目的:通過(guò)建立博來(lái)霉素(bleomycin,BLM)誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化(Pulmonary fibrosis,PF)模型,觀察人參總皂苷(total ginsenoside,TG)對(duì)PF的效應(yīng),并探討其可能的作用機(jī)制。方法:通過(guò)單次氣管內(nèi)滴注BLM(5 mg/kg)建立C57BL/6J小鼠PF模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)對(duì)照組,模型對(duì)照組,TG給藥組(分別給藥14 d和28 d),潑尼松組(28 d)。以肺系數(shù),小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變,α-SMA的蛋白表達(dá),明確TG對(duì)PF不同階段的療效。檢測(cè)給藥14 d小鼠肺組織中E-cadherin、collagenIII、TGF-β1、TIMP-1、MMP-2、MMP-9、趨化因子(CX3CL1)及其受體CX3CR1蛋白表達(dá)。同時(shí)檢測(cè)血清中可溶型不規(guī)則趨化因子(soluble type fractalkine,sFKN)及CX3CR1含量。為進(jìn)一步探討TG對(duì)PF小鼠的作用是否與CX3CL1有關(guān),建立CX3CL1基因敲除(CX3CL1~(-/-))模式小鼠,以同性別同月齡野生型(wild-type,WT)小鼠對(duì)照研究,分別分為假手術(shù)對(duì)照組,模型組,TG 80 mg/kg組,制模后連續(xù)給藥14 d,觀察各組小鼠的一般狀態(tài),計(jì)算肺系數(shù),觀察各組小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變,檢測(cè)α-SMA及collagenIII的蛋白表達(dá),觀察TG對(duì)CX3CL1基因敲除后PF小鼠的療效變化。分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)給藥28 d小鼠肺組織TGF-β1、smad2、smad3、smad7、TIMP-1、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白表達(dá)。結(jié)果:BLM造模14 d后,模型組小鼠一般情況較差,小鼠肺系數(shù)明顯高于假手術(shù)組,肺泡炎明顯,膠原沉積增多,α-SMA、collagenIII、MMP-2、MMP-9、CX3CL1及其受體CX3CR1水平顯著升高,E-cadherin和TIMP-1水平顯著下降,TGF-β1蛋白表達(dá)量有升高趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TG給藥14 d可顯著改善模型小鼠一般情況,降低小鼠肺系數(shù),減輕肺泡炎,抑制膠原沉積,下調(diào)α-SMA、collagenIII、MMP-2、MMP-9、CX3CL1及其受體CX3CR1水平,提高E-cadherin和TIMP-1水平。造模14 d后,CX3CL1~(-/-)小鼠出現(xiàn)PF,但病損程度顯著輕于WT小鼠,TG對(duì)CX3CL1~(-/-)小鼠PF的緩解作用不及對(duì)WT小鼠PF的緩解作用。造模28 d后,與假手術(shù)組比,模型組小鼠一般情況較差,肺系數(shù)明顯增高,肺泡炎及纖維化明顯,肺組織中α-SMA蛋白表達(dá)明顯增加。TGF-β1、smad2、smad3、TIMP-1、MMP-2及MMP-9基因和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào),smad7基因和蛋白表達(dá)水平則顯著下調(diào)。與模型組比較,TG及潑尼松可明顯改善模型小鼠一般情況,降低小鼠肺系數(shù),改善肺泡炎及纖維化,TG引起PF模型小鼠α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3、TIMP-1、MMP-2及MMP-9水平顯著下調(diào),而顯著上調(diào)smad7水平。結(jié)論:TG可以改善小鼠PF,其作用機(jī)制在纖維化形成早期則與抑制不規(guī)則趨化因子至少部分相關(guān);而纖維化形成后期與調(diào)節(jié)TGF-β1/smad信號(hào)傳導(dǎo)通路和基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

23圖 1 TG 對(duì) PF 小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響 （HE、Masson Bar=50 μm，箭頭所指為蛋性表達(dá)）Fig.1 Effect of TG on lung histomorphology in PF mice (HE, Masson Bar=50 μm, pprotein expression was indicated by arrows,x SEM, n=6, *P<0.05 vs sham group and#vs model group）2.1.3 TG 對(duì) PF 小鼠α-SMA 及 collagenIII 蛋白表達(dá)的影響IHC 染色顯示，α-SMA 蛋白主要表達(dá)于氣管周?chē)�，collagenIII 蛋白表達(dá)于肺氣管、血管周?chē)�，以棕褐色染色為�?yáng)性表達(dá)。與 Sham 組比較，Model 組小鼠肺α-SMA 及 collagenIII 蛋白表達(dá)量明顯增加（P<0.05）。與 Model 組相比，TG 80 劑量組α-SMA 及 collagenIII 蛋白表達(dá)量減少（P<0.05）（見(jiàn)圖 2）。

24圖 2 TG 對(duì) PF 小鼠肺組織α-SMA 及 collagenIII 蛋白表達(dá)的影響（x SEM, n=5, Bar=箭頭所指為蛋白陽(yáng)性表達(dá))Fig.2 Effect of TG on α-SMA and collagenIII protein in lung tissue of PF mice (x SEMBar=20 μm, positive protein expression was indicated by arrows, *P<0.05 vs sham grou#P<0.05 vs model group)2.1.4 Western blotting 觀察 TG 對(duì) PF 小鼠 E-cadherin、TGF-β1、TIMP-1、M及 MMP-9 蛋白表達(dá)的影響Western blotting 顯示，與 Sham 組比較，Model 組小鼠 E-cadherin 及 TIMP-1水平明顯下降（P＜0.05）；MMP-2 及 MMP-9 蛋白水平顯著上調(diào)（P＜0.05MMP-2/TIMP-1 為 2.25，MMP-9/TIMP-1 為 1.84，MMPs/TIMPs 比例升高；而 TG蛋白水平有增高的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。TG 80 mg/kg 給藥 14 d 后起了 E-cadherin 蛋白水平的明顯上調(diào)及 MMP-9 蛋白水平顯著下調(diào)（P＜0.05），TI

圖 3 TG 對(duì) PF 小鼠 E-cadherin、TGF-β1、TIMP-1、MMP-2 及 MMP-9 蛋白表達(dá)的影響 (x SEM, n=5）Fig.3 Effect of TG on E-cadherin, TGF-β1, TIMP-1, MMP-2 and MMP-9 in PF mice (x SEM,n=5, *P<0.05 vs sham group and#P<0.05 vs model group)2.1.5 TG 對(duì) PF 小鼠 CX3CL1/CX3CR1 蛋白表達(dá)的影響IF 染色顯示，CX3CL1/CX3CR1 在肺部實(shí)變區(qū)域表達(dá)較多，以紅色染色為陽(yáng)性表達(dá)。與 Sham 組比較，Model 組小鼠肺組織中 CX3CL1 及 CX3CR1 蛋白表達(dá)增加。與Model 組相比，TG 80 mg/kg 給藥 14 d 后，肺組織中 CX3CL1 及 CX3CR1 蛋白表達(dá)減少，（見(jiàn)圖 4）。

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本文編號(hào)：2815951