目的二仙湯由淫羊藿、仙茅、巴戟天、黃柏、當(dāng)歸、知母6味藥材等比例合煎而得,目前廣泛用于治療骨質(zhì)疏松癥,本次實(shí)驗(yàn)研究二仙湯對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松骨微結(jié)構(gòu)及行為的影響,明確其對(duì)氧化損傷成骨細(xì)胞的保護(hù)作用,以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)分析二仙湯抗衰老性骨質(zhì)疏松作用機(jī)制。方法以D-半乳糖(D-Gal)注射制備衰老性骨質(zhì)疏松模型,觀察二仙湯對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松大鼠血清生化指標(biāo)的影響;通過Micro-CT檢測(cè)骨密度和骨組織形態(tài)變化;使用Morris水迷宮測(cè)試方法進(jìn)行定位航行及空間探索實(shí)驗(yàn),分析每組大鼠間各項(xiàng)游泳數(shù)據(jù)的差異性;采用新生24h Wistar大鼠顱蓋骨分離得到原代成骨細(xì)胞,觀察二仙湯提取物及其有效成分對(duì)氧化損傷的成骨細(xì)胞的增殖(MTT)、活性氧簇(ROS)及凋亡的影響;并采用Western blot方法,觀察二仙湯有效成分對(duì)氧化損傷的成骨細(xì)胞骨形成蛋白R(shí)unx2的影響;使用Cytoscape軟件及靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)二仙湯抗衰老性骨質(zhì)疏松靶點(diǎn),富集主要KEGG通路,以Western blot方法驗(yàn)證二仙湯對(duì)p-Akt、p-mTOR、Beclin1等關(guān)鍵靶點(diǎn)的調(diào)控作用。結(jié)果與空白組相比,模型組血清GSH-Px水平降低、MDA水平升高、ALP水平降低、DPD和IL6水平上調(diào),骨密度明顯降低,骨量丟失嚴(yán)重,定位航行潛伏期時(shí)間延長(zhǎng),空間探索能力降低;與模型組相比,給藥組血清GSH-Px水平升高、MDA水平降低、ALP水平升高、DPD和IL6水平均降低,骨吸收速率降低,股骨骨密度增加,骨微結(jié)構(gòu)得到顯著改善,定位航行潛伏期時(shí)間縮短,空間探索能力顯著提高;二仙湯水提物、醇提物及有效成分(阿魏酸、仙茅苷、淫羊藿苷、知母皂苷BⅡ、水晶蘭苷、小檗堿)對(duì)氧化損傷成骨細(xì)胞模型的增殖活性有顯著保護(hù)作用,同時(shí)降低氧化損傷成骨細(xì)胞ROS水平,提高細(xì)胞抗凋亡和抗氧化能力。且二仙湯有效成分(阿魏酸、仙茅苷、淫羊藿苷、知母皂苷BⅡ、水晶蘭苷、小檗堿)具有提高氧化損傷成骨細(xì)胞Runx2蛋白表達(dá)量的作用;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果顯示二仙湯抗衰老性骨質(zhì)疏松癥靶點(diǎn)所涉及的生物過程與氧化應(yīng)激通路相關(guān),驗(yàn)證結(jié)果提示二仙湯藥效成分可降低成骨細(xì)胞p-Akt、p-mTOR蛋白的表達(dá),同時(shí)提高Beclin1的蛋白表達(dá)量,提示二仙湯可能通過抑制Akt/mTOR信號(hào)通路,使Akt和mTOR磷酸化水平減少,提高細(xì)胞自噬作用,抑制成骨細(xì)胞的氧化損傷。結(jié)論(1)二仙湯能夠有效抑制衰老性骨質(zhì)疏松大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平,提高骨密度,并增強(qiáng)衰老性大鼠的運(yùn)動(dòng)及學(xué)習(xí)能力。(2)二仙湯及其有效成分對(duì)氧化損傷成骨細(xì)胞的增殖作用、ROS水平、抗凋亡能力及Runx2的蛋白表達(dá)量均有顯著改善作用。(3)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明,二仙湯抗衰老性骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制可能與調(diào)控Akt/mTOR信號(hào)通路,促進(jìn)細(xì)胞自噬反應(yīng),提高成骨細(xì)胞的抗氧化和抗凋亡能力有關(guān)。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

