發(fā)布時(shí)間：2020-09-11 10:14

　　 鬼針草(Bidens pilosa L.)系菊科鬼針草全草,具有活血散瘀,清熱解毒的作用。鬼針草在民間常用于治療多種癌癥,但關(guān)于其抗癌物質(zhì)基礎(chǔ)的研究報(bào)道不多,其抗癌活性部位、藥效作用及機(jī)制缺乏研究,質(zhì)量控制方法也有待完善。鑒于此,本文首先對(duì)鬼針草進(jìn)行初步提取、分離和活性部位篩選,對(duì)篩選出的部位進(jìn)行GC-MS分析,隨后對(duì)活性較強(qiáng)的石油醚部位進(jìn)行體內(nèi)抗癌藥效及作用機(jī)制研究,最后研究建立了鬼針草的HPLC-UV指紋圖譜分析方法。通過上述研究,以期為鬼針草的抗癌藥用開發(fā)奠定基礎(chǔ)。本文的主要研究內(nèi)容及學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)如下:1鬼針草的初步提取分離及體外抗腫瘤活性篩選首先采用75%乙醇提取鬼針草,制備總提物,分別依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到四個(gè)萃取部位;采用人肝癌HePG-2、肺癌A549及鼻咽癌CNE細(xì)胞對(duì)上述部位進(jìn)行體外抗癌活性篩選(MTT法),結(jié)果顯示,石油醚部位對(duì)上述三種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制活性最好,尤其是對(duì)肺癌A549細(xì)胞的作用最強(qiáng)(IC50=52.83±0.02μg/mL)。2鬼針草活性部位的質(zhì)譜分析研究采用氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)分析石油醚部位,通過NIST library2002譜庫(美國)檢索及面積歸一化法,鑒定出34個(gè)成分并獲得相關(guān)含量信息,為后續(xù)研究提供了參考。3鬼針草石油醚部位的體內(nèi)抗癌藥效學(xué)研究采用人肺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,設(shè)置低(90 mg/kg)、中(180 mg/kg)、高(360 mg/kg)劑量組,研究鬼針草石油醚部位的體內(nèi)抗癌作用。結(jié)果顯示,石油醚部位對(duì)A549實(shí)體瘤的增殖抑制作用呈劑量依賴關(guān)系,其中,高劑量組抑制作用最強(qiáng),達(dá)到50%。上述結(jié)果證實(shí),鬼針草石油醚部位確實(shí)具有一定的抗腫瘤活性。4鬼針草石油醚部位的抗癌藥效機(jī)制初步研究采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)變化,研究石油醚部位體外干預(yù)A549癌細(xì)胞后Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,石油醚部位體促進(jìn)了Caspase-3、Bax蛋白的表達(dá),同時(shí)降低了Bcl-2蛋白的水平,且作用呈明顯的劑量依賴性。上述結(jié)果表明,鬼針草石油醚部位可能通過細(xì)胞凋亡途徑發(fā)揮抗癌藥效作用。5鬼針草的HPLC指紋圖譜分析方法研究開展鬼針草HPLC-UV指紋圖譜的方法研究。對(duì)10批不同產(chǎn)地的鬼針草藥材進(jìn)行HPLC-UV分析,找出11個(gè)共有峰,建立了鬼針草的HPLC-UV譜圖;不同產(chǎn)地鬼針草藥材質(zhì)量存在一定差異,除安徽和廣西產(chǎn)地的鬼針草外,其他8個(gè)地區(qū)鬼針草的相似度都在80%以上。上述結(jié)果表明,所建立的HPLC-UV指紋圖譜分析方法可以用來分析鬼針草的質(zhì)量。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

圖 1.2 鬼針草四個(gè)萃取部位對(duì)肺癌細(xì)胞 A549 的抑制率曲線圖Fig 1.2 Inhibitory effects of ethanol extract from Bidens pilosa L on the growth of A549 in vitro

圖 1.2 鬼針草四個(gè)萃取部位對(duì)肺癌細(xì)胞 A549 的抑制率曲線圖Fig 1.2 Inhibitory effects of ethanol extract from Bidens pilosa L on the growth of A549 in vitro

圖 1.4 鬼針草四個(gè)提取部位對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的抑制率曲線圖Fig 1.4 Inhibitory effects of ethanol extract from Bidens pilosa L on the growth of CNE in vitro1.4 討論MTT 法是檢測(cè)細(xì)胞是否存活的方法之一，常被運(yùn)用于各類腫瘤細(xì)胞藥敏實(shí)驗(yàn)。其原是：新陳代謝活躍的細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶沉積在細(xì)胞中，使外源性 MTT 還原藍(lán)紫色的甲佨沉淀，而死細(xì)胞不能產(chǎn)生甲佨沉淀，通過聯(lián)系甲佨與活細(xì)胞數(shù)量即可獲得細(xì)胞數(shù)量。在實(shí)驗(yàn)中，用 DMSO 溶解沉淀后，通過酶標(biāo)儀在一定波長下測(cè)定其吸光度，可間接反映細(xì)胞活性。本章通過乙醇回流提取法獲得鬼針草粗提物，通過不同極性溶液萃取獲得四個(gè)萃取位（石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位）進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選。果表明，四個(gè)萃取部位對(duì)人肝癌 HePG-2 細(xì)胞、人肺癌 A549 細(xì)胞和人鼻咽癌 CNE 細(xì)胞

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本文編號(hào)：2816545