目的通過中藥湯劑長(zhǎng)期口服來預(yù)防和治療慢性關(guān)節(jié)疾病是傳統(tǒng)中醫(yī)獨(dú)特的“不治已病治未病”治療理論的一種具體體現(xiàn),考慮膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎多因“本虛標(biāo)實(shí)”誘因引起,于是在眾多治療骨性關(guān)節(jié)炎的方劑中選擇獨(dú)活寄生湯作為研究對(duì)象,以“固本培元祛邪”為治療的理論依據(jù),建立動(dòng)物OA模型后,以獨(dú)活寄生湯對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行干預(yù)。在造模后8周,對(duì)實(shí)驗(yàn)取出的軟骨標(biāo)本進(jìn)行大致組織形態(tài)學(xué)觀察,檢測(cè)關(guān)節(jié)液中前列腺素2(PGE2)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)的含量,檢測(cè)OA軟骨細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)和金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)的mRNA的表達(dá),檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)等,探索獨(dú)活寄生湯在預(yù)防和治療OA過程中的主要作用靶點(diǎn),為該方在預(yù)防和治療OA提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將40只實(shí)驗(yàn)用新西蘭大白兔隨機(jī)分為5組,即A空白對(duì)照組、B模型組、C獨(dú)活寄生湯低劑量組、D獨(dú)活寄生湯中劑量組、E獨(dú)活寄生湯高劑量組,每組各8只,除了空白對(duì)照組不做處理外,其他四組均采用改良伸直位石膏固定兔膝關(guān)節(jié)造模,造模后觀察2天后,開始進(jìn)行藥物干預(yù),獨(dú)活寄生湯組濃縮液灌胃給藥,每日一次;正常組和模型組給予生理鹽水灌胃,每日一次。造模8周,末次給藥后禁食12小時(shí)后,麻醉下空氣栓塞處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。處死動(dòng)物前,拍攝兔膝關(guān)節(jié)正側(cè)位X片,在切開實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膝關(guān)節(jié)前抽取關(guān)節(jié)液。1采用雙抗體夾心酶免疫吸附法(ELISA)測(cè)定動(dòng)物模型關(guān)節(jié)液中的IL-1β、IL-6、PGE2、腫瘤壞死因子,并比較各組間差異。2切開實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膝關(guān)節(jié),對(duì)實(shí)驗(yàn)兔子膝關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行大體觀察并參照文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,并比較各組間差異。采用HE染色后光學(xué)顯微鏡下觀察OA動(dòng)物模型軟骨組織形態(tài),并比較各組間差異。3采用Realtime-PCR檢測(cè)OA動(dòng)物模型軟骨細(xì)胞中MMP-3、TIMP-1的mRNA的表達(dá),比較各組間差異。4采用免疫組化法結(jié)合免疫蛋白印記法(Western blot)檢測(cè)OA動(dòng)物模型軟骨組織中蛋白多糖、II型膠原的影響,并比較各組間差異。結(jié)果1兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型建立后,肉眼觀察可見空白組動(dòng)物膝關(guān)節(jié)外觀上無明顯腫脹和畸形,膝關(guān)節(jié)切開后關(guān)節(jié)囊無明顯增厚,關(guān)節(jié)滑膜形態(tài)正常無明顯增生,關(guān)節(jié)軟骨完整有彈性,無缺損區(qū)域;模型組關(guān)節(jié)外觀腫脹明顯,切開膝關(guān)節(jié)后見關(guān)節(jié)囊增厚,關(guān)節(jié)軟骨顏色暗淡,軟骨磨損較嚴(yán)重,表面有潰瘍面形成,部分軟骨表面出現(xiàn)缺損;低劑量組關(guān)節(jié)外觀呈輕度腫脹,切開后關(guān)節(jié)囊略有增生,軟骨表面略顯粗糙,有微細(xì)裂紋產(chǎn)生,未見明顯缺損,無潰瘍面形成;中、高劑量組關(guān)節(jié)軟骨表面較光滑,無明顯軟骨缺損和裂紋形成,表面無潰瘍,滑膜無增生;空白組Mankin評(píng)分是最低的,相反模型組得出的評(píng)分最高,空白組和獨(dú)活寄生湯低、中、高劑量組在與模型組比較時(shí),顯示它們之間的統(tǒng)計(jì)差異有顯著性意義(P0.01)。2雙抗體夾心酶免疫吸附法(ELISA)測(cè)定顯示,干預(yù)后獨(dú)活寄生湯低、中、高劑量組IL-1β、腫瘤壞死因子、IL-6、PGE2等炎癥因子含量顯著低于模型組,差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),獨(dú)活寄生湯中、高劑量組IL-1β、腫瘤壞死因子、IL-6、PGE2含量要低于獨(dú)活寄生湯低劑量組,差距有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);獨(dú)活寄生湯中劑量組IL-1β、腫瘤壞死因子、IL-6、PGE2含量高于高劑量組,兩者比較差別并無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 Realtime-PCR檢測(cè)顯示,經(jīng)不同劑量獨(dú)活寄生湯治療后,可以降低OA動(dòng)物模型軟骨細(xì)胞中MMP-3的mRNA,而TIMP-1的mRNA表達(dá)較高,模型組關(guān)節(jié)軟骨中的MMP-3的mRNA表達(dá)較高,而TIMP-1的mRNA表達(dá)明顯降低,各組間比較有顯著差異性(P0.01)。4干預(yù)后獨(dú)活寄生湯組和模型組比較,獨(dú)活寄生湯中、高劑量組中Ⅱ型膠原表達(dá)與模型組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);低劑量組與模型組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),中、高劑量組之間比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);另外獨(dú)活寄生湯中、高劑量組GAG含量顯著高于模型組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);低劑量組高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);獨(dú)活寄生湯中、高劑量組GAG含量要高于獨(dú)活寄生湯低劑量組,差距有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);獨(dú)活寄生湯中劑量組GAG含量低于高劑量組,兩者比較差別并無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1用改良伸直型固定方式給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔子造模8周時(shí)間,可以建立兔膝OA模型。2不同劑量的獨(dú)活寄生湯均可以降低關(guān)節(jié)液中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、前列腺素2(PGE2)等炎癥因子的水平,獨(dú)活寄生湯也可以增加金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)的mRNA表達(dá),抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)的mRNA表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)Ⅱ型膠原合成,延緩其降解速度,增加軟骨基質(zhì)中GAG含量,在針對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎病變過程中能起到顯著的治療效果,對(duì)OA疾病有較好的預(yù)防性治療作用。3獨(dú)活寄生湯是以去除風(fēng)寒濕邪為主,輔以補(bǔ)肝腎、益氣血藥物,在治療膝KOA的過程中,方中諸位藥物配伍應(yīng)用,更甚單味藥的治療效果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明:獨(dú)活寄生湯的治療可以保護(hù)軟骨防治兔膝OA。
【學(xué)位單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

伸直位石膏固定造模

造模后佩戴項(xiàng)圈驅(qū)趕活動(dòng)

造模后B組X片

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2819177