研究芍藥苷(paeoniflorin)對四氯化碳(carbon tetrachloride)誘導的急性肝損傷與肝纖維化的保護作用及其機制。1.芍藥苷對四氯化碳誘導的急性肝損傷的保護作用及其機制:目的:研究芍藥苷對四氯化碳誘導的急性肝損傷的保護作用及相關機制。方法:將36只雄性C57BL/J小鼠隨機分成6組:空白組,芍藥苷對照組,四氯化碳模型組,低、中、高劑量芍藥苷干預組,每組6只�？瞻捉M、四氯化碳模型組均以等體積生理鹽水灌胃;芍藥苷對照組給等量100 mg/kg的芍藥苷灌胃;芍藥苷低、中、高給藥組分別按10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg灌胃給藥。每8 h一次,連續(xù)給藥3次,最后1次給藥30 min后,四氯化碳模型組及芍藥苷給藥組均予10%四氯化碳橄欖油溶液5μl/g腹腔注射,造成急性肝損傷模型。24 h后收集血清及肝組織進行下一步檢測。測定血清中丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase,ALT),天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性。蘇木精-伊紅染色,觀察肝臟病理學改變。酶標儀檢測caspase-3的活性評價肝細胞凋亡情況。試劑盒檢測肝組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、過氧化氫酶(catalase,CAT)的活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量評價肝臟抗氧化能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量。逆轉錄定量聚合酶鏈式反應(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)檢測肝組織中血紅素加氧酶-1 m RNA的表達。結果:與空白組相比,四氯化碳模型組小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶水平升高;蘇木精-伊紅染色結果顯示肝損傷程度明顯,caspase-3活性檢測表明肝細胞凋亡增加;肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性降低,丙二醛的含量升高,谷胱甘肽含量下降;血清中炎性因子腫瘤壞死因子-α和白介素-6的表達升高。與四氯化碳模型組相比,芍藥苷給藥組呈劑量依賴性降低四氯化碳誘導的小鼠血清丙氨酸氨基轉移酶,天門冬氨酸氨基轉移酶水平;改善肝臟的病理形態(tài)并減輕肝細胞凋亡;芍藥苷干預后可抑制四氯化碳誘導的肝臟氧化應激反應,肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性升高,丙二醛的含量降低,谷胱甘肽含量升高;顯著降低四氯化碳誘導的炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-6的表達;顯著升高四氯化碳誘導肝組織血紅素加氧酶-1的m RNA表達。結論:芍藥苷可保護四氯化碳誘導的急性肝損傷,該保護作用可能與減少肝細胞凋亡,減輕氧化應激,減少促炎細胞因子產(chǎn)生,促進血紅素加氧酶-1的表達有關。2.芍藥苷對四氯化碳誘導的肝纖維化的保護作用及其機制:目的:研究芍藥苷對四氯化碳誘導的慢性肝纖維化的保護作用及相關機制。方法:將24只雄性C57BL/J小鼠隨機分成4組:空白組,芍藥苷對照組,四氯化碳模型組,芍藥苷給藥組,每組6只。四氯化碳模型組及芍藥苷給藥組每周兩次腹腔注射10%5μL/g的四氯化碳橄欖油溶液7周建立四氯化碳肝纖維化模型。芍藥苷對照組和芍藥苷給藥組造模一周后按100 mg/kg灌胃給藥,每日一次。7周后,收集小鼠血清與肝組織進行下一步檢測。試劑盒測定血清丙氨酸氨基轉移酶,天門冬氨酸氨基轉移酶活性。蘇木精-伊紅染色,觀察肝臟的病理學改變。馬森染色、天狼星紅染色及羥脯胺酸含量測定評價肝臟纖維化程度。檢測肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性及丙二醛和谷胱甘肽含量評價肝臟抗氧化能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測肝臟中腫瘤壞死因子-α、白介素-6的含量。逆轉錄定量聚合酶鏈式反應檢測肝組織中α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原及血紅素加氧酶-1m RNA的表達。免疫印跡分析肝組織中α-平滑肌肌動蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原及血紅素加氧酶-1蛋白表達。酶標儀檢測肝臟血紅素加氧酶-1的活性。結果:與空白組相比,四氯化碳模型組小鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶,天門冬氨酸氨基轉移酶的活性水平升高;肝小葉結構遭到破壞,纖維組織明顯增生;肝臟纖維化程度加深;肝組織中α-平滑肌肌動蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原m RNA和蛋白表達增加;肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性降低,丙二醛的含量升高,谷胱甘肽含量下降;炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-6的表達升高。與四氯化碳模型組相比,芍藥苷給藥組小鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶,天門冬氨酸氨基轉移酶活性的水平明顯下降;肝小葉結構破壞程度減輕,纖維組織明顯減少;肝臟纖維化程度減輕;肝組織中α-平滑肌肌動蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原m RNA和蛋白表達下降;肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性升高,丙二醛的含量下降,谷胱甘肽含量升高;炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-6的表達下調(diào);肝臟中血紅素加氧酶-1的活性升高,表達增加。結論:芍藥苷可減輕四氯化碳誘導的肝纖維化,該保護作用可能與減輕肝臟氧化應激,減少促炎細胞因子產(chǎn)生,提高血紅素加氧酶-1的活性,促進血紅素加氧酶-1的表達有關。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1.芍藥苷的化學結構式Fig 1.The structure of paeoniflorin法物性 C57BL/J 小鼠 60 只，體重 18-22g，由重慶醫(yī)科大學公司t 南京建成生物工程研究t 南京建成生物工程研究

