目的:對(duì)血人參乙酸乙酯部位化學(xué)成分進(jìn)行研究,并對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行體外保肝活性篩選。然后再對(duì)具有保肝活性的化合物2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin(11)的保肝作用進(jìn)行研究。方法:1.利用硅膠柱層析、MCI色譜柱、Sephadex LH-20、反相C18色譜柱、高效液相色譜法等不同色譜方法及技術(shù)進(jìn)行活性單體化合物的分離,并根據(jù)其理化性質(zhì)、波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定;2.利用最佳損傷濃度和時(shí)間的對(duì)乙酰氨基酚(APAP)誘導(dǎo)人的正常肝細(xì)胞(HL-7702細(xì)胞)損傷,建立肝細(xì)胞體外損傷模型,并對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行體外保肝活性篩選,四氮唑鹽還原法(MTT法)檢測(cè)細(xì)胞吸光度值,計(jì)算細(xì)胞存活率;3.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HL-7702細(xì)胞按照1×10~5個(gè)/mL濃度接種到6孔板中,每孔2 mL。實(shí)驗(yàn)分為3組,空白對(duì)照組;APAP損傷組;藥物保護(hù)組(40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)。置于37~oC、5%CO_2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。待細(xì)胞完全貼壁后空白組和模型組更換新的完全RPMI 1640培養(yǎng)液,藥物保護(hù)組更換為相應(yīng)濃度的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)12h后,除對(duì)照組外,其余各組加入最佳損傷濃度APAP溶液,作用12 h后,分別收集各組細(xì)胞上清液用于檢測(cè)還原性谷胱甘肽(GSH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙二醛(MDA)等指標(biāo),研究化合物11保肝作用。結(jié)果:1.從血人參乙酸乙酯部位共分離鑒定了11個(gè)化合物,經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定確定為:β-sitosterol-D-glucoside(1),五味子苷(2),山萘酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),豆甾醇(4),3,4,5-trimethoxy phenyl-O-β-D-Glucopyranoside(5),2-methoxy-4-(2'-hydroxyethyl)-phenol-1-O-β-D-glucopyranoside(6),2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl1-O-β-D-glucopyranosi de(7),高麗槐素(8),7-hydroxy-2-(4'-methoxyphenyl)chroman-4-one(9),毛蕊異黃酮(10),2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin(11)。其中化合物5、化合物6、化合物7、化合物9為首次從豆科植物中分離得到;化合物3、化合物10為首次從木藍(lán)屬植物中分離得到;化合物1為首次從血人參藥材中分離得到。2.經(jīng)過(guò)體外活性篩選,發(fā)現(xiàn)化合物2、9、10、11對(duì)AP AP誘導(dǎo)的人肝HL-7702細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用,細(xì)胞存活率明顯升高;3.與模型組相比化合物11能夠使APAP誘導(dǎo)HL-7702肝細(xì)胞損傷模型中ALT、AST活性降低(p(27)0.05),MDA含量降低(p(27)0.05),GSH含量升高(p(27)0.01)。結(jié)論:1.本研究在已有研究的基礎(chǔ)之上進(jìn)一步豐富和完善了血人參的化學(xué)成分研究;2.化合物2、9、10、11在體外對(duì)對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞HL-7702損傷具有保護(hù)作用,其中化合物10和化合物11保肝活性更好;3.化合物11對(duì)APAP誘導(dǎo)的人肝HL-7702細(xì)胞具有保護(hù)作用其保護(hù)作用可能是通過(guò)降低細(xì)胞中ALT、A ST活性降低,使MDA含量降低,GSH含量升高從而發(fā)揮其保肝活性。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R284;R285
【部分圖文】：

圖 1.3 化合物 1 結(jié)構(gòu)Figure 1.3 structure of compound 1化合物 2 白色針狀結(jié)晶(DMSO); ESI-MS m/z 491 [M H] ;1H NMR (500MHz，CD3OD) δ: 6.73 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2'), 6.69 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5'),6.60 (1H, s, H-2), 6.58 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6'), 6.12 (1H, s, H-5), 4.01 (2H,m, H-9), 3.93 (1H, dd, J = 9.8, 2.4 Hz, H-1''), 3.77 (1H, d, J = 5.6 Hz, H-7'), 3.76(3H, s, 3'-OCH3), 3.75 (3H, s, 3-OCH3), 3.67 (2H, m, H-9'), 3.41 (2H, m, H-5''),3.16 (2H, m, H-2'', 3''), 3.07 (1H, m, H-4''), 2.77 (2H, m, H-7), 2.02 (1H, m, H-8'),1.80 (1H, t, J = 10.4 Hz, H-8).13C NMR (126 MHz, CD3OD) δ: 148.92 (C-3'),147.15 (C-3), 145.83 (C-4'), 145.13 (C-4), 138.63 (C-1'), 134.31 (C-6), 129.10

州醫(yī)科大學(xué) 2019 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文具有 ABX 偶合系統(tǒng)的苯環(huán)，δ 6.60 (1H, s, H兩個(gè)氫質(zhì)子信號(hào)，δ 3.77 (1H, d, J = 5.6 Hz, H的氫信號(hào)表明結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)β構(gòu)型的糖。給出 12 個(gè)芳香碳信號(hào)，猜想存在兩個(gè)苯環(huán)δ 77.91、δ 75.00、δ 71.26、δ 69.38 四個(gè)連氧，另外還有 8 個(gè)脂肪族碳信號(hào)，其中δ56.43其余6個(gè)中，δ 66.91和δ 65.09為兩個(gè)連氧的碳δ 33.85 為四個(gè) SP3類(lèi)型的碳信號(hào)，說(shuō)明該化波譜數(shù)據(jù)同文獻(xiàn)[15]核對(duì)基本一致，確定該化）。

圖 1.6 化合物 4 結(jié)構(gòu)Figure 1.6 structure of compoun粉末（甲醇）：1H NMR (500 MHz, CD3Oz, 2H, H-1', 2'), 3.91 (dd, J = 12.0, 2.2 Hz3H, 4-OCH3), 3.65 (dd, J = 12.0, 6.7 Hz, (126 MHz, CD3OD) δ: 156.07 (C-5), 1 96.03 (2C-2, 6), 78.43 (C-5'), 78.06 (C-1.21 (4-OCH3), 56.51 (3, 5-OCH3). 波譜物 3,4,5-trimethoxyphenyl-β-D-ylucopy

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本文編號(hào)：2816082