黃花白及(Bletilla ochracea Schltr)為蘭科(Orchidaceae)白及屬(Bletilla)多年生草本植物,以其假鱗莖入藥,常被用于制作面膜和白及膠等其他用品,在市場(chǎng)上可作為白及的替代品。其主要有效成分為多糖,是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用植物之一。至今,對(duì)黃花白及多糖的研究很少,其結(jié)構(gòu)還不清楚,關(guān)于其藥理藥效的研究更是鮮有報(bào)道�；诖�,本課題對(duì)黃花白及多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析,對(duì)其免疫調(diào)節(jié)抗腫瘤活性進(jìn)行了初步研究,為近一步開(kāi)發(fā)利用黃花白及資源提供資料。本論文主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.通過(guò)熱水提取法提取黃花白及多糖,利用響應(yīng)面分析法(Response surface methods,RSD)優(yōu)化黃花白及多糖提取工藝,結(jié)果顯示最佳提取條件為:提取溫度80℃、提取時(shí)間90 min、液料比30:1,并測(cè)得多糖得率率為26.45%。2.黃花白及粗多糖通過(guò)活性炭脫色,反復(fù)凍融法除蛋白后,經(jīng)DEAE-52纖維素陰離子柱層析純化,獲得超純水洗脫組分的中性多糖,進(jìn)一步通過(guò)葡聚糖凝膠G-150純化,獲得均一多糖。經(jīng)紫外全波長(zhǎng)掃描檢測(cè)為無(wú)蛋白無(wú)核酸的純黃花白及多糖(B.ochracea polysaccharide,BOP)。3.運(yùn)用高效凝膠色譜(HPGPC)測(cè)定BOP的分子量為4.9×105;氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)測(cè)定BOP由甘露糖(Man)和葡萄糖(Glc)組成,其比例為7.88:2.12;經(jīng)甲基化及紅外掃描測(cè)定糖苷鍵的主要連接方式為1-4糖苷鍵;通過(guò)一維核磁圖譜結(jié)果推斷BOP可能存在乙酰化。4.研究黃花白及多糖的藥理活性,首先以小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞為研究對(duì)象,用不同濃度的 BOP(0、50、100、200、400、800μg/ml)分別處理 CT26 細(xì)胞 24h或48 h,通過(guò)MTT法測(cè)定各組吸光值的變化,評(píng)價(jià)BOP在體外對(duì)CT26細(xì)胞活力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BOP在體外對(duì)CT26結(jié)腸癌細(xì)胞沒(méi)有明顯的殺傷和抑制效果。隨后建立小鼠結(jié)腸癌CT26荷瘤小鼠模型,實(shí)驗(yàn)分五組,每組八只。分別為生理鹽水模型組,陽(yáng)性對(duì)照5-FU組,BOP高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50 mg/kg)劑量組。各組干預(yù)兩周,通過(guò)觀察腫瘤變化及小鼠機(jī)體免疫相關(guān)指標(biāo)的變化,檢測(cè)評(píng)估BOP體內(nèi)抗腫瘤效果及其機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)BOP能夠減緩荷瘤小鼠體內(nèi)實(shí)體瘤的增長(zhǎng)速度并且呈劑量依懶性。(2)石蠟切片HE染色結(jié)果顯示BOP處理后的小鼠實(shí)體瘤細(xì)胞核損傷,細(xì)胞呈現(xiàn)彌散狀態(tài),細(xì)胞活性低。5.為了探究BOP在體內(nèi)抗腫瘤的機(jī)理,我們測(cè)定了各組荷瘤小鼠免疫細(xì)胞功能的變化,發(fā)現(xiàn)經(jīng)BOP處理的荷瘤小鼠,其脾淋巴細(xì)胞增殖能力和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力顯著增強(qiáng),并且BOP可促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放NO。血清檢測(cè)結(jié)果顯示BOP促進(jìn)了小鼠的細(xì)胞免疫因子TNF-α和IL-1β釋放。綜上結(jié)果推斷,BOP不能直接殺死或于抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),但可能會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能發(fā)揮抗腫瘤效果,從而抑制體內(nèi)實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)。
【學(xué)位單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