(A):ALT (B):AST*:與模型組相比 #:與空白組相比2 肝組織切片蘇木精-伊紅染色結果蘇木精-伊紅染色結果如圖 3 所示，空白組和芍藥苷對照組，肝小葉和肝清晰可見，肝細胞結構完整；四氯化碳組可觀察到嚴重的彌漫性小葉中心，肝臟中可見大量炎性細胞浸潤；而芍藥苷給藥組的小鼠肝細胞只有斑點，輕度炎癥反應。說明芍藥苷能有效減輕四氯化碳誘導的肝組織損傷。

圖 4. 芍藥苷對四氯化碳誘導的小鼠肝臟細胞凋亡的影響Fig.4 The effect of paeoniflorin on hepatocytes apoptoisis**p< 0.01，##p< 0.*:與模型組相比 #:與空白組相比 MDA，GSH 含量與 SOD、CAT，GSH-PX 活性檢測化碳在肝臟中代謝產(chǎn)生自由基引發(fā)脂質過氧化并最終導致肝毒了肝臟 MDA、GSH 含量及 SOD、CAT、GSH-PX 活性，評價化系統(tǒng)的影響。結果如表 9 所示，與空白組相比，四氯化碳模MDA 含量明顯增加，GSH 水平、SOD，CAT 和 GSH-PX 活性降相比，芍藥苷給藥組肝組織 MDA 含量顯著降低(p<0.05)；通過測結果得出，經(jīng)過芍藥苷治療的小鼠肝組織的 SOD 和 CAT 活性 和 GSH-PX 檢測結果表明：與模型組相比，芍藥苷給藥組的 GSp<0.05)，GSH-PX 活性增強(p<0.01)。通過實驗結果推測，芍藥苷急性肝損傷小鼠的保護作用可能是通過抑制四氯化碳所致急性

【參考文獻】

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1 Jun Xie;Jie Liu;Tu-Ming Chen;Qing Lan;Qing-Yu Zhang;Bin Liu;Dong Dai;Wei-Dong Zhang;Li-Ping Hu;Run-Zhi Zhu;;Dihydromyricetin alleviates carbon tetrachloride-induced acute liver injury via JNK-dependent mechanism in mice[J];World Journal of Gastroenterology;2015年18期

2 ;Mechanism underlying carbon tetrachloride-inhibited protein synthesis in liver[J];World Journal of Gastroenterology;2010年31期

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本文編號：2821318