析的要求。片段的擴(kuò)增得的16批次的靈芝菌株ITS、5.8s rDNA區(qū)段借助ITS4 成功擴(kuò)增，所收集得到的 PCR 產(chǎn)物片段約左側(cè)條帶為 DL2000 Marker。

靈芝菌株系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 辛天怡;姚輝;韓建萍;宋經(jīng)元;;當(dāng)歸藥材及其混偽品ITS2條形碼鑒定[J];科研信息化技術(shù)與應(yīng)用;2013年03期

2 陳士林;姚輝;韓建萍;辛天怡;龐曉慧;石林春;羅q;宋經(jīng)元;侯典云;石上梅;錢忠直;;中藥材DNA條形碼分子鑒定指導(dǎo)原則[J];中國中藥雜志;2013年02期

3 劉鋒;李鵬;黃秀旺;許建華;;靈芝三萜組分GLE的體內(nèi)外抗腫瘤作用[J];中國新藥雜志;2012年23期

4 韓建萍;李美妮;羅q;劉美子;陳曉辰;陳士林;;DNA條形碼鑒定洋金花及其偽品[J];藥學(xué)學(xué)報;2011年11期

5 章慧;張勁松;賈薇;馮娜;唐傳紅;楊焱;唐慶九;劉艷芳;潘迎捷;;超臨界CO_2萃取靈芝子實(shí)體三萜工藝優(yōu)化及其與醇提法比較研究[J];食用菌學(xué)報;2011年03期

6 曹佳;徐承水;;四種中草藥醇提取物降血糖作用的比較研究[J];魯東大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年03期

7 劉丙進(jìn);姚雪坤;張王月;羅俊;;靈芝三萜類化合物延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];海峽藥學(xué);2011年03期

8 魏曉霞;李鵬;許建華;李曄;;靈芝三萜組分GLA體內(nèi)外抗腫瘤作用的研究[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年06期

9 陳蕙芳;;紫芝中新的三萜及其抗HIV-1蛋白酶的活性[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2010年03期

10 賈曉斌;宋師花;陳彥;王麗靜;封亮;;超臨界CO_2萃取法和醇回流法提取靈芝中三萜類成分的比較[J];中成藥;2010年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 徐曉蘭;靈芝三萜和金銀花綠原酸生物合成途徑關(guān)鍵酶基因的挖掘及分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

本文編號：2822199