選題依據(jù):癌癥目前已經(jīng)成為全球第一大致死因素,其中肺癌在所有癌癥中為致死率前三名。目前化療藥物在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生較大毒副作用。近年來研究表明中醫(yī)藥在腫瘤協(xié)同治療方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。黃芪是中醫(yī)臨床常用中藥,其中的黃酮類成分是黃芪的主要成分之一,已有研究表明黃芪黃酮類成分除了具有抗炎、抗病毒、心肌保護(hù)等作用外,還具有一定的抗癌作用。本課題組前期研究表明,黃芪總黃酮對(duì)化療藥物環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞降低具有顯著升高作用~([1])。本研究擬在前期研究基礎(chǔ)上,開展黃芪總黃酮協(xié)同順鉑抗肺癌的體內(nèi)藥效學(xué)和作用機(jī)制研究。目的:分析黃芪總黃酮對(duì)Lewis荷瘤小鼠肺癌模型的藥效學(xué)作用和機(jī)制,為進(jìn)一步開發(fā)用于腫瘤化療增效減毒藥物提供依據(jù)。方法:(1)采用課題組之前建立的方法制備黃芪總黃酮,并對(duì)其主要黃酮類成分進(jìn)行含量測(cè)定。(2)將動(dòng)物分為空白組、模型組、陽性藥組、聯(lián)合給藥低劑量組、聯(lián)合給藥中劑量組、聯(lián)合給藥高劑量組;通過皮下注射Lewis肺癌細(xì)胞建立Lewis荷瘤小鼠肺癌模型,通過腫瘤大小、腫瘤體積變化曲線、腫瘤重量、抑瘤率等指標(biāo)分析黃芪總黃酮對(duì)順鉑抗腫瘤增效的藥效學(xué)結(jié)果;通過臟器指數(shù)分析黃芪總黃酮對(duì)順鉑的減毒作用。(3)采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)黃芪總黃酮中成分發(fā)揮抗肺癌活性作用的靶點(diǎn),并采用western blot對(duì)預(yù)測(cè)的關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。(4)采用UPLC-MS血清代謝組學(xué)技術(shù)確定正常和肺癌小鼠模型的生物標(biāo)志物及代謝通路,并通過黃芪總黃酮對(duì)肺癌模型生物標(biāo)志物的調(diào)節(jié)作用進(jìn)一步分析黃芪總黃酮對(duì)順鉑的增效減毒作用機(jī)制。結(jié)果:(1)黃芪總黃酮中八種黃酮類成分的含量:毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量為9.82%、芒柄花苷含量為8.62%、(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷含量為11.24%、7-2’-二羥基-3’,4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷含量為3.71%、毛蕊異黃酮含量為0.54%、芒柄花素含量為0.02%、(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷含量為0.02%、7-2’-二羥基-3’,4’-二甲氧基異黃烷含量為0.01%等,8種黃芪黃酮總含量為33.98%。(2)通過腫瘤體積變化曲線、腫瘤重量和大小、抑瘤率,發(fā)現(xiàn)聯(lián)合給藥組抑瘤藥效強(qiáng)于陽性藥順鉑,說明黃芪總黃酮能夠增強(qiáng)順鉑的抗癌作用。通過臟器指數(shù)分析,黃芪總黃酮能減輕順鉑的免疫抑制作用。綜上所述,黃芪總黃酮不僅能夠增強(qiáng)順鉑的抗癌作用,也能降低順鉑的毒副作用,即黃芪總黃酮聯(lián)合順鉑對(duì)Lewis肺癌小鼠具有顯著的增效減毒作用。(3)采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)了黃芪總黃酮的46個(gè)作用靶點(diǎn),進(jìn)一步構(gòu)建了成分-靶點(diǎn)-通路-疾病網(wǎng)絡(luò),以及蛋白-蛋白互助作用網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果顯示,毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、紫檀烷、紫檀烷苷5個(gè)成分均可能為活性成分,從degree值和Betweenness值來看,毛蕊異黃酮葡萄糖苷與活性的相關(guān)性最大。此外,STAT3、ERBBA2、NOTCH1、TRP53、FGF2、ALB、VEGFA等靶點(diǎn)與黃芪總黃酮增強(qiáng)順鉑的抑瘤作用相關(guān)。聯(lián)合給藥高、中劑量組的IL-6水平與模型組相比顯著降低,接近空白水平;聯(lián)合給藥高、中、劑量組的STAT3蛋白水平低于陽性藥組,說明黃芪總黃酮可以下調(diào)STAT3水平,且具有劑量依賴性。推斷黃芪總黃酮可能通過下調(diào)IL-6水平以抑制STAT3蛋白表達(dá)水平發(fā)揮作用,即黃芪總黃酮可能通過IL-6/STAT3通路來抑制腫瘤生長。(4)采用多元統(tǒng)計(jì)分析確定空白組和模型組的差異代謝物30個(gè),包括脂肪酸、氨基酸等。然后比較這些差異代謝物在所有組別(空白組、模型組、陽性藥組、聯(lián)合給藥低劑量組、聯(lián)合給藥中劑量組、聯(lián)合給藥高劑量組)的含量變化,結(jié)果顯示黃芪總黃酮聯(lián)合給藥后可以更好的回調(diào)其中的5個(gè)代謝物,單獨(dú)順鉑不能回調(diào),但聯(lián)合黃芪總黃酮能回調(diào)4個(gè)代謝物。MetaPA代謝通路分析結(jié)果顯示,在4條與Lewis肺癌模型相關(guān)的代謝通路中,黃芪總黃酮可能通過調(diào)節(jié)原代膽汁酸生物合成代謝通路來達(dá)到對(duì)順鉑的增效減毒目的。結(jié)論:黃芪總黃酮可以顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用,代謝組學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析表明,其作用機(jī)制與IL-6/STAT3通路以及原代膽汁酸生物合成代謝通路相關(guān)。本研究為以黃芪為原料進(jìn)一步開發(fā)用于腫瘤化療增效減毒藥物提供了依據(jù)。
【學(xué)位單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5

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本文編號(hào)：2818773