研究芍藥苷(paeoniflorin)對四氯化碳(carbon tetrachloride)誘導(dǎo)的急性肝損傷與肝纖維化的保護(hù)作用及其機制。1.芍藥苷對四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用及其機制:目的:研究芍藥苷對四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機制。方法:將36只雄性C57BL/J小鼠隨機分成6組:空白組,芍藥苷對照組,四氯化碳模型組,低、中、高劑量芍藥苷干預(yù)組,每組6只�？瞻捉M、四氯化碳模型組均以等體積生理鹽水灌胃;芍藥苷對照組給等量100 mg/kg的芍藥苷灌胃;芍藥苷低、中、高給藥組分別按10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg灌胃給藥。每8 h一次,連續(xù)給藥3次,最后1次給藥30 min后,四氯化碳模型組及芍藥苷給藥組均予10%四氯化碳橄欖油溶液5μl/g腹腔注射,造成急性肝損傷模型。24 h后收集血清及肝組織進(jìn)行下一步檢測。測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT),天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性。蘇木精-伊紅染色,觀察肝臟病理學(xué)改變。酶標(biāo)儀檢測caspase-3的活性評價肝細(xì)胞凋亡情況。試劑盒檢測肝組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、過氧化氫酶(catalase,CAT)的活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量評價肝臟抗氧化能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量。逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)檢測肝組織中血紅素加氧酶-1 m RNA的表達(dá)。結(jié)果:與空白組相比,四氯化碳模型組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平升高;蘇木精-伊紅染色結(jié)果顯示肝損傷程度明顯,caspase-3活性檢測表明肝細(xì)胞凋亡增加;肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性降低,丙二醛的含量升高,谷胱甘肽含量下降;血清中炎性因子腫瘤壞死因子-α和白介素-6的表達(dá)升高。與四氯化碳模型組相比,芍藥苷給藥組呈劑量依賴性降低四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平;改善肝臟的病理形態(tài)并減輕肝細(xì)胞凋亡;芍藥苷干預(yù)后可抑制四氯化碳誘導(dǎo)的肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng),肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性升高,丙二醛的含量降低,谷胱甘肽含量升高;顯著降低四氯化碳誘導(dǎo)的炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-6的表達(dá);顯著升高四氯化碳誘導(dǎo)肝組織血紅素加氧酶-1的m RNA表達(dá)。結(jié)論:芍藥苷可保護(hù)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷,該保護(hù)作用可能與減少肝細(xì)胞凋亡,減輕氧化應(yīng)激,減少促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生,促進(jìn)血紅素加氧酶-1的表達(dá)有關(guān)。2.芍藥苷對四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化的保護(hù)作用及其機制:目的:研究芍藥苷對四氯化碳誘導(dǎo)的慢性肝纖維化的保護(hù)作用及相關(guān)機制。方法:將24只雄性C57BL/J小鼠隨機分成4組:空白組,芍藥苷對照組,四氯化碳模型組,芍藥苷給藥組,每組6只。四氯化碳模型組及芍藥苷給藥組每周兩次腹腔注射10%5μL/g的四氯化碳橄欖油溶液7周建立四氯化碳肝纖維化模型。芍藥苷對照組和芍藥苷給藥組造模一周后按100 mg/kg灌胃給藥,每日一次。7周后,收集小鼠血清與肝組織進(jìn)行下一步檢測。試劑盒測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性。蘇木精-伊紅染色,觀察肝臟的病理學(xué)改變。馬森染色、天狼星紅染色及羥脯胺酸含量測定評價肝臟纖維化程度。檢測肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性及丙二醛和谷胱甘肽含量評價肝臟抗氧化能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測肝臟中腫瘤壞死因子-α、白介素-6的含量。逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測肝組織中α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原及血紅素加氧酶-1m RNA的表達(dá)。免疫印跡分析肝組織中α-平滑肌肌動蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原及血紅素加氧酶-1蛋白表達(dá)。酶標(biāo)儀檢測肝臟血紅素加氧酶-1的活性。結(jié)果:與空白組相比,四氯化碳模型組小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性水平升高;肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞,纖維組織明顯增生;肝臟纖維化程度加深;肝組織中α-平滑肌肌動蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原m RNA和蛋白表達(dá)增加;肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性降低,丙二醛的含量升高,谷胱甘肽含量下降;炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-6的表達(dá)升高。與四氯化碳模型組相比,芍藥苷給藥組小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的水平明顯下降;肝小葉結(jié)構(gòu)破壞程度減輕,纖維組織明顯減少;肝臟纖維化程度減輕;肝組織中α-平滑肌肌動蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型膠原m RNA和蛋白表達(dá)下降;肝組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性升高,丙二醛的含量下降,谷胱甘肽含量升高;炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-6的表達(dá)下調(diào);肝臟中血紅素加氧酶-1的活性升高,表達(dá)增加。結(jié)論:芍藥苷可減輕四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化,該保護(hù)作用可能與減輕肝臟氧化應(yīng)激,減少促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生,提高血紅素加氧酶-1的活性,促進(jìn)血紅素加氧酶-1的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1.芍藥苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig 1.The structure of paeoniflorin法物性 C57BL/J 小鼠 60 只，體重 18-22g，由重慶醫(yī)科大學(xué)公司t 南京建成生物工程研究t 南京建成生物工程研究

(A):ALT (B):AST*:與模型組相比 #:與空白組相比2 肝組織切片蘇木精-伊紅染色結(jié)果蘇木精-伊紅染色結(jié)果如圖 3 所示，空白組和芍藥苷對照組，肝小葉和肝清晰可見，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整；四氯化碳組可觀察到嚴(yán)重的彌漫性小葉中心，肝臟中可見大量炎性細(xì)胞浸潤；而芍藥苷給藥組的小鼠肝細(xì)胞只有斑點，輕度炎癥反應(yīng)。說明芍藥苷能有效減輕四氯化碳誘導(dǎo)的肝組織損傷。

圖 4. 芍藥苷對四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝臟細(xì)胞凋亡的影響Fig.4 The effect of paeoniflorin on hepatocytes apoptoisis**p< 0.01，##p< 0.*:與模型組相比 #:與空白組相比 MDA，GSH 含量與 SOD、CAT，GSH-PX 活性檢測化碳在肝臟中代謝產(chǎn)生自由基引發(fā)脂質(zhì)過氧化并最終導(dǎo)致肝毒了肝臟 MDA、GSH 含量及 SOD、CAT、GSH-PX 活性，評價化系統(tǒng)的影響。結(jié)果如表 9 所示，與空白組相比，四氯化碳模MDA 含量明顯增加，GSH 水平、SOD，CAT 和 GSH-PX 活性降相比，芍藥苷給藥組肝組織 MDA 含量顯著降低(p<0.05)；通過測結(jié)果得出，經(jīng)過芍藥苷治療的小鼠肝組織的 SOD 和 CAT 活性 和 GSH-PX 檢測結(jié)果表明：與模型組相比，芍藥苷給藥組的 GSp<0.05)，GSH-PX 活性增強(p<0.01)。通過實驗結(jié)果推測，芍藥苷急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用可能是通過抑制四氯化碳所致急性

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Jun Xie;Jie Liu;Tu-Ming Chen;Qing Lan;Qing-Yu Zhang;Bin Liu;Dong Dai;Wei-Dong Zhang;Li-Ping Hu;Run-Zhi Zhu;;Dihydromyricetin alleviates carbon tetrachloride-induced acute liver injury via JNK-dependent mechanism in mice[J];World Journal of Gastroenterology;2015年18期

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本文編號：2821318