12內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文（2019）應(yīng)骨吸收狀態(tài)[24]；而 IL-6 為前炎癥細(xì)胞因子，是反映骨丟失的一個(gè)重要信號(hào)，具有促進(jìn)破骨細(xì)胞活性及抑制破骨細(xì)胞凋亡的作用[25]。Micro-CT 可在微米級(jí)水平掃描高清的骨小梁結(jié)構(gòu)，并精確計(jì)量標(biāo)本骨參數(shù)，通過 Micro-CT 分析獲得的骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)可以觀測(cè)股骨骨密度變化，為骨組織提供了更為精準(zhǔn)的全新測(cè)試方法[26-27]。二仙湯對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松大鼠 GSH-Px、MDA 活性的影響：如圖 1-1-1 所示，與空白組相比，模型組大鼠血清中 GSH-Px 水平顯著降低，MDA 水平顯著升高；而給藥組 Ale、EXD3、EXD6、EXD12 大鼠均能顯著升高衰老性骨質(zhì)疏松大鼠血清中 GSH-Px 水平、降低衰老性骨質(zhì)疏松大鼠血清中的 MDA 水平。

仙湯對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松癥大鼠血清中 ALP、DPD 及 IL6 的影（*P<0.05，**P<0.01 VS.CON，#P<0.05，##P<0.01VS.D-Gal衰老性骨質(zhì)疏松癥大鼠骨組織形態(tài)和骨計(jì)量參數(shù)模型組大鼠 ROI 區(qū)域較空白組明顯空洞，骨小梁面積le、EXD3、EXD6、EXD12 可顯著改善骨小梁的骨微骨質(zhì)流失。

##P<0.01VS.D-Gal）二仙湯對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松癥大鼠骨組織形態(tài)和骨計(jì)量參數(shù)的影響：如圖1-1-3 所示，模型組大鼠 ROI 區(qū)域較空白組明顯空洞，骨小梁面積及數(shù)量顯著減少；給藥組 Ale、EXD3、EXD6、EXD12 可顯著改善骨小梁的骨微結(jié)構(gòu)，防止大鼠衰老導(dǎo)致的骨質(zhì)流失。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高大川;鄒本貴;;二仙湯加減治療絕經(jīng)后膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎臨床觀察[J];山西中醫(yī);2015年04期

2 劉慧;;用二仙湯治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的臨床效果觀察[J];當(dāng)代醫(yī)藥論叢;2014年07期

3 王水明;陳茶榮;;加味二仙湯合消癖散治療乳腺增生122例[J];江西中醫(yī)藥;2012年08期

4 王勤國(guó)，夏金平;參芍二仙湯治療閉經(jīng)30例體會(huì)[J];江蘇中醫(yī);1995年10期

5 裴中平;;應(yīng)用二仙湯醫(yī)案二則[J];山西中醫(yī);1987年05期

6 朱華;二仙湯加減臨床運(yùn)用[J];新中醫(yī);1988年07期

7 韓汝斌;二仙湯新用二則[J];四川中醫(yī);1989年10期

8 賀哲,譚彩霞;二仙湯加減治療腎炎合并紅斑狼瘡一例[J];新疆中醫(yī)藥;1989年02期

9 李仁福;;加味二仙湯治更年期綜合征[J];山東中醫(yī)雜志;1989年04期

10 李景天;;二仙湯治驗(yàn)四則[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;1989年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 鐘麗丹;施祖榮;童瑤;;中藥復(fù)方二仙湯從基礎(chǔ)到臨床研究的思路與方法——香港大學(xué)二仙湯課題組研究成果概述[A];2016全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科研究進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2016年第一屆江浙滬中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科高峰論壇論文及摘要集[C];2016年

2 楊明;陳經(jīng)寶;黃羽;朱首倫;陳立華;曾星;;二仙湯治療男性更年期綜合征臨床療效與細(xì)胞色素P450 CYP1A2,3A4基因多態(tài)性關(guān)系的研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十屆男科學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

3 童瑤;鐘麗丹;;二仙湯為基本方治療更年期相關(guān)癥狀的系統(tǒng)綜述[A];第九次全國(guó)中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2009年

4 鄒傳兵;丁永鋒;;二仙湯對(duì)男性更年期綜合征患者臨床癥狀的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十屆男科學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

5 張巧艷;年華;秦路平;鄭漢臣;;二仙湯中抗骨質(zhì)疏松化學(xué)成分的研究[A];第六屆全國(guó)藥用植物和植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

6 張春和;趙凡;李焱風(fēng);張富剛;袁卓s

本文編號(hào)：2819218