銀杏葉提取物是銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L的干燥葉,在臨床上主要用于治療瘀血阻絡(luò)、胸痹心痛、中風(fēng)偏癱、肺虛咳喘、高脂血癥等癥狀。銀杏內(nèi)酯B(GB)是銀杏葉中提取物中的一種二萜類化合物,由6個五元環(huán)組成,是銀杏葉提取物的重要活性成分之一。本研究采用超高效液相-四級桿飛行時間質(zhì)譜(UHPLC-Q-TOF-MS)技術(shù)同時檢測和鑒定體內(nèi)和體外GB的代謝產(chǎn)物,總共檢測出53個GB代謝產(chǎn)物。同時本研究建立高效液相色譜-四極桿/線性離子阱質(zhì)譜(HPLC-QTRAP-MS/MS)法同時測定銀杏葉提取物中22種成分以及銀杏三七山楂茶多酚膠囊中4種皂苷類成分和6種黃酮類成分的含量。為銀杏葉提取物以及銀杏三七山楂茶多酚膠囊的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。豆腐果苷是從我國云南山龍眼科植物蘿卜樹H.erratica Hook.f的種子中提取的一種天然芳香酚類糖苷成分,經(jīng)常用于臨床治療神經(jīng)衰弱綜合征,血管性頭痛和三叉神經(jīng)痛。在本研究中,我們通過UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析了大鼠體內(nèi)豆腐果苷潛在的代謝產(chǎn)物,總共鑒定出20個豆腐果苷的代謝物。該實驗提供一種簡便和準(zhǔn)確的方法用于快速檢測和鑒定潛在的代謝產(chǎn)物,為進(jìn)一步研究豆腐果苷的藥理學(xué)和作用機制提供可靠依據(jù)。第一部分基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)的銀杏內(nèi)酯B的體內(nèi)外代謝研究目的:建立UHPLC-Q-TOF-MS方法同時檢測和鑒定GB體內(nèi)外代謝產(chǎn)物。方法:Agilent Poroshell 120 SB-C18色譜柱(2.1×100 mm,2.7μm),梯度洗脫,A為水相(0.1%甲酸-水),B為有機相(0.1%甲酸-乙腈),洗脫程序為0 min~1min,5%~5%B;1 min~5 min,5%~25%B;5min~15 min,25%~95%B。源溫為650oC,柱溫為40.0oC,電噴霧電離源(ESI),負(fù)離子選擇性離子檢測方式。SD大鼠分三組,糞便和尿液組6只,血漿組、膽汁組各6只,乙腈萃取,5%乙腈復(fù)溶,取上清液進(jìn)樣。MetabolitePilot~(TM) 2.0進(jìn)行代謝產(chǎn)物分析,并且使用PeakView~?2.2軟件和Masterview~?1.1軟件對色譜圖進(jìn)行分析。結(jié)果:共鑒定出53個代謝產(chǎn)物。包括RLMs中的17個代謝產(chǎn)物、18個血漿代謝產(chǎn)物、26個膽汁代謝產(chǎn)物、30個尿液代謝產(chǎn)物和37個糞便代謝產(chǎn)物。結(jié)論:本研究為銀杏內(nèi)酯B潛在代謝產(chǎn)物的檢測和鑒定提供一個強大而快速的工具。并且將有助于闡明萜類化合物的活性代謝產(chǎn)物以及潛在的生物學(xué)機制。第二部分HPLC-QTRAP-MS/MS法同時測定銀杏葉提取物中22種成分的含量目的:建立HPLC-QTRAP-MS/MS法同時測定銀杏葉提取物中22種成分的含量。方法:色譜柱:色譜柱為Wonda Cract ODS-2 C18柱(4.6 mm×150mm,5.0μm),流動相為0.1%甲酸水(C)-0.1%甲酸乙腈(D),梯度洗脫。離子源采用負(fù)離子檢測模式,采用多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行分析。結(jié)果:HPLC-QTRAP-MS/MS法測定15批銀杏葉提取物中22種成分的峰面積和質(zhì)量濃度均具有良好的線性關(guān)系(r≥0.9985),加樣回收率為89.25%~105.9%,精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性RSD值均小于3.94%。結(jié)論:本研究為銀杏葉提取物中22種成分的含量測定提供一種簡便、準(zhǔn)確高和靈敏度好的方法。第三部分銀杏三七山楂茶多酚膠囊中10種成分的含量測定目的:建立HPLC-QTRAP-MS/MS法同時測定銀杏三七山楂茶多酚膠囊中芹菜素、木犀草素、山奈酚、槲皮素、楊梅素、異鼠李素、三七皂苷R1、人參皂苷Re、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1的含量。方法:采用WondaCract ODS-2色譜柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1%甲酸水(C)-0.1%甲酸乙腈(D)為流動相進(jìn)行梯度洗脫。采用電噴霧離子源進(jìn)行負(fù)離子模式監(jiān)測,多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)進(jìn)行定量分析。結(jié)果:HPLC-QTRAP-MS/MS法測定3批銀杏三七山楂茶多酚膠囊中10種成分的峰面積和質(zhì)量濃度在濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系(r≥0.9985),加樣回收率為88.44%~100.7%,精密度RSD值為0.58%~1.82%。結(jié)論:該方法靈敏度高、專屬性好,可用于銀杏三七山楂茶多酚膠囊中黃酮類和皂苷類化學(xué)成分的含量測定。第四部分基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)的豆腐果苷的體內(nèi)代謝研究目的:建立UHPLC-Q-TOF-MS/MS法對豆腐果苷在SD大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物的研究。方法:Agilent Poroshell 120 EC-C_(18)色譜柱(2.1×100 mm,2.7μm),梯度洗脫,A為有機相(甲醇),B為水相(0.1%甲酸-水),洗脫程序為0 min~1 min 0%~5%B;1 min~10 min 5%~21%B;10 min~15 min21%~45%B;15 min~20 min 45%~95%B。離子源溫度為650oC,柱溫為40.0oC,電噴霧電離源(ESI),負(fù)離子選擇性離子檢測方式。12只SD大鼠分三組,糞便和尿液組4只,血漿、膽汁組各4只,乙酸乙酯萃取,甲醇復(fù)溶,取上清液進(jìn)樣。結(jié)果:本實驗共檢測出代謝產(chǎn)物20個(15個Ⅰ相代謝物,5個Ⅱ相代謝物)。豆腐果苷主要的代謝途徑為去甲基化、氧化、脫羥基化、氫化、脫羰基、葡糖苷酸結(jié)合和甲基化。結(jié)論:該研究采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)同時檢測和鑒定大鼠體內(nèi)豆腐果苷的代謝產(chǎn)物,為進(jìn)一步研究豆腐果苷的藥理作用提供科學(xué)依據(jù)。此外,為其他芳香酚類糖苷成分的代謝機制研究提供了實驗方法。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

銀杏內(nèi)酯B的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

銀杏內(nèi)酯B主要代謝物的結(jié)構(gòu)及其代謝途徑Fig.3StructuresandreactionproductsofmainmetabolitesandtheproposedmajormetabolicpathwaysofGB.

大鼠肝微粒體（A）、糞便（B）、尿液（C）、膽汁（D）、血液（E）中主要代謝物的提取離子流圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2817112