２．３結(jié)果與討論逡逑２．３．１單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析逡逑單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖２－１至２－３所示，提取溫度、提取時(shí)間、液料比對(duì)多糖得逡逑率有影響，液料比影響最小。隨著提取溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)和液料比的逡逑增加，多糖的得率均有增加，但是到達(dá)臨界點(diǎn)的時(shí)候多糖得率反而開(kāi)始下降，總逡逑體呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)。主要原因可能是隨著溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)，逡逑多糖能夠更好的溶解出來(lái)，但是溫度過(guò)高時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致多糖產(chǎn)生降解，濃度降逡逑低，從而影響多糖得率。液料比對(duì)多糖得率的影響可能是溶液增多更能充分的進(jìn)逡逑入細(xì)胞，使細(xì)胞更容易釋放多糖，雖然液料比對(duì)多糖得率的影響不是很明顯，但逡逑是溶液過(guò)多會(huì)使多糖濃度降低，損失過(guò)多也更容易降解。各個(gè)單因素對(duì)多糖得率逡逑影響的臨界點(diǎn)為提取溫度８０°Ｃ、提取時(shí)間９０邋ｍｉｎ、液料比３０：１。逡逑＾３０－１逡逑２邋２８－逡逑Ｉ２６逡逑0逡逑｜２２－逡逑ｏ逡逑°－２0Ａ邐

２．３結(jié)果與討論逡逑２．３．１單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析逡逑單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖２－１至２－３所示，提取溫度、提取時(shí)間、液料比對(duì)多糖得逡逑率有影響，液料比影響最小。隨著提取溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)和液料比的逡逑增加，多糖的得率均有增加，但是到達(dá)臨界點(diǎn)的時(shí)候多糖得率反而開(kāi)始下降，總逡逑體呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)。主要原因可能是隨著溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)，逡逑多糖能夠更好的溶解出來(lái)，但是溫度過(guò)高時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致多糖產(chǎn)生降解，濃度降逡逑低，從而影響多糖得率。液料比對(duì)多糖得率的影響可能是溶液增多更能充分的進(jìn)逡逑入細(xì)胞，使細(xì)胞更容易釋放多糖，雖然液料比對(duì)多糖得率的影響不是很明顯，但逡逑是溶液過(guò)多會(huì)使多糖濃度降低，損失過(guò)多也更容易降解。各個(gè)單因素對(duì)多糖得率逡逑影響的臨界點(diǎn)為提取溫度８０°Ｃ、提取時(shí)間９０邋ｍｉｎ、液料比３０：１。逡逑＾３０－１逡逑２邋２８－逡逑Ｉ２６逡逑0逡逑｜２２－逡逑ｏ逡逑°－２0Ａ邐

２．３結(jié)果與討論逡逑２．３．１單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析逡逑單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖２－１至２－３所示，提取溫度、提取時(shí)間、液料比對(duì)多糖得逡逑率有影響，液料比影響最小。隨著提取溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)和液料比的逡逑增加，多糖的得率均有增加，但是到達(dá)臨界點(diǎn)的時(shí)候多糖得率反而開(kāi)始下降，總逡逑體呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)。主要原因可能是隨著溫度的升高、提取時(shí)間的延長(zhǎng)，逡逑多糖能夠更好的溶解出來(lái)，但是溫度過(guò)高時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致多糖產(chǎn)生降解，濃度降逡逑低，從而影響多糖得率。液料比對(duì)多糖得率的影響可能是溶液增多更能充分的進(jìn)逡逑入細(xì)胞，使細(xì)胞更容易釋放多糖，雖然液料比對(duì)多糖得率的影響不是很明顯，但逡逑是溶液過(guò)多會(huì)使多糖濃度降低，損失過(guò)多也更容易降解。各個(gè)單因素對(duì)多糖得率逡逑影響的臨界點(diǎn)為提取溫度８０°Ｃ、提取時(shí)間９０邋ｍｉｎ、液料比３０：１。逡逑＾３０－１逡逑２邋２８－逡逑Ｉ２６逡逑0逡逑｜２２－逡逑ｏ逡逑°－２0Ａ邐

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2 陳怡a

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