蛋白質(zhì)淀粉樣疾病屬于蛋白質(zhì)錯誤折疊疾病,常見的淀粉樣疾病包括阿爾茨海默癥、二型糖尿病、可傳播海綿狀腦病、帕金森病等。由于蛋白質(zhì)在形成其天然構(gòu)象過程中發(fā)生錯誤折疊,導(dǎo)致淀粉樣纖維沉積,誘發(fā)了諸如此類的疾病;因此這些疾病又可以統(tǒng)稱為蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病。不幸的是對該類疾病的治療,目前仍無特效藥物。有一種治療方案是通過對蛋白質(zhì)成纖維的各個階段進行干涉或抑制,從而阻止或延緩蛋白寡聚物及纖維的形成,達到防控乃至治療該類疾病的目的。前期研究表明,單黃酮如楊梅素、桑色素,能對雞溶菌酶的成纖維過程產(chǎn)生抑制作用。一方面本研究基于這些單黃酮小分子的結(jié)構(gòu)共性,進行擴大化研究,以發(fā)掘其衍生成分如穗花杉雙黃酮是否具有相似功效。實驗利用熒光檢測結(jié)合計算機模擬對接等方法,發(fā)現(xiàn)穗花杉雙黃酮同樣能抑制雞溶菌酶成纖維,但其抑制能力較單黃酮稍弱。另一方面,由于蛋白淀粉樣纖維常在心腦血管、神經(jīng)、腎臟等部位形成沉積,導(dǎo)致相關(guān)器官功能的衰退;基于我國中草藥資源豐富的優(yōu)勢,可以從抗心腦血管疾病的藥物中篩選對淀粉樣蛋白成纖維有抑制作用的藥物,并挖掘其中的有效抑制成分。本實驗從眾多中草藥中選取了三七、山茱萸、丹參、紅花、藏藥綠蘿花、雪茶、辣木籽作為原料,并以不同的方法對其中的天然產(chǎn)物進行提取。成纖維實驗是以經(jīng)典淀粉樣蛋白模型雞溶菌酶為研究對象,發(fā)現(xiàn)三七、綠蘿花、雪茶等的提取物,均可有效抑制淀粉樣纖維的形成,并呈現(xiàn)為劑量依賴性;其中以雪茶提取物的效果最佳。實驗提及的不同提取方法中,又以雪茶水提物效果更好,其IC50值約為0.018mg/mL。應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),可大致確定雪茶水提物中有效成分的分子量;然而其結(jié)構(gòu)的最終確定,仍有待進一步研究。抑菌實驗結(jié)果表明,以水為溶劑的雪茶水提物儲液,濃度高達5mg/mL時,不會對OD值為4時的重組菌產(chǎn)生明顯的抑菌作用。細胞水平的實驗中,選取能表達淀粉樣蛋白突變體的畢赤酵母做為處理對象。結(jié)果表明,雪茶水提物能夠具有濃度依賴性的抑制雞胱抑素淀粉樣突變體I66Q在胞外形成聚集體。當(dāng)藥物濃度達到1.5mg/mL時,會對蛋白的分泌產(chǎn)生一定的抑制作用,但藥物具體的胞內(nèi)作用機制仍有待探討。綜上,本研究基于前期研究發(fā)現(xiàn)的化合物結(jié)構(gòu)共性,進行了主體結(jié)構(gòu)和衍生結(jié)構(gòu)化合物的初步篩選,發(fā)現(xiàn)化合物主體結(jié)構(gòu)對其抑制成纖維能力至關(guān)重要;另一方面,在繼續(xù)挖掘天然產(chǎn)物小分子的嘗試中,我們鑒定出了幾種能抗淀粉樣蛋白成纖維的天然本草,其有效抑制成分的鑒定仍需要進一步的實驗數(shù)據(jù)支撐。
【學(xué)位單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

圖 0-1 淀粉樣纖維形成的歷程果表明，導(dǎo)致淀粉樣相關(guān)疾病的主要原因并 維 前 蛋 白 復(fù) 合 物 中 間 體 （ prefibrillar 義上叫做“寡聚體”。寡聚體有的是成纖維的

ThT熒光檢測穗花杉雙黃酮對溶菌酶成纖維的影響

圖 1-2 ANS 熒光檢測穗花杉雙黃酮對雞溶菌酶成纖維影響機模擬研究小分子與溶菌酶分子間的相互作用關(guān)材料用軟件及其功能 Office：進行結(jié)構(gòu)文件格式轉(zhuǎn)換acs 4.5.0：分子動力學(xué)模擬Dock 4.2.5.1：蛋白質(zhì)與小分子對接模擬Dock Tools 1.5.6：分子對接結(jié)果的可視化分析n8：數(shù)據(jù)分析和制圖軟件構(gòu)文件的準備

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本文編號：2